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Atividade bloqueadora de anticorpos IgG específicos purificados de soros de pacientes atópicos a ácaros sobre a reatividade de IgE a Dermatophagoides pteronyssinus por ELISA inibiçãoSiman, Isabella Lima 22 June 2013 (has links)
One of the purposes of allergen-specific immunotherapy (SIT) is to modulate the humoral
immune response against allergens with significant increases in allergen-specific IgG1 and
IgG4 levels. These antibodies are associated with blocking activity by preventing IgE binding
to allergen and leading to reduced inflammatory responses. This study aimed to investigate in
vitro blocking activity of allergen-specific IgG antibodies on IgE reactivity to D.
pteronyssinus (Dpt) in sera from atopic patients. Dpt-specific IgG antibodies were obtained
from atopic sera and irrelevant IgG from non-atopic sera. IgG antibodies were purified by
ammonium sulfate precipitation followed by Protein-G affinity chromatography and evaluated
with regards to purity by SDS-PAGE and immunoreactivity by slot-blot and immunoblot
assays. The blocking activity was evaluated by inhibition ELISA. The electrophoretical
profile after salting-out precipitation showed an enrichment of high molecular weight proteins
in the precipitated fraction and strongly stained bands in the ligand fraction after
chromatography, compatible with molecular weight of human IgG. It was detected strong
immunoreactivity to IgG, negligible to IgA, and no reactivity to IgE and IgM. Dpt-specific
IgG fraction was capable to significantly reduce levels of IgE anti-Dpt, resulting in 35-51%
inhibition of IgE reactivity to Dpt in atopic patient sera. Allergen-specific IgG antibodies
purified using available and standardized methodology are able to inhibit IgE reactivity to Dpt
allergen extract. In addition to the clinical symptoms improvement (subjective parameter),
this approach reinforces that the intermittent measurement of serum allergen-specific IgG
antibodies will be an important objective laboratorial parameter that will help specialists to
follow their patients under SIT. / Uma das propostas da imunoterapia alérgeno específica é a de modular a resposta imune
humoral contra alérgenos, com aumento significativo nos níveis de IgG1 e IgG4 específicos.
Esses anticorpos estão associados com uma atividade bloqueadora, impedindo a ligação de
anticorpos IgE ao alérgeno e levando a uma redução nas respostas inflamatórias. Esse estudo
objetivou investigar a atividade bloqueadora, in vitro, de anticorpos IgG específicos sobre a
reatividade de IgE a D. pteronyssinus (Dpt) em soros de pacientes atópicos. Anticorpos IgG
específicos foram obtidos de soros de pacientes atópicos, e IgG irrelevante a partir de soros de
não atópicos, e depois purificados por precipitação com sulfato de amônio, seguido de
cromatografia de afinidade em Proteina G-agarose. A pureza desses anticorpos foi avaliada
por SDS-PAGE, a imunoreatividade por ensaios de slot-blot e immunoblot, e a atividade
bloqueadora por ELISA inibição. O perfil eletroforético, após precipitação com sulfato de
amônio, mostrou um enriquecimento de proteínas de alto peso molecular na fração
precipitada,e bandas fortemente coradas na fração ligante após a cromatografia, compatíveis
com o peso molecular de IgG humana. Foi detectada uma forte imunoreatividade para IgG,
leve para IgA, e nenhuma reatividade para IgE e IgM. A Fração IgG específica foi capaz de
reduzir significantemente os níveis de IgE anti-Dpt, resultando em 35-51% de inibição da
reatividade de IgE a Dpt em pools de soros de pacientes atópicos. Anticorpos IgG específicos
purificados, através de uma metodologia disponível e padronizada, são capazes de inibir a
reatividade de IgE ao extrato alergênico Dpt. Além da melhoria da sintomatologia clínica,
considerada um parâmetro subjetivo, essa abordagem reforça que a avaliação intermitente de
anticorpos IgG alérgeno-específicos pode ser uma ferramenta importante, auxiliando
especialistas a acompanharem seus pacientes em processo de imunoterapia específica. / Mestre em Ciências da Saúde
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Estudo da sensibilização de cães com dermatite atópica na região central do Rio Grande do Sul / Sensitization study of the dogs with atopic dermatitis in central region of Rio Grande do SulPereira, Desydere Trindade 12 February 2015 (has links)
Canine atopic dermatitis (CAD) is a common dermatosis, defined as a genetic-based disease,
which predisposes to cutaneous inflammation and pruritus, mediated by class IgE
immunoglobulins directed against specific antigens in most cases. Clinical diagnosis may be later
complemented by skin allergic and/or serological tests (ELISA). The aim of these tests is to
identify possible allergens in order to enable the clinicians to select candidate antigens for
allergen specific immunotherapy. This work aimed to identify the sensitization profile of 58 dogs
with atopic dermatitis diagnosis. All animals were submitted to intradermic test (IDT) and
screened for the presence of antibodies against different allergens using a serologic test. House
dust mites are described as the most frequent allergens in all continents. However, the positivity
to C. dactylon is not commonly described and may be characteristic for the region. With this
work it was possible to identify the main allergens involved in the immunologic response of
atopic dogs residing in Rio Grande do Sul, pointing to the importance to include C. dactylon in
screening tests for allergy. / A dermatite atópica canina (DAC) é uma dermatose comum, definida como uma doença de
cunho genético que predispõe à inflamação e ao prurido cutâneo, mediada por imunoglobulinas
da classe IgE dirigidas contra antígenos específicos na maior parte dos casos. O diagnóstico da
DAC é clínico e pode ser posteriormente complementado por testes alérgicos cutâneos e/ou
sorológicos. O objetivo desses testes é identificar possíveis alérgenos e, com isso, possibilitar ao
clínico a seleção de antígenos candidatos para a imunoterapia alérgeno-específica. No presente
trabalho buscou-se identificar o perfil de sensibilização de 58 cães diagnosticados com dermatite
atópica. Todos os animais foram submetidos ao teste intradérmico (TID) e à detecção de
anticorpos específicos para diferentes alérgenos através de teste sorológico (ELISA). Os ácaros
domiciliares são descritos como os alérgenos mais frequentes em todos os continentes.
Entretanto, a positividade ao C. dactylon não é usualmente descrita e pode ser característica da
região. Com esse trabalho foi possível identificar os principais alérgenos envolvidos na resposta
imunológica de cães atópicos residentes no Rio Grande do Sul, ressaltando-se a importância da
inclusão do extrato de C. dactylon em testes alérgicos.
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Avaliação da relevância do teste cutâneo de contato alérgico de leitura tardia no diagnóstico da sensibilização a Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalisLima, Ingrid Pimentel Cunha Magalhães de Souza 24 August 2018 (has links)
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Previous issue date: 2018-08-24 / O objetivo do presente estudo é avaliar a positividade do teste cutâneo de contato alérgico de leitura tardia para Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis em pacientes com doenças respiratórias como rinite alérgica e/ou asma com ou sem dermatite atópica. A maioria dos trabalhos existentes nessa área de pesquisa se refere ao emprego desse método diagnóstico na dermatite atópica, mas, neste estudo, a amostra é composta, principalmente, de pacientes com doenças respiratórias. Blomia tropicalis é um ácaro muito incidente no Brasil e só há dois trabalhos que envolvem o emprego deste ácaro da poeira domiciliar típico de países de clima tropical. Os pacientes foram selecionados pela história clínica e foram divididos em dois grupos: I- pacientes com doenças respiratórias, como asma e/ou rinite alérgica, com dermatite atópica e II- pacientes somente com doenças respiratórias. Foi realizado teste cutâneo de leitura imediata e teste de cutâneo de contato alérgico de leitura tardia para os três ácaros no mesmo dia. O teste de contato alérgico foi retirado em 48 horas. A análise estatísitica foi realizada em porcentagens e a tabela 1 apresenta as variáveis por sexo e por grupo estudado. Setenta e quatro pacientes, com idades de 2 a 60 anos, foram incluídos neste estudo; 16 no grupo I e 58 no grupo II. Considerando o teste cutâneo de leitura imediata, o ácaro mais prevalente foi o Dermatophagoides pteronyssinus, seguido pelo Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis. Em relação ao teste cutâneo de contato alérgico de leitura tardia, o ácaro que induziu maior positividade foi o Dermatophagoides farinae (78,4%), seguido pelo Dermatophagoides pteronyssinus (77%) e Blomia tropicalis (52,7%). Comparando o teste cutâneo de leitura imediata com o teste cutâneo de contato alérgico de leitura tardia, 53 pacientes (71,6%) foram positivos para ambos os testes, e 30 (56,6%) foram positivos ao mesmo ácaro. Foram identificados seis pacientes (8%) que tinham história clinica positiva para alergia e só apresentavam positividade no teste cutâneo de contato alérgico de leitura tardia. Estes resultados sugerem que o teste cutâneo de contato alérgico de leitura tardia é relevante e deve ser considerado como um teste diagnóstico adicional, em pacientes com história clínica positiva para doenças respiratórias, com teste cutâneo de leitura imediata negativa. / The aim of this study is to evaluate the positivity rates of atopy patch tests for Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae and Blomia tropicalis in patients with respiratory diseases such as asthma and allergic rhinitis with or without atopic dermatitis. Most studies have been performed with atopic dermatitis patients, but in our study, most of the patients had respiratory conditions. Blomia tropicalis is a mite that is prevalent in tropical areas, such as Brazil, and only two publications include these three mites, which are present in Brazil. The patients’ clinical histories were collected, and the patients were subjected to skin prick and patch tests with the three different house dust mites on the same day. The patch tests were examined 48 hours later, and then, the patients were divided into two groups: I- patients with respiratory diseases, such as asthma and/or rhinitis, and atopic dermatitis and II-patients with only respiratory diseases. The statistical analysis results are presented as percentages, and Table 1 presents the variables by gender and groups studied. A total of 74 patients ranging in age from 2 to 60 years old were included in this study; 16 patients were included in group I and 58 were included in group II. In the skin prick tests, the most prevalent mite that evoked a reaction was Dermatophagoides pterronyssinus, followed by Dermatophagoides farinae and
Blomia tropicalis. Regarding the atopy patch tests, the mite that most frequently induced a positive reaction was Dermatophagoides farinae (78.4%), followed by Dermatophagoides pteronyssinus (77%) and Blomia tropicalis (52.7%). A comparison between the skin prick and atopy patch tests revealed that 53 patients (71.6%) were positive on both tests, and 30 (56.6%) patients were positivite for the same mite. We found six patients (8%) who had a positive clinical history of allergy and only exhibited positivity on the atopy patch test. These results suggest that the mite atopy patch test is relevant and should be considered as an additional test for patients with clinical histories of allergic respiratory disease who have negative prick test results.
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