[pt] A administração de antimoniais no tratamento da
leishmaniose é uma rara oportunidade para estudar o
metabolismo de antimônio e das suas espécies químicas no
corpo humano. No presente trabalho, a técnica de
espectrometria de massa (ICPMS), acoplada ou não à
cromatografia iônica (IC) e à geração de hidretos (HG), foi
utilizada para determinação das concentrações de antimônio
total e de suas espécies químicas, Sb(III), Sb(V) e
trimetilantimônio (TMSbV) em amostras clínicas de pacientes
com leishmaniose e/ou de macacos Rhesus (Mucaca mulatta)
tratados com antimoniato de meglumina (AM). Diferentes
regimes terapêuticos foram avaliados, incluindo a
administração de doses baixa e alta (5 mg ou 20 mg de Sb(V)
por kg de massa corpórea). A concentração total de
Sb foi determinada após a decomposição de amostras por
HNO3/H2O2. Análises de especiação foram realizadas em
amostra de plasma e urina, através do acoplamento em linha
da CI ao instrumento de ICPMS. Duas colunas de troca
aniônica PRP-X100 foram utilizadas para a separação de
espécies empregando o EDTA (eluição isocrática: 4,7 mmol
L-1, 2,5% v/v metanol, pH 4,7) ou tampão de EDTA/fosfato
(eluição com variação abrupta de eluente: 1o. eluente - 20
mmol L-1 EDTA + 2 mmol L-1, pH 4,5; 2o. eluente - 50 mmol
L-1 (NH4)2PO4, pH 8,3) como fase móvel. As características
de desempenho de todos os métodos foram avaliadas e serão
apresentadas. Testes de estabilidades mostraram que as
espécies de antimônio estudadas são suficientemente estáveis
permitindo análises de especiação dentro de 24 horas após a
coleta. Em humanos, assim como em
macacos Rhesus, as concentrações de antimônio em amostras de
urina e/ou plasma coletadas após o período de administração
de AM, mostraram uma rápida cinética inicial de excreção
(t1/2 ~ 3 dias) da droga, seguida de duas fases mais lentas.
Determinou-se concentrações de Sb significativamente
maiores em frações de hemácias do que nas amostras de plasma
correspondentes, com exceção da
fase inicial de administração da droga (primeiras 12 horas).
A bioredução de Sb(V) a Sb(III) foi observada e confirmada
como um importante processo metabólico durante a fase de
eliminação. Nenhuma evidência de formação de
TMSb (V) foi obtida em nossos estudos. As concentrações de
antimônio em amostras de tecidos de macacos Rhesus coletadas
aproximadamente 60 dias após a última administração de AM
foram maiores na tireóide, seguida por fígado e baço. As
concentrações no fígado foram pelo menos 1000 vezes maiores
que a concentração basal. Amostras de cabelos/pelos e unhas
de pacientes e símios tratados com AM também apresentaram
altas concentrações, as quais
corresponderam ao histórico de administração da droga e
também mostraram que a incorporação de Sb nestes tecidos é
acumulativa, mesmo após o fim da administração de AM. Em
cabelos, mesmo após mais de 300 dias do fim do
tratamento as concentrações de Sb não retornaram ao nível basal. / [en] Clinical applications of antimonials in the treatment of
leishmaniasis are a unique opportunity to investigate the
metabolism of antimony and its species in the human body. In
this work, inductively coupled plasma mass spectrometry
(ICPMS), without or in combination with ion chromatography
(IC) and flow injection hydride generation (FI-HG), has been
used for the determination of total antimony concentrations
[Sb] and three of its expected species, Sb (III), Sb (V) and
trimethyl antimony (TMSbV), in clinical samples of
leishmaniasis patients and/or of rhesus monkeys (Mucaca
mulatta) treated with meglumine antimoniate
(AM). Different drug administration schemes were evaluated,
including low and high dose administration (5 mg or 20 mg of
Sb5+ per kg of body mass). Total [Sb] was assayed after wet
decomposition of the samples by HNO3/H2O2. Speciation
analysis was performed on plasma and urine samples using IC
on-line coupled to the ICPMS instrument. Two PRP-X100 anion
exchange columns were used for species separation employing
EDTA (isocratic elution: 4.7 mmol L-1, 2.5% v/v
methanol, pH 4.7) or EDTA/phosphate buffer (step elution:
1st eluent - 20 mmol L-1 EDTA + 2 mmol L-1 KHP, at pH 4.5;
2nd eluent - 50 mmol L-1 (NH4)2HPO4 at pH 8.3) as the mobile
phases. Performance characteristics of all methods were
evaluated and are presented. Stability tests showed that all
studied antimony species are sufficiently stable to allow
speciation analysis within 24 hours after
collection. In humans, as well as in rhesus monkeys, the
concentrations of antimony in urine and/or plasma samples
measured after the administration period of MA, showed rapid
excretion kinetics (t1/2 ~ 3 days) of the drug followed by
two slower ones. Significantly higher concentrations of [Sb]
were measured in erythrocyte fractions than in corresponding
plasma samples, excepting the very initial phase of drug
administration (first 12 hours). Bio-reduction of Sb5+ to
Sb3+ was observed and confirmed as an important metabolic
process during the slow
elimination phase. No evidence for the formation of TMSbV
was so far obtained in our studies. Antimony concentrations
in tissue samples of rhesus monkeys 60 d after the last AM
administration were highest in thyroid, followed by liver
and spleen. Liver concentrations were at least 1000 times
the basal concentrations. Hair and nail samples from treated
patients and monkeys had also very high Sb
concentrations, which matched drug administration history
and showed also that incorporation of Sb into these tissues
is continuing, even after ceasing AM application. In human
hair, more than 300 days are required for the return of
antimony concentrations to basal levels.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:puc-rio.br/oai:MAXWELL.puc-rio.br:12257 |
| Date | 29 September 2008 |
| Creators | FLAVIA DE ALMEIDA VIEIRA |
| Contributors | NORBERT FRITZ MIEKELEY |
| Publisher | MAXWELL |
| Source Sets | PUC Rio |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | TEXTO |
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