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[en] DEVELOPMENT OF AN ANALYTICAL METHOD FOR THE DETERMINATION OF TMSB, SB(V) AND SB(III) IN CLINICAL SAMPLES BY IC-ICPMS / [pt] DESENVOLVIMENTO DE UMA METODOLOGIA PARA DETERMINAÇÃO DE TRIMETIL ANTIMÔNIO, SB(V) E SB(III) EM AMOSTRAS CLÍNICAS POR IC-ICPMSFLAVIA DE ALMEIDA VIEIRA 03 February 2004 (has links)
[pt] A administração de antimoniais no tratamento da leishmaniose é uma rara oportunidade para estudar o
metabolismo de antimônio e das suas espécies químicas. Tais estudos são de grande relevância, uma vez que não se tem conhecimento sobre os metabólitos formados no corpo humano e da sua possível importância na erradicação dos parasitas causadoras da doença, assim como sobre os mecanismos de
eliminação deste elemento tóxico. Ao contrário do arsênio, existem poucas metodologias reportadas para a análise de especiação de antimônio em amostras clínicas. O presente trabalho é uma continuação de pesquisas realizadas e publicadas anteriormente, nas quais a técnica de espectrometria de massas (ICPMS) acoplada à cromatografia iônica de alta eficiência IC-(HPLC) foi utilizada para separação e quantificação, em linha, de antimoniato de N-metil glucamina, Sb(V) e Sb(III) em amostras de plasma e
urina. Assim, serão apresentados resultados recentes obtidos com o emprego de uma coluna com melhor resolução (Metrosep - A Supp5; 250 mm x 4,0 mm; Metrohm, Suíça) na separação de trimetil antimônio (TMSb), Sb(V) e Sb(III). Testes de otimização mostraram que uma solução de EDTA (0,006 mol L-1, pH 4,7) é adequada como fase móvel para a separação das três espécies. Os tempos de retenção para
TMSb, Sb(V) e Sb(III) foram de 44,2 s, 150,6 s e 548,4 s, respectivamente, permitindo uma perfeita e repetitiva (DPR <3 por cento) separação dessas espécies. Repetitividades melhores que 4 por cento foram também obtidas na quantificação das áreas dos três picos cromatográficos correspondentes. Curvas analíticas, construídas a partir de soluções padrão das espécies em solução aquosa e em amostras de urina fortificadas, apresentaram ótima linearidade com coeficientes de correlação maiores que 0,999. Para
volumes de amostra de 100 uL, injetados na coluna e utilizando-se o espectrômetro ELAN 5000 (PE-Sciex, EUA) como detector multielementar, em combinação com o nebulizador concêntrico tipo Meinhard e uma câmara ciclônica, limites absolutos de quantificação de 0,02 ng de antimônio foram obtidas para as três espécies estudadas. Testes de estabilidade mostraram que Sb(V) sofre alterações químicas já em intervalos de tempo relativamente curtos (maiores que 8h em água, e que 4h em urina fortificada)
enquanto que TMSb e Sb(III) evidenciaram estabilidades consideravelmente maiores em ambos os meios. / [en] Clinical applications of antimonials in the treatment of leishmaniasis are a unique opportunity to study the
metabolism of antimony and its species in the human body. As little is known about antimony metabolism, studies are required to improve the knowledge about the excretion mechanism of this toxic element; in particular, those which deal with antimony metabolites and the action of antimonials for the eradication of leishmaniasis causing parasites. In contrast with its chemical analogue arsenic, only a few methods concerning antimony speciation in clinical samples have been described in the literature. The aim of the present work was to improve a method previously developed to separate and quantify N-methyl meglumine
antimoniate, Sb(V) and Sb(III) in blood plasma and urine samples by using anion exchange high performance liquid chromatography (IC-HPLC) coupled with inductively-coupled plasma mass spectrometry (ICPMS). Results on the application of an ion chromatography column (Metrosep - A
Supp5; 250 mm x 4.0 mm; Metrohm, Swiss) with better resolution for the separation of TMSb, Sb(V) and Sb(III) are presented. The optimum conditions for the separation of the three species were established with 0.006 mol L-1 EDTA at pH 4.7 as the mobile phase. The retention times for TMSb, Sb(V) and Sb(III) were 44,2 s, 151,6 s and 548,4 s, respectively. A robust linear relationship between concentration and peak area was obtained for the three species, both, in aqueous standard solutions and spiked urine samples, with an associated correlation factor higher than 0,999. Relative standard deviations below 4 percent have been obtained in the peak area quantification mode. When using the ELAN 5000 (PerkinElmer-Sciex, EUA) equipped with a concentric Meinhard nebulizer in combination with a cyclonic spray chamber as detector, and employing a 100-uL injection loop in the HPLC system, typical absolute limits of quantification were 0.02 ng of Sb for each of the three antimony species studied. Stability tests showed that Sb(V) suffers chemical alterations within a short time period (>8h in aqueous solutions and >4h in spiked urine), whereas TMSb and Sb(III) presented better stability conditions in both solutions.
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[en] STUDIES ON THE BEHAVIOR OF MEGLUMINE ANTIMONIATE IN THE HUMAN BODY IN RHESUS MONKEYS / [pt] ESTUDOS SOBRE O COMPORTAMENTO DO ANTIMONIATO DE MEGLUMINA NO CORPO HUMANO E EM MACACOS RHESUSFLAVIA DE ALMEIDA VIEIRA 29 September 2008 (has links)
[pt] A administração de antimoniais no tratamento da
leishmaniose é uma rara oportunidade para estudar o
metabolismo de antimônio e das suas espécies químicas no
corpo humano. No presente trabalho, a técnica de
espectrometria de massa (ICPMS), acoplada ou não à
cromatografia iônica (IC) e à geração de hidretos (HG), foi
utilizada para determinação das concentrações de antimônio
total e de suas espécies químicas, Sb(III), Sb(V) e
trimetilantimônio (TMSbV) em amostras clínicas de pacientes
com leishmaniose e/ou de macacos Rhesus (Mucaca mulatta)
tratados com antimoniato de meglumina (AM). Diferentes
regimes terapêuticos foram avaliados, incluindo a
administração de doses baixa e alta (5 mg ou 20 mg de Sb(V)
por kg de massa corpórea). A concentração total de
Sb foi determinada após a decomposição de amostras por
HNO3/H2O2. Análises de especiação foram realizadas em
amostra de plasma e urina, através do acoplamento em linha
da CI ao instrumento de ICPMS. Duas colunas de troca
aniônica PRP-X100 foram utilizadas para a separação de
espécies empregando o EDTA (eluição isocrática: 4,7 mmol
L-1, 2,5% v/v metanol, pH 4,7) ou tampão de EDTA/fosfato
(eluição com variação abrupta de eluente: 1o. eluente - 20
mmol L-1 EDTA + 2 mmol L-1, pH 4,5; 2o. eluente - 50 mmol
L-1 (NH4)2PO4, pH 8,3) como fase móvel. As características
de desempenho de todos os métodos foram avaliadas e serão
apresentadas. Testes de estabilidades mostraram que as
espécies de antimônio estudadas são suficientemente estáveis
permitindo análises de especiação dentro de 24 horas após a
coleta. Em humanos, assim como em
macacos Rhesus, as concentrações de antimônio em amostras de
urina e/ou plasma coletadas após o período de administração
de AM, mostraram uma rápida cinética inicial de excreção
(t1/2 ~ 3 dias) da droga, seguida de duas fases mais lentas.
Determinou-se concentrações de Sb significativamente
maiores em frações de hemácias do que nas amostras de plasma
correspondentes, com exceção da
fase inicial de administração da droga (primeiras 12 horas).
A bioredução de Sb(V) a Sb(III) foi observada e confirmada
como um importante processo metabólico durante a fase de
eliminação. Nenhuma evidência de formação de
TMSb (V) foi obtida em nossos estudos. As concentrações de
antimônio em amostras de tecidos de macacos Rhesus coletadas
aproximadamente 60 dias após a última administração de AM
foram maiores na tireóide, seguida por fígado e baço. As
concentrações no fígado foram pelo menos 1000 vezes maiores
que a concentração basal. Amostras de cabelos/pelos e unhas
de pacientes e símios tratados com AM também apresentaram
altas concentrações, as quais
corresponderam ao histórico de administração da droga e
também mostraram que a incorporação de Sb nestes tecidos é
acumulativa, mesmo após o fim da administração de AM. Em
cabelos, mesmo após mais de 300 dias do fim do
tratamento as concentrações de Sb não retornaram ao nível basal. / [en] Clinical applications of antimonials in the treatment of
leishmaniasis are a unique opportunity to investigate the
metabolism of antimony and its species in the human body. In
this work, inductively coupled plasma mass spectrometry
(ICPMS), without or in combination with ion chromatography
(IC) and flow injection hydride generation (FI-HG), has been
used for the determination of total antimony concentrations
[Sb] and three of its expected species, Sb (III), Sb (V) and
trimethyl antimony (TMSbV), in clinical samples of
leishmaniasis patients and/or of rhesus monkeys (Mucaca
mulatta) treated with meglumine antimoniate
(AM). Different drug administration schemes were evaluated,
including low and high dose administration (5 mg or 20 mg of
Sb5+ per kg of body mass). Total [Sb] was assayed after wet
decomposition of the samples by HNO3/H2O2. Speciation
analysis was performed on plasma and urine samples using IC
on-line coupled to the ICPMS instrument. Two PRP-X100 anion
exchange columns were used for species separation employing
EDTA (isocratic elution: 4.7 mmol L-1, 2.5% v/v
methanol, pH 4.7) or EDTA/phosphate buffer (step elution:
1st eluent - 20 mmol L-1 EDTA + 2 mmol L-1 KHP, at pH 4.5;
2nd eluent - 50 mmol L-1 (NH4)2HPO4 at pH 8.3) as the mobile
phases. Performance characteristics of all methods were
evaluated and are presented. Stability tests showed that all
studied antimony species are sufficiently stable to allow
speciation analysis within 24 hours after
collection. In humans, as well as in rhesus monkeys, the
concentrations of antimony in urine and/or plasma samples
measured after the administration period of MA, showed rapid
excretion kinetics (t1/2 ~ 3 days) of the drug followed by
two slower ones. Significantly higher concentrations of [Sb]
were measured in erythrocyte fractions than in corresponding
plasma samples, excepting the very initial phase of drug
administration (first 12 hours). Bio-reduction of Sb5+ to
Sb3+ was observed and confirmed as an important metabolic
process during the slow
elimination phase. No evidence for the formation of TMSbV
was so far obtained in our studies. Antimony concentrations
in tissue samples of rhesus monkeys 60 d after the last AM
administration were highest in thyroid, followed by liver
and spleen. Liver concentrations were at least 1000 times
the basal concentrations. Hair and nail samples from treated
patients and monkeys had also very high Sb
concentrations, which matched drug administration history
and showed also that incorporation of Sb into these tissues
is continuing, even after ceasing AM application. In human
hair, more than 300 days are required for the return of
antimony concentrations to basal levels.
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[en] SYNTHESIS OF NOVEL 1,2,3-TRIAZOLE BY CYCLOADDITION 1,3-DIPOLAR REACTION POTENTIALLY BIOACTIVE / [pt] SÍNTESE DE NOVOS 1,2,3-TRIAZÓIS VIA REAÇÃO DE CICLOADIÇÃO 1,3-DIPOLAR POTENCIALMENTE BIOATIVOSTALITA DE PAIVA ROSA 06 January 2022 (has links)
[pt] A importância terapêutica dos compostos contendo 1,2,3-triazóis deve-se ao seu espectro de atuação farmacológica, entre as quais podemos destacar a ação anticâncer, antiviral, antibacteriana, antifúngica, anticonvulsivante entre outras. A facilidade sintética de obtenção de 1,2,3- triazóis por meio da reação de cicloadição 1,3 –dipolar catalisada por cobre (CuAAc), também denominada click chemistry, bem como a reação de cicloadição térmica 1,3-dipolar, torna este grupo bastante atraente como um grupo farmacofórico. O presente trabalho tem como objetivo geral o planejamento, síntese e avaliação de fenil(1-fenil-1H-1,2,3-triazóis-4-il)metanol, também denominados hidróxi-1,2,3-triazóis, visando analisar suas ações farmacológicas frente a leishmaniose. Duas estratégias foram desenvolvidas para a obtenção destes compostos: (i) reação de cicloadição 1,3-dipolar catalisada por cobre (CuAAC) entre 1-fenil-3-(trimetilsilil)prop-2-in-1-óis e aril azidas substituídas previamente preparadas levando assim a obtenção dos fenil(1-fenil-1H-1,2,3-triazóis-4-il)metanol com rendimentos entre 20 e 30 por cento. As aril azidas foram preparadas à partir das anilinas em 60 a 85 por cento de rendimentos e os 1-fenil-3-(trimetilsilil)prop-2-in-1-óis foram preparados à partir da adição de etiniltrimetilsilano aos benzaldeídos comerciais (ii) reação de cicloadição térmica entre aril azidas e (E)-3-(dimetilamino)-1-fenilprop-2-en-1-ona - previamente preparadas à partir de 4-bromoacetofenonas, em rendimentos de 40-50 por cento, seguida de redução dos fenil(1-fenil-1H-1,2,3-triazóis-4-il)metanona com rendimentos variando entre 35-50 por cento levando assim a obtenção dos fenil(1-fenil-1H-1,2,3-triazóis-4-il)metanóis com rendimentos entre 20 e 30 por cento. Os compostos sintetizados foram caracterizados por técnicas de espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN), infravermelho (IV) e espectrometria de massas (CG-MS). / [en] The therapeutic importance of compounds containing 1,2,3-triazoles is due to their spectrum of pharmacological activity, among which we can highlight the anticancer, antiviral, antibacterial, antifungal, anticonvulsant action, among others. The synthetic facility to obtain 1,2,3-triazoles through the 1,3-dipolar copper-catalyzed cycloaddition reaction (CuAAc), also called click chemistry, as well as the 1,3-dipolar thermal cycloaddition reaction, makes this group quite attractive as a pharmacophoric group. The present work has a general objective the planning, synthesis and evaluation of phenyl (1-phenyl-1H-1,2,3-triazoles-4-yl) methanol, also called hydroxy-1,2,3-triazoles, aiming to analyze their pharmacological actions against leishmaniasis. Two strategies were developed to obtain these compounds: (i) 1,3-dipolar copper-catalyzed cycloaddition reaction (CuAAC) between 1-phenyl-3- (trimethylsilyl) prop-2-in-1-ois and aryl azides substituted previously prepared thus leading to obtaining phenyl (1-phenyl-1H-1,2,3-triazoles-4-yl) methanol with yields between 20 and 30 percent. Aryl azides (50a-i) were prepared from anilines in 60 to 85 percent yields and 1-phenyl-3- (trimethylsilyl) prop-2-in-1-ois were prepared from the addition of ethinyltrimethylsilane to commercial benzaldehydes (ii) thermal cycloaddition reaction between aryl azides and (E) -3- (dimethylamino) -1-phenylprop- 2-en-1-one - previously prepared from 4-bromoacetophenones, in yields of 40-50 percent, followed by reduction of phenyl (1-phenyl-1H-1,2,3-triazoles-4- il) methanone with yields varying between 35-50 percent thus leading to the obtaining of phenyl (1-phenyl-1H-1,2,3-triazoles-4-yl) methanols with yields between 20 and 30 percent. The synthesized compounds were characterized by nuclear magnetic resonance (NMR), infrared (IR) and mass spectrometry (CG-MS) techniques.
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