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Previous issue date: 2012-06-26 / Não informada / Aspidosperma marcgravianum Woodson (Apocynaceae) is popularly known as carapanaúba a high quality wood. The bark is used in the Amazonian folk medicine as infusion to treat malaria, diabetes, gastrointestinal disturbances, in uterus and ovarian inflammation, against cancer and as contraceptive. The few papers available do not confirm the folk use, but the about 50 known indolic alkaloids isolated from A. marcgravianum are often used to explain the toxic effect on Artemia franciscana and the described anti-bacterial activity. The present work aimed to study the in vivo and in vitro effects and mechanisms of action of the alkaloids extracted from Aspidosperma marcgravianum. The bark was extracted with ethanol in Soxhlet apparatus generating the ethanol extract (EETOH, 3% yield). The EETOH was partitioned with chloroform in different pH, yielding the chloroform fraction (FCHCl3); further partition yielded the total alkaloids fraction (TAF). FCHCl3 purification in silica gel column chromatography (CC) yielded six fractions of different alkaloids (F13-23, F24-32, F55-73, F33-43, F44-54 and F74-76). FAT standardization in HPLC showed 11 major peaks with retention times from 3.5 to 27.0 min similar to those obtained for the purified fractions. To know the main pharmacological effects induced of A. marcgravianum, mice were orally treated with EETOH and TAF (1 g/kg). EETOH produced evident muscular relaxation and reduced mice motility, as well as dyspnea; death was not observed within 24 h. Comparatively, TAF produced faster and more intense effects that killed all the animals. In rat isolated atrium, FAT (10 to 100 μg/mL) produced negative chronotropic effect related to the drug concentration, positive inotropic effect at low concentration but contraction inhibition at high one. The diaphragm muscle contractions were potentiated by TAF; this action was neither related to an anticholinesterase activity nor to Ca2+-ATPase inhibition. The diaphragm tetanus after repetitive electrical stimulation (30-50 Hz) was not sustained in presence of FAT (10 to 100 μg/mL) but the initial muscle responses were not proportionally blocked; similar effects were observed for the purified fractions at 1 μg/mL. Since the alkaloids did not induce muscle contracture, neither inhibited SERCA 1 activity, nor reduced the initial responses upon repetitive muscle stimulation, the effect on contraction might putatively be explained by increased action potential duration. This effect would increase the muscle membrane refractoriness and would block the tetanus responses, but at the same time it would increase the myofibrils active state resulting in increased contraction of diaphragm and heart muscles. Usually increased action potential duration is due to potassium channel blockade. The present experiments, however, do not provide any direct evidence for this latter effect. / Aspidosperma marcgravianum Woodson (Apocynaceae) é conhecida como carapanaúba. Além da qualidade da madeira, a casca da espécie é utilizada como infuso na medicina popular da Região Amazônica para tratar malária, diabetes, males do estômago, inflamações do útero e do ovário, contra câncer, e como contraceptivo. Poucos trabalhos científicos confirmam essas ações, mas já são conhecidos cerca de 50 alcaloides indólicos, que parecem ser os responsáveis pela atividade tóxica às larvas de Artemia franciscana e pela atividade antimicrobiana. Este trabalho teve como objetivo estudar os efeitos e o(s) mecanismo(s) de ação dos alcaloides de Aspidosperma marcgravianum Woodson em roedores. O pó das cascas do caule foi extraído em Soxhlet obtendo-se o extrato etanólico (EETOH, rendimento 3%). O EETOH foi particionado com clorofórmio em diferentes pH, dando origem à fração clorofórmica (FCHCl3) e, esta, à fração mais purificada contendo os alcaloides totais (FAT). A purificação da FCHCl3 por cromatografia em coluna (CC), separou seis frações de diferentes alcalóides (F13-23, F24-32, F55-73, F33-43, F44-54 e F74-76). A padronização da FAT em CLAE mostrou 11 picos principais com tempos de retenção que variaram de 3,5 a 26,9 min, coincidentes com os das frações purificadas. Para identificar os principais efeitos farmacológicos de A. marcgravianum, o extrato etanólico (EETOH) e a fração alcaloídica (FAT) foram administrados por via oral (1 g/kg, v.o.), em camundongos. O EETOH produziu diminuição da motilidade e relaxamento muscular evidentes, além de sinais de dispnéia, sem cianose; não houve morte em 24 horas de observação. A FAT produziu os mesmos efeitos, porém rápidos e intensos, com 100% de letalidade. Em átrios isolados de rato, a FAT (10 a 100 μg/mL) produziu efeito cronotrópico negativo proporcionalmente às concentrações e efeito inotrópico positivo na menor concentração e inotrópico negativo na maior concentração. As contrações do músculo diafragma de rato foram potenciadas na presença da FAT; esta ação não foi relacionada a uma atividade anticolinesterásica da FAT ou à inibição da atividade da Ca2+-ATPase de músculo esquelético. Na presença da FAT (10 a 100 μg/mL) o tétano do músculo diafragma de rato não foi sustentado, mas a contração inicial à estimulação tetânica (30 e 50 Hz) não foi inibida na mesma proporção; efeitos semelhantes foram observados com as frações purificadas (1 μg/mL). Estes efeitos indicam que o período refratário da fibra muscular foi aumentado na presença dos alcalóides. O prolongamento do potencial de ação, talvez por bloqueio de canais de potássio na repolarização celular, potenciaria a contração e inibiria a resposta à estimulação tetânica. As experiências, no entanto, não indicam diretamente a ação dos alcalóides nas correntes iônicas do potencial de ação.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/4379 |
| Date | 26 June 2012 |
| Creators | Vilhena, Márcia Caroline Pires |
| Contributors | Lapa, Antônio José, Tanae, Mirtes Midori |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFAM, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 32215883775770440, 600 |
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