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Previous issue date: 2010-12-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The objective of the present study was to evaluate the antimicrobial, antioxidant and cytotoxicity potentials of extracts of leaves and branches of Casearia javitensis, and to purify and identify their secondary metabolites. Leaves and branches were collected in Reserva Adolpho Ducke, Manaus, AM. The plant material was dried, grinded and the extracts were prepared with DCM, MeOH and water using ultrasound for 20 minutes each. The extracts were concentrated and tested for antibacterial, cytotoxicity and antioxidant activity. Antibacterial activity assays were done using the agar diffusion method by well technique, against Aeromonas hydrophila, Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa. Minimum inhibitory concentration (MIC) and the minimum bactericidal concentration (MBC) were measured for the most active extracts. The cytotoxicity assay employed brine shrimp Artemia salina and the evaluation of antioxidant activity used a method with DPPH and ascorbic acid. DCM branches extract was fractioned in chromatographic column (CC), and recrystallization. Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS) and Nuclear Magnetic Resonance (NMR) analyses afforded steroids, as β-sitosterol. DCM extracts of leaves and branches were analyzed by GC-MS in appropriated conditions to steroids and triterpenes analyses, and triterpene friedelin was detected in branches extracts. Antimicrobial assay showed high activity for branches MeOH extract and leaves MeOH extract against A. hydrophila, MIC value < 2 mg/mL and showed no cytotoxicity in Artemia salina. These MeOH extracts were dissolved in water and partitioned between dichloromethane (DCM), ethyl acetate (AcOEt) and n-buthanol (n-BuOH), and these phases were tested for antibacterial activity. The AcOEt phases were the most active, and showed high antimicrobial activity. The DCM phase from branches MeOH extract was fractioned by CC and afforded β-friedelanol. The AcOEt fraction of branches MeOH extract was fractioned by CC and some fractions were purified by HPLC, and afforded five phenolic glycosides, which structures are not yet determined. 1D and 2D-NMR and mass spectrometry analyses are still on progress. The n BuOH phase from branches MeOH extract was fractioned by exclusion chromatography (Sephadex LH-20) and subjected to CC over a Poliamide-6 column, and NMR analyses of one fraction suggest the presence of a phenolic glycoside. / O presente trabalho teve por objetivo isolar e identificar os metabólitos secundários presentes nos extratos de Casearia javitensis, assim como avaliar o potencial antimicrobiano, citotóxico e antioxidante destes extratos. Para o trabalho, foram realizadas quatro coletas na Reserva Adolpho Ducke, Manaus-AM. Os materiais coletados foram secos, moídos e extraídos em ultrassom com diclorometano (DCM), metanol (MeOH) e H2O. Para os testes antimicrobianos, utilizou-se o método de difusão em ágar, pela técnica de poço, contra Aeromonas hydrophila, Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Mínima Bactericida (CMB) foram determinadas para os extratos mais ativos. O ensaio citotóxico utilizou Artemia salina como organismo-teste e o ensaio de atividade antioxidante empregou o método quantitativo utilizando o radical DPPH e equivalência com o ácido ascórbico. O extrato DCM dos galhos foi fracionado por coluna cromatográfica (CC) e uma fração foi purificada através de recristalização. Frações analisadas por Cromatográfo à Gas acoplado à Espectrometria de Massas (CG-EM) e Ressonância Magnética Nuclear (RMN) mostraram presença de esteroides, possuindo o β-sitosterol como majoritário nas frações. Os demais extratos DCM foram analisados por CG-EM em uma condição para análise de esteroides e triterpenos, e o triterpeno friedelina foi detectado nos extratos dos galhos. O extrato metanólico dos galhos da primeira coleta e o extrato metanólico das folhas da terceira coleta apresentaram halos de inibição superiores a 10 mm no teste contra Aeromonas hydrophila, CIM abaixo de 2 mg/mL e ausência de atividade citotóxica em Artemia salina. Estes extratos foram submetido à partição com diclorometano (DCM), acetato de etila (AcOEt) e n-butanol (n-BuOH), e as fases obtidas foram avaliadas para atividade antimicrobiana. As fases AcOEt destes extratos mostraram-se como as mais ativas, concentrando a atividade antimicrobiana. A fase DCM do extrato MeOH dos galhos foi fracionada por sucessivas CCs e uma fração mostrou a presença de β-friedelanol por análise em CG-EM. A fase AcOEt foi fracionada por CC e algumas frações foram purificadas por CLAE, fornecendo cinco fenólicos glicosilados, os quais a determinação estrutural ainda não está concluída, pois espectros de RMN mono e bidimensionais são necessários para a conclusão desta etapa. A fase n -BuOH foi fracionada em CC utilizando Sephadex LH-20 e CC de Poliamida-6, e o espectro de RMN de uma fração semipurificada sugere a presença também de fenólicos glicosilados.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/2251 |
| Date | 15 December 2010 |
| Creators | Wyrepkowski, Claudia Dantas Comandolli |
| Contributors | Nunez, Cecília Verônica, Santos, Pierre Alexandre dos |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFAM, BR, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 32215883775770440, 600 |
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