Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:52:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2016 / Os microrganismos provenientes da cavidade oral que invadem o sistema de canais radiculares são capazes de se aderir às paredes dentinárias e formar biofilmes, provocando uma resposta inflamatória nos tecidos perirradiculares. Visto que existe uma relação causal entre a infecção do sistema de canais radiculares e a periodontite apical, o controle da infecção é um dos principais objetivos do tratamento endodôntico. Devido à limitada ação de desinfecção promovida pelas diversas manobras endodônticas, novas alternativas de tratamento têm sido propostas. Esta tese de doutorado é composta por 2 estudos desenvolvidos com os objetivos de: 1) avaliar o efeito do ácido etilenodiamino tetra-acético (EDTA) 17% e da Solução Salina Modificada (MSS) na desagregação e eliminação das bactérias do biofilme de Enterococcus faecalis; 2) avaliar os efeitos das ?-alquilideno-?-lactamas 12e, 13e e 13f na inibição da formação de um biofilme multiespécies de Streptococus mutans, E. faecalis e Candida glabrata. No estudo 1, biofilmes de E. faecalis de 48 h foram desenvolvidos em discos de vidro e tratados por 1 h por meio da imersão em EDTA 17% ou MSS. Após os tratamentos, a viabilidade das células bacterianas remanescentes no substrato e das células desagregadas no sobrenadante foi avaliada por meio do método de contagem de unidades formadoras de colônias (UFC). Além disso, também foi realizado o tratamento com propídio monoazida (PMA) juntamente com o teste de reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para a detecção da presença do gene RNAr 16S do E. faecalis. No estudo 2, biofilmes multiespécies foram estabelecidos em um modelo de adesão ativo. Discos de vidro foram condicionados com as lactamas 12e, 13e e 13f ou DMSO 3,5% (controle) por 1 h, inoculados com as culturas microbianas, e incubados por 48 h. Após, testes foram realizados a fim de avaliar os efeitos das lactamas na inibição da formação do biofilme. Foram avaliados a biomassa do biofilme por meio do ensaio com cristal violeta; o número de células viáveis e totais aderidas ao substrato, por meio do método de contagem de UFCs e qPCR, respectivamente; a quantidade de proteínas pelo método de Bradford; e a quantidade polissacarídeos insolúveis presentes na matriz extracelular. Os dados paramétricos obtidos com os diferentes experimentos foram analisados pelos testes One-way ANOVA e post hoc Tukey. Quando a normalidade dos resíduos dos dados foi violada, os testes Kruskal-Wallis e post hoc Dunn foram empregados. O teste de correlação R de Pearson analisou o grau de correlação entre UFC e PMA. O nível de significância foiestabelecido em 5%. Com base nos resultados obtidos nos dois estudos foi possível concluir que: 1) O EDTA e a MSS foram efetivos para promover a desagregação das bactérias do biofilme de E. faecalis. A MSS demonstrou excelente atividade antimicrobiana, enquanto o EDTA apresentou baixa efetividade antimicrobiana contra o biofilme de E. faecalis; Correlação positiva foi observada entre os resultados de UFC e PMA; 2) As ?-alquilideno-?-lactamas 12e, 13e e 13f diminuíram a produção de polissacarídeos e proteínas da matriz extracelular do biofilme multiespécies de S. mutans, E. faecalis e C. glabrata.<br> / Abstract : Microorganisms from the oral cavity that invade the root canal system are able to adhere to dentine walls and give rise to biofilms, resulting in inflammatory response of the perirradicular tissues. Because there is a causal relationship between infection of the root canal system and apical periodontitis, infection control is one of the main objectives of the endodontic treatment. Due to the limited disinfection action promoted by several endodontic procedures, new alternatives of treatment have been proposed. This PhD thesis is composed of 2 studies with the following aims: 1) to evaluate the effect of 17% ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) and Modified Salt Solution (MSS) to detach and kill bacteria from Enterococcus faecalis biofilm; 2) to evaluate the effects of ?-alkylidene-?-lactams 12e, 13e e 13f on inhibition of Streptococcus mutans, E. faecalis and Candida glabrata multispecies biofilm. In the first study, 48-h-old E. faecalis biofilms were grown on glass cover slips and then treated for 1 h by immersion in 17% EDTA or MSS. After treatments, the viability of the remaining bacterial cells attached to the substrate and detached cells in the supernatant was assessed by colony forming units (CFU) counting method. In addition, it was also performed treatment with propidium monoazide (PMA) in conjunction with quantitative polymerase chain reaction (qPCR) to detect the presence of 16S rRNA from E. faecalis. In the second study, multispecies biofilms were grown in an active attachment model. Glass cover slips were conditioned with lactams 12e, 13e e 13f or 3.5% DMSO (control) for 1 h, inoculated with the microbial cultures, and incubated for 48 h. Then, tests were performed to evaluate the effects of lactams on inhibition of biofilm formation. It was assessed the biofilm biomass using crystal violet; the number of viable and total cells attached to the substrate using CFU counting method and qPCR, respectively; the amount of proteins using Bradford assay; and the quantity of insoluble polysaccharides in the extracellular matrix. The parametric data from different experiments were analyzed using One-way ANOVA and post hoc Tukey tests. When the assumption of normality was violated the Kruskal-Wallis and post hoc Dunn tests were used. The correlation Pearson?s R test analyzed the correlation between CFU and PMA. A significance level of 5% was established. Based on results from both studies it was possible to conclude that 1) EDTA and MSS were effective to promote detachment of bacteria from E. faecalis biofilm. MSS showed excellent antimicrobial activity, while EDTA showed low antimicrobialeffectiveness against E. faecalis biofilm; 2) ?-alkylidene-?-lactamas 12e, 13e e 13f decreased polysaccharides and proteins production from the extracellular matrix of S. mutans, E. faecalis and C. glabrata multispecies biofilm.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsc.br:123456789/168092 |
| Date | January 2016 |
| Creators | Almeida, Josiane de |
| Contributors | Universidade Federal de Santa Catarina, Felippe, Wilson Tadeu, Crielaard, Wim |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 96 p.| il., grafs., tabs. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSC, instname:Universidade Federal de Santa Catarina, instacron:UFSC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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