O objetivo do presente estudo foi comparar a capacidade de inibição da formação de biofilme supra e subgengival de duas soluções de clorexidina 0,12% uma com e outra sem álcool na sua formulação. Materiais e métodos: esse foi um ensaio clínico cruzado randomizado, duplo cego, de três braços com 35 alunos de odontologia. Foram três períodos experimentais de quatro dias e dois períodos de wash out de 10 dias cada um. Os participantes foram randomizados para três grupos diferentes: Grupo 1- clorexidina a 0,12% com álcool (CLXcom) (Periogard® Colgate®), Grupo 2 - clorexidina a 0,12% sem álcool (CLXsem) (Periogard® sem álcool Colgate®) e o Grupo 3 – placebo (PLA). Durante os três períodos os procedimentos mecânicos de higiene bucal foram suspensos e os participantes bochecharam as formulações duas vezes ao dia, 15 ml por 1 minuto. A presença de biofilme e zona livre de placa foram registrados em 24, 48, 72 e 96 horas. Foram registrados os relatos de efeitos adversos ao longo dos períodos experimentais. As preferências por parte dos participantes das três formulações foram medidas por uma escala hedônica. Resultados: bochechos com clorexidina, independente da presença de álcool, mantiveram um número significativamente maior de superfícies sem biofilme até a leitura final às 96 horas em relação ao placebo (p<0,01). O desaparecimento da zona livre de placa no lapso decorrido entre 48 e 72 horas e entre 72 e 96 horas se mostrou associado mais ao placebo do que às formulações de clorexidina. Bochechos de clorexidina com álcool estiveram associados a maior ocorrência de eventos adversos (20) em relação ao uso de clorexidina sem álcool (10) (p<0,01). Em relação à avaliação do gosto das substâncias, a clorexidina com álcool foi a solução com a pior avaliação sensorial. Conclusão: As formulações de clorexidina apresentaram efeito inibitório na formação do biofilme supragengival e exclusão da zona livre de placa significativamente melhores do que o placebo, porém sem diferenças entre si. A solução de clorexidina com álcool esteve associada a um maior numero de efeitos adversos e pior aceitação pelos usuários. / The aim of this study was to compare the inhibitory effect on the supra and subgingival biofilm formation from two 0.12% chlorhexidine solutions with and without alcohol in the formulation. Methods: A crossover, randomized, double-blind, three-arm clinical trial, was conducted among 35 dental students.Three four-day experimental periods and two ten days wash-out periods were carried out. Participants were randomized to three different groups: Group 1 chlorhexidine to 0.12% alcohol (CLXcom) (Periogard® Colgate), Group 2 - chlorhexidine 0.12% without alcohol (CLXsem) (Periogard® No Alcohol Colgate) and Group 3 - Placebo (PLA). During the three periods mechanical oral hygiene procedures were suspended and participants were instructed to use the mouthwash formulations twice a day, 15 mL for 1 minute. Plaque formation and plaque free zone were recorded at 24, 48, 72 and 96 hours. Adverse events reported by the subjects were recorded and a facial hedonic scale was used in order to evaluate the taste perception. Results: mouthwashes with chlorhexidine, independent of the presence of alcohol, maintained a greater number of surfaces without biofilm compared to placebo (p <0.01). The extinction of plaque free zone between 48 and 72 hours and between 72 and 96 hours was associated to a greater extend with placebo as compared to the chlorhexidine formulations. Regarding substances taste evaluation, chlorhexidine with alcohol showed the worst sensory evaluation, the worst taste. Chlorhexidine with alcohol was associated with a higher prevalence of reported adverse effects (18) compared to chlorhexidine without alcohol ( 9) (p<0,01). Conclusion: chlorhexidine formulations showed significantly better inhibitory effect on the formation of supragingival biofilm and plaque free zone extinction than placebo,with no differences between chlorhexidine solutions. The formulation of chlorhexidine with alcohol was associated with a greater number of adverse effects and worse acceptance by users

O objetivo do presente estudo foi comparar a capacidade de inibição da formação de biofilme supra e subgengival de duas soluções de clorexidina 0,12% uma com e outra sem álcool na sua formulação. Materiais e métodos: esse foi um ensaio clínico cruzado randomizado, duplo cego, de três braços com 35 alunos de odontologia. Foram três períodos experimentais de quatro dias e dois períodos de wash out de 10 dias cada um. Os participantes foram randomizados para três grupos diferentes: Grupo 1- clorexidina a 0,12% com álcool (CLXcom) (Periogard® Colgate®), Grupo 2 - clorexidina a 0,12% sem álcool (CLXsem) (Periogard® sem álcool Colgate®) e o Grupo 3 – placebo (PLA). Durante os três períodos os procedimentos mecânicos de higiene bucal foram suspensos e os participantes bochecharam as formulações duas vezes ao dia, 15 ml por 1 minuto. A presença de biofilme e zona livre de placa foram registrados em 24, 48, 72 e 96 horas. Foram registrados os relatos de efeitos adversos ao longo dos períodos experimentais. As preferências por parte dos participantes das três formulações foram medidas por uma escala hedônica. Resultados: bochechos com clorexidina, independente da presença de álcool, mantiveram um número significativamente maior de superfícies sem biofilme até a leitura final às 96 horas em relação ao placebo (p<0,01). O desaparecimento da zona livre de placa no lapso decorrido entre 48 e 72 horas e entre 72 e 96 horas se mostrou associado mais ao placebo do que às formulações de clorexidina. Bochechos de clorexidina com álcool estiveram associados a maior ocorrência de eventos adversos (20) em relação ao uso de clorexidina sem álcool (10) (p<0,01). Em relação à avaliação do gosto das substâncias, a clorexidina com álcool foi a solução com a pior avaliação sensorial. Conclusão: As formulações de clorexidina apresentaram efeito inibitório na formação do biofilme supragengival e exclusão da zona livre de placa significativamente melhores do que o placebo, porém sem diferenças entre si. A solução de clorexidina com álcool esteve associada a um maior numero de efeitos adversos e pior aceitação pelos usuários. / The aim of this study was to compare the inhibitory effect on the supra and subgingival biofilm formation from two 0.12% chlorhexidine solutions with and without alcohol in the formulation. Methods: A crossover, randomized, double-blind, three-arm clinical trial, was conducted among 35 dental students.Three four-day experimental periods and two ten days wash-out periods were carried out. Participants were randomized to three different groups: Group 1 chlorhexidine to 0.12% alcohol (CLXcom) (Periogard® Colgate), Group 2 - chlorhexidine 0.12% without alcohol (CLXsem) (Periogard® No Alcohol Colgate) and Group 3 - Placebo (PLA). During the three periods mechanical oral hygiene procedures were suspended and participants were instructed to use the mouthwash formulations twice a day, 15 mL for 1 minute. Plaque formation and plaque free zone were recorded at 24, 48, 72 and 96 hours. Adverse events reported by the subjects were recorded and a facial hedonic scale was used in order to evaluate the taste perception. Results: mouthwashes with chlorhexidine, independent of the presence of alcohol, maintained a greater number of surfaces without biofilm compared to placebo (p <0.01). The extinction of plaque free zone between 48 and 72 hours and between 72 and 96 hours was associated to a greater extend with placebo as compared to the chlorhexidine formulations. Regarding substances taste evaluation, chlorhexidine with alcohol showed the worst sensory evaluation, the worst taste. Chlorhexidine with alcohol was associated with a higher prevalence of reported adverse effects (18) compared to chlorhexidine without alcohol ( 9) (p<0,01). Conclusion: chlorhexidine formulations showed significantly better inhibitory effect on the formation of supragingival biofilm and plaque free zone extinction than placebo,with no differences between chlorhexidine solutions. The formulation of chlorhexidine with alcohol was associated with a greater number of adverse effects and worse acceptance by users

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:52:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339550.pdf: 1041215 bytes, checksum: 6c329a4c3cd207ca14e898e3a9e10149 (MD5) Previous issue date: 2016 / Os microrganismos provenientes da cavidade oral que invadem o sistema de canais radiculares são capazes de se aderir às paredes dentinárias e formar biofilmes, provocando uma resposta inflamatória nos tecidos perirradiculares. Visto que existe uma relação causal entre a infecção do sistema de canais radiculares e a periodontite apical, o controle da infecção é um dos principais objetivos do tratamento endodôntico. Devido à limitada ação de desinfecção promovida pelas diversas manobras endodônticas, novas alternativas de tratamento têm sido propostas. Esta tese de doutorado é composta por 2 estudos desenvolvidos com os objetivos de: 1) avaliar o efeito do ácido etilenodiamino tetra-acético (EDTA) 17% e da Solução Salina Modificada (MSS) na desagregação e eliminação das bactérias do biofilme de Enterococcus faecalis; 2) avaliar os efeitos das ?-alquilideno-?-lactamas 12e, 13e e 13f na inibição da formação de um biofilme multiespécies de Streptococus mutans, E. faecalis e Candida glabrata. No estudo 1, biofilmes de E. faecalis de 48 h foram desenvolvidos em discos de vidro e tratados por 1 h por meio da imersão em EDTA 17% ou MSS. Após os tratamentos, a viabilidade das células bacterianas remanescentes no substrato e das células desagregadas no sobrenadante foi avaliada por meio do método de contagem de unidades formadoras de colônias (UFC). Além disso, também foi realizado o tratamento com propídio monoazida (PMA) juntamente com o teste de reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para a detecção da presença do gene RNAr 16S do E. faecalis. No estudo 2, biofilmes multiespécies foram estabelecidos em um modelo de adesão ativo. Discos de vidro foram condicionados com as lactamas 12e, 13e e 13f ou DMSO 3,5% (controle) por 1 h, inoculados com as culturas microbianas, e incubados por 48 h. Após, testes foram realizados a fim de avaliar os efeitos das lactamas na inibição da formação do biofilme. Foram avaliados a biomassa do biofilme por meio do ensaio com cristal violeta; o número de células viáveis e totais aderidas ao substrato, por meio do método de contagem de UFCs e qPCR, respectivamente; a quantidade de proteínas pelo método de Bradford; e a quantidade polissacarídeos insolúveis presentes na matriz extracelular. Os dados paramétricos obtidos com os diferentes experimentos foram analisados pelos testes One-way ANOVA e post hoc Tukey. Quando a normalidade dos resíduos dos dados foi violada, os testes Kruskal-Wallis e post hoc Dunn foram empregados. O teste de correlação R de Pearson analisou o grau de correlação entre UFC e PMA. O nível de significância foiestabelecido em 5%. Com base nos resultados obtidos nos dois estudos foi possível concluir que: 1) O EDTA e a MSS foram efetivos para promover a desagregação das bactérias do biofilme de E. faecalis. A MSS demonstrou excelente atividade antimicrobiana, enquanto o EDTA apresentou baixa efetividade antimicrobiana contra o biofilme de E. faecalis; Correlação positiva foi observada entre os resultados de UFC e PMA; 2) As ?-alquilideno-?-lactamas 12e, 13e e 13f diminuíram a produção de polissacarídeos e proteínas da matriz extracelular do biofilme multiespécies de S. mutans, E. faecalis e C. glabrata.<br> / Abstract : Microorganisms from the oral cavity that invade the root canal system are able to adhere to dentine walls and give rise to biofilms, resulting in inflammatory response of the perirradicular tissues. Because there is a causal relationship between infection of the root canal system and apical periodontitis, infection control is one of the main objectives of the endodontic treatment. Due to the limited disinfection action promoted by several endodontic procedures, new alternatives of treatment have been proposed. This PhD thesis is composed of 2 studies with the following aims: 1) to evaluate the effect of 17% ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) and Modified Salt Solution (MSS) to detach and kill bacteria from Enterococcus faecalis biofilm; 2) to evaluate the effects of ?-alkylidene-?-lactams 12e, 13e e 13f on inhibition of Streptococcus mutans, E. faecalis and Candida glabrata multispecies biofilm. In the first study, 48-h-old E. faecalis biofilms were grown on glass cover slips and then treated for 1 h by immersion in 17% EDTA or MSS. After treatments, the viability of the remaining bacterial cells attached to the substrate and detached cells in the supernatant was assessed by colony forming units (CFU) counting method. In addition, it was also performed treatment with propidium monoazide (PMA) in conjunction with quantitative polymerase chain reaction (qPCR) to detect the presence of 16S rRNA from E. faecalis. In the second study, multispecies biofilms were grown in an active attachment model. Glass cover slips were conditioned with lactams 12e, 13e e 13f or 3.5% DMSO (control) for 1 h, inoculated with the microbial cultures, and incubated for 48 h. Then, tests were performed to evaluate the effects of lactams on inhibition of biofilm formation. It was assessed the biofilm biomass using crystal violet; the number of viable and total cells attached to the substrate using CFU counting method and qPCR, respectively; the amount of proteins using Bradford assay; and the quantity of insoluble polysaccharides in the extracellular matrix. The parametric data from different experiments were analyzed using One-way ANOVA and post hoc Tukey tests. When the assumption of normality was violated the Kruskal-Wallis and post hoc Dunn tests were used. The correlation Pearson?s R test analyzed the correlation between CFU and PMA. A significance level of 5% was established. Based on results from both studies it was possible to conclude that 1) EDTA and MSS were effective to promote detachment of bacteria from E. faecalis biofilm. MSS showed excellent antimicrobial activity, while EDTA showed low antimicrobialeffectiveness against E. faecalis biofilm; 2) ?-alkylidene-?-lactamas 12e, 13e e 13f decreased polysaccharides and proteins production from the extracellular matrix of S. mutans, E. faecalis and C. glabrata multispecies biofilm.

O objetivo do presente estudo foi comparar a capacidade de inibição da formação de biofilme supra e subgengival de duas soluções de clorexidina 0,12% uma com e outra sem álcool na sua formulação. Materiais e métodos: esse foi um ensaio clínico cruzado randomizado, duplo cego, de três braços com 35 alunos de odontologia. Foram três períodos experimentais de quatro dias e dois períodos de wash out de 10 dias cada um. Os participantes foram randomizados para três grupos diferentes: Grupo 1- clorexidina a 0,12% com álcool (CLXcom) (Periogard® Colgate®), Grupo 2 - clorexidina a 0,12% sem álcool (CLXsem) (Periogard® sem álcool Colgate®) e o Grupo 3 – placebo (PLA). Durante os três períodos os procedimentos mecânicos de higiene bucal foram suspensos e os participantes bochecharam as formulações duas vezes ao dia, 15 ml por 1 minuto. A presença de biofilme e zona livre de placa foram registrados em 24, 48, 72 e 96 horas. Foram registrados os relatos de efeitos adversos ao longo dos períodos experimentais. As preferências por parte dos participantes das três formulações foram medidas por uma escala hedônica. Resultados: bochechos com clorexidina, independente da presença de álcool, mantiveram um número significativamente maior de superfícies sem biofilme até a leitura final às 96 horas em relação ao placebo (p<0,01). O desaparecimento da zona livre de placa no lapso decorrido entre 48 e 72 horas e entre 72 e 96 horas se mostrou associado mais ao placebo do que às formulações de clorexidina. Bochechos de clorexidina com álcool estiveram associados a maior ocorrência de eventos adversos (20) em relação ao uso de clorexidina sem álcool (10) (p<0,01). Em relação à avaliação do gosto das substâncias, a clorexidina com álcool foi a solução com a pior avaliação sensorial. Conclusão: As formulações de clorexidina apresentaram efeito inibitório na formação do biofilme supragengival e exclusão da zona livre de placa significativamente melhores do que o placebo, porém sem diferenças entre si. A solução de clorexidina com álcool esteve associada a um maior numero de efeitos adversos e pior aceitação pelos usuários. / The aim of this study was to compare the inhibitory effect on the supra and subgingival biofilm formation from two 0.12% chlorhexidine solutions with and without alcohol in the formulation. Methods: A crossover, randomized, double-blind, three-arm clinical trial, was conducted among 35 dental students.Three four-day experimental periods and two ten days wash-out periods were carried out. Participants were randomized to three different groups: Group 1 chlorhexidine to 0.12% alcohol (CLXcom) (Periogard® Colgate), Group 2 - chlorhexidine 0.12% without alcohol (CLXsem) (Periogard® No Alcohol Colgate) and Group 3 - Placebo (PLA). During the three periods mechanical oral hygiene procedures were suspended and participants were instructed to use the mouthwash formulations twice a day, 15 mL for 1 minute. Plaque formation and plaque free zone were recorded at 24, 48, 72 and 96 hours. Adverse events reported by the subjects were recorded and a facial hedonic scale was used in order to evaluate the taste perception. Results: mouthwashes with chlorhexidine, independent of the presence of alcohol, maintained a greater number of surfaces without biofilm compared to placebo (p <0.01). The extinction of plaque free zone between 48 and 72 hours and between 72 and 96 hours was associated to a greater extend with placebo as compared to the chlorhexidine formulations. Regarding substances taste evaluation, chlorhexidine with alcohol showed the worst sensory evaluation, the worst taste. Chlorhexidine with alcohol was associated with a higher prevalence of reported adverse effects (18) compared to chlorhexidine without alcohol ( 9) (p<0,01). Conclusion: chlorhexidine formulations showed significantly better inhibitory effect on the formation of supragingival biofilm and plaque free zone extinction than placebo,with no differences between chlorhexidine solutions. The formulation of chlorhexidine with alcohol was associated with a greater number of adverse effects and worse acceptance by users

Orientador: Marco antonio Compagnoni / Banca: Ana Maria Pero / Banca: Janaína Habib Jorge / Banca: Maria Fulgência Costa Lima Bandeira / banca Juliê Marra / Resumo: Este estudo avaliou a atividade antimicrobiana de um reembasador resiliente Coe Soft® (RRCS) combinado ao polímero antimicrobiano poli (2 tert-butilaminoetil) metacrilato (PTBAEMA) sobre formação de biofilme de Staphyloccocus aureus, Streptococcus mutans e Candida albicans. Espécimes circulares (15mm x 3mm) do RRCS foram confeccionados (n=27), esterilizados, divididos em três grupos de acordo com as concentrações de PTBAEMA a 0% (controle), 10% e 25% e individualmente inoculados em tubos de falcon contendo 5mL de caldo RPMI para os fungos, TSB para S. aureus e BHI para S. mutans e mantidos em overnight a 37ºC em incubadora com agitação orbital a 75rpm, sendo o S. mutans em microaerofilia. Após a inoculação dos espécimes seguiu-se a formação e maturação do biofilme a 37ºC sob agitação orbital a 75rpm. Em seguida cada espécime foi transferido para tubos contendo PBS e diluições seriadas foram realizadas. Alíquotas dessas diluições foram semeadas em placas de Petri e incubadas a 37ºC por 48h. Os dados obtidos foram transformados em log (UFC+1)/mL, considerando-se α=0,05. Os resultados demonstraram que o grupo contendo 25% de PTBAEMA inibiu completamente a formação de biofilme de S. aureus e S. mutans. Uma redução significativa na contagem de S. aureus e S. mutans (Kruskal- Wallis e Dunn; p=0,001) para o grupo contendo 10% de PTBAEMA foi observada quando comparada aos valores encontrados nos respectivos grupos controle. Para C. albicans não foi encontrada diferença significante entre grupos contendo PTBAEMA e o grupo controle (ANOVA; p>0,05). Conclui-se que os RRCS contendo 10% e 25% de PTBAEMA inibiram a formação de biofilme de S. aureus e S. mutans. Entretanto não teve efeito significante na formação de biofilme de C. albicans. / Abstract: This study evaluated the antimicrobial activity of the resilient reliner Coe Soft ® (RRCS) combined with antimicrobial polymer poly (2-tert butylaminoethyl) methacrylate (PTBAEMA) on Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans and Candida albicans biofilm formation. RRCS circular specimens were prepared (n=27), sterilized, divided into three groups according to PTBAEMA concentrations of 0% (control), 10% and 25% and inoculated into individual falcon tubes containing 5 mL of RPMI broth for fungi, TSB for S. aureus and BHI for S. mutans and kept overnight at 37°C with orbital shaking incubator at 75rpm, and S. mutans in microaerophilic. The specimens' inoculations were followed by biofilm formation and its maturation at 37°C under orbital shaking at 75rpm. After that, each sample was transferred to tubes containing PBS and serial dilutions were performed. Aliquots of these dilutions were plated in Petri dishes and incubated at 37°C for 48h. The data were transformed into log (CFU +1)/mL, considering α = 0.05. The results showed that the group containing 25% of PTBAEMA inhibited completely biofilm formation of S. aureus and S. mutans. A significant reduction in counts of S. aureus and S. mutans (Kruskal- Wallis and Dunn; p = 0.001) were found in group containing 10% of PTBAEMA when compared to the values in the corresponding control groups. C. albicans had no significant differences between groups containing PTBAEMA and the control group (ANOVA; p> 0.05). It is concluded that the RRCS containing 10% and 25% PTBAEMA inhibited the biofilmformation of S. aureus and S. mutans. However, no significant effect was found on C. albicans biofilm formation. / Doutor

A incidencia de infecções por espécies patogênicas de Candida vem crescendo e Candida albicans é a espécie que continua sendo a mais prevalente nas candidíases. Entretanto, observa-se o aumento no número de infecções por espécies emergentes de Candida não-albicans (CNA). Neste trabalho é avaliada a prospecção de novas moléculas e biopolímeros com atividade antifúngica e antibiofilme sobre cepas de Candida. Formulações de enxaguantes bucais foram desenvolvidas a partir do sal imidazólico cloreto de 1-n-hexadecil-3-metilimidazólico (C16MImCl) e selenocianatos alílicos 1-3. As formulações de enxaguantes bucais contendo C16MImCl na ausencia ou presença de sorbato de potássio (F1, F2, respectivamente), apresentaram uma Concentração Inibitória Mínima (CIM) de 50 μg/mL e os selenocianatos alílicos 1-3 apresentaram atividade antibiofilme pelo método cristal violeta (150 μg/mL). Os resultados expressos em Unidades Formadoras de Colônia (UFC/mL) e corante (brometo de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT) confirmaram que a formulação F2 exerceu um efeito antibiofilme similar ou mesmo maior do que F3 (presença de cloreto de cetilpiridinio - CP) e Colgate®. A formulação contendo selenocianatos alílicos 1 e 3, ambos na ausencia ou presença de sorbato de potassio, exibiram o mesmo nível de atividade antibiofilme para C. tropicalis (UFC/cm2). A técnica da Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) avaliou as formulações contendo C16MImCl e selenocianatos alílicos (1-3) sobre a resina acrílica e foram observadas ausência de arquitetura de biofilme e material de matriz extracelular. A técnica Hens Egg Test-Chorion Allantoic Membrane (HET-CAM) também foi empregada e os compostos em estudo não foram irritantes. Sugere-se que o C16MImCl e os selenocianatos alílicos (1-3) são potentes candidatos a agentes antifúngicos e antibiofilmes para o desenvolvimento de formulações de enxaguantes bucais. Alem disso, foram utilizados agentes antifúngicos comerciais, como anidulafungina (AND), Anfotericina (AMB), Cetoconazol (CTZ), Itraconazol (ITR), bem como C16MImCl e o CP com o intuito de avaliar a susceptibilidade de Candida spp na presença dos polímeros (PVOH, álcool polivinílico altamente amorfo e PDDA, cloreto de poli(dialildimetilamônio) em diferentes proporções de polímero/fármaco (1:1, 99:1 e 1:99). O PVOH não apresentou CIMs capazes de inibir o crescimento de todos os fungos testados. Quando o PVOH foi associado, verificou-se a eficácia de quatro dos seis fármacos testados (CTZ, ITR, C16MImCl e AND), mostrando também ampla atividade antifúngica contra Candida spp. Em alguns casos, em concentrações muito baixas quando comparadas aos fármacos puros. O PDDA em água apresentou atividade antifúngica. Seis antifúngicos (CTZ, ITR, CP, C16MImCl, AND e AMB) apresentaram seu efeito antifúngico potencializado quando associado ao polímero catiônico (PDDA). Verificou-se mudança no potencial zeta, tamanho de partícula e estrutura do fármaco/polímero indicando a possível formação de micelas que solubilizam os fármacos em água. Os resultados obtidos neste trabalho evidenciam fortes candidatos para a aplicação em várias áreas biomédicas, possibilitando o uso de uma série de fármacos antifúngicos de diferentes classes. / The incidence of infections by pathogenic species of Candida has been increasing and Candida albicans is the species that continues being the most prevalent in candidiasis. However, the number of other species of Candida non-albicans (CNA) is now higher. This work aims to evaluate the prospection of new molecules and biopolymers with antifungal activity and antibiofilm on strains of Candida. Mouthwashes formulations have been developed from the imidazolium salt 1-methyl-3-octylimidazole chloride (C16MImCl) and for allylic selenocyanates 1-3. The mouthwash formulations containing C16MImCl in the absence or presence of potassium sorbate (F1, F2, respectively) presented a Minimal Inhibitory Concentration (MIC) of 50 μg/mL and the allylic selenocyanates 1-3 presented antibiofilm activity by crystal violet method (150 μg/mL). Both the colony forming units (CFU/mL) and (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) results confirmed that the F2 formulation exerted a similar antibiofilm effect or even greater than F3 (presence of the cetylpyridinium chloride compound - CP) and Colgate®. The data obtained for formulations containing the allylic selenocyanates (1-3) indicated that formulations containing 1 and 3 (both in the absence or presence of potassium sorbate) exhibited the same level of antibiofilm activity for C. tropicalis (in CFU/cm2). The Scanning electron microscopy (SEM) technique evaluated the formulations containing C16MImCl and allylic selenocyanates (1-3) on the acrylic resin and showed no biofilm architecture and extracellular matrix material. The Hens Egg Test-Chorion Allantoic Membrane (HET-CAM) technique was employed and the compounds under study were not irritating. It is suggested that C16MImCl and allyl selenocyanates (1-3) are potent candidates for antifungal and antibiofilms agents for the development of mouthwashes formulations. In addition, commercial antifungal agents as Anidulafungin (AND), Anfotericin (AMB), Ketoconazole (CTZ), Itraconazole (ITR), as well as C16MImCl and CP were used in order to evaluate the susceptibility of Candida spp in the presence or absence of polymers (PVOH, highly amorphous polyvinyl alcohol and PDDA, poly diallyl dimethyl ammonium chloride)) in different polymer/drug ratios (1:1; 99:1 and 1:99). PVOH did not present MICs capable of inhibiting the growth of all fungi tested. When PVOH was associated the efficacy of four of the six drugs tested (CTZ, ITR, C16MImCl and AND) was demonstrated, showing broad antifungal activity against Candida spp. In some cases, in very low concentrations when compared to pure drugs. PDDA in water showed antifungal activity. Six antifungals (CTZ, ITR, CP, C16MImCl, AND and AMB) had their antifungal effect potentiated when associated with the cationic polymer (PDDA). Change in zeta potential, particle size and and structure of the drug/polymer indicating the possible formation of micelles that solubilize the drugs in water.The results obtained in this work show strong candidates for the application in several biomedical areas, allowing the use of a series of antifungal drugs of different classes.

Tese de mestrado integrado. Engenharia Química. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2008

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2018-02-13T03:11:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 350209.pdf: 2561049 bytes, checksum: dc66836a39efe6388cd09ce0ec63d1e6 (MD5) Previous issue date: 2017 / O biovidro ativo é um biomaterial promissor que tem mostrado excelentes efeitos osteogênicos, angiogênicos e antibacterianos para ser aplicado em procedimentos de reparação óssea em diversas áreas. Em implantologia oral, infecções podem ocorrer após procedimentos cirúrgicos em decorrência da presença de biofilmes orais incluindo espécies patogênicas. Sendo assim, este trabalho teve como principal objetivo desenvolver biomateriais à base de um biovidro nano-estruturado para incorporação de compostos com potencial anti-biofilme. O biovidro ativo 58S foi modificado incorporando brometo, compostos derivados do cranberry e da própolis na sua estrutura. As amostras foram caracterizadas por meio de análise química, textural e física. O potencial anti-biofime do biovidro ativo foi determinado através de q-PCR e análise microscópico. A reatividade química foi avaliada por meio de análise química, microscópica e da proporção Ca/P. As amostras do biovidro ativo incorporando brometo, cranberry PACS e própolis mostraram uma distribuição de tamanho de partículas, estrutura física e composição química apropriadas. O biovidro ativo modificado com 5wt% CaBr2 inibiu a proliferação de S. mitis, V. parvula, P. gingivais, S.gordoni, A. viscosus, e F. Nucleatum. Uma significativa formação de hidroxiapatita carbonatada foi revelada nas amotras do biovidro ativo mesoporoso incorporando cranberry PACS e própolis após 72 h de imersão na solução corporal simulada. Por conseguinte, a incorporação de compostos inorgânicos e orgânicos no biovidro ativo 58S pode ser uma estratégia para potencializar seu efeito anti-biofilme e ser aplicado em tratamentos de reparo e infecção óssea. / Abstract : Bioactive glass is an attractive biomaterial that has shown excellent osteogenic, angiogenic and antibacterial effects for bone healing. One of the main issues regarding oral surgery and bone grafting procedures are the recurrent infections caused by oral biofilm involving pathogenic species. Thus, the main aim of the present study was to produce porous bioactive glasses incorporating inorganic and organic compounds in their chemical and physical structure to enhance anti-biofilm potential during bone repairing procedures. The modified 58S bioactive glasses embedded bromide, cranberry PACS and propolis compounds and were characterized through physical, chemical and textural analysis. Bioactive glass multispecies antibiofilm potential was evaluated by q-PCR analysis and microscopic observation. Chemical reactivity of the samples was examined through chemical, microscopic and Ca/P ratio analysis. Bioactive glasses embedding bromide, cranberry PACS and propolis showed an appropriate particle size distribution, chemical and physical properties. Bioactive glass embedding 5wt% CaBr2 inhibited S. mitis, V. parvula, P. gingivais, S.gordoni, A. viscosus, and F. nucleatum proliferation. A significant hydroxyl-carbonate apatite layer was revealed by mesoporous BG samples incorporating cranberry PACS and propolis compounds after immersion in simulated body fuid for 72 h. The incorporation of inorganic and organic compounds into bioactive glass structure can be a strategy to enhance its antibiofilm potential for bone healing and infection treatment procedures.

CORREIA, E. E. M. Biofilme de dermatófitos in vitro e ex vivo: formação, arquitetura e sensibilidade. 2016. 85 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-18T14:06:48Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_eemcorreia.pdf: 2341180 bytes, checksum: 7cc18f16b0690c9f4a3ac5ede78a997a (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-18T14:06:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_eemcorreia.pdf: 2341180 bytes, checksum: 7cc18f16b0690c9f4a3ac5ede78a997a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-18T14:06:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_eemcorreia.pdf: 2341180 bytes, checksum: 7cc18f16b0690c9f4a3ac5ede78a997a (MD5) Previous issue date: 2016-12-01 / The microorganisms when presented in biofilm express properties different from when they are in the planktonic form. One of these properties is a higher resistance to antimicrobial agents. The aim of this study was to evaluate the formation of dermatophytes’ biofilms in in vitro and ex vivo assay performed in polystyrene coverslip and nail fragments, respectively, and their susceptibility to three antifungal agents (itraconazole, voriconazole and griseofulvin) in planktonics and biofilm forms. To this end, at first, they were used 26 strains isolated from clinical specimens of human and animal: Trichophyton rubrum (4) Trichophyton tonsurans (6), Trichophyton mentagrophytes (3), Microsporum gypseum (3) e Microsporum canis (10). The biofilms were initially formed in microdilution plates, and the strains were classified by the amount of biomass as non producers (2/26), weak (7/26), moderate (1/26) and strong biofilm producers (16/26). Then, strains, strong producers of biofilms, were chosen, one of each species, to biofilm formation in coverslip Thermanox® and nail fragments for later analysis by optical, confocal and scanning electron microscopy. The analyzes demonstrated that all species formed biofilms in vitro and ex vivo, with different density and architecture. M. gypseum and M. canis produced biofilms with higher and lower amounts of biomass, respectively. At a second step, according to the recommendations of the CLSI M38-A2 protocol, the minimum inhibitory concentration (MIC) values for the three antifungal agents against these 26 strains were determined, in the planktonic form. MICs values ranged from 0.00195-0.25 μg/ml for itraconazol, 0.00195-0.125 for voriconazole and <0.0039-4 μg / ml for griseofulvin. Subsequently, biofilms were formed, in microdilution plates and treated with the same drugs, in MIC, 10 x MIC and 50 x MIC values. The cell viability of the biofilms was quantified using the XTT colorimetric assay. In order to significantly reduce the metabolic activity of biofilms (P <0.05), 50 x MIC was required, for the three drugs. This study may contribute to improve the understanding of the pathophysiology of the microorganism and tolerance or resistance to treatment. / Os micro-organismos quando se apresentam em biofilme expressam propriedades distintas de quando estão na forma planctônica. Uma dessas propriedades é uma maior tolerância aos agentes antimicrobianos. O objetivo deste estudo foi avaliar a formação biofilmes de dermatófitos in vitro e ex vivo, em lamínulas de poliestireno e fragmentos de unha, respectivamente, bem como a sua sensibilidade a três agentes antifúngicos (itraconazol, voriconazol e griseofulvina) na forma plantônica e em biofilmes. Para tal, num primeiro momento, foram utilizadas 26 cepas isoladas de espécimes clínicos de origem humana e animal: Trichophyton rubrum (4) Trichophyton tonsurans (6), Trichophyton mentagrophytes (3), Microsporum gypseum (3) e Microsporum canis (10). Os biofilmes foram, inicialmente, formados em placas de microdiluição, e as cepas foram classificadas, pela quantidade de biomassa, como não formadoras (2/26), fracas (7/26), moderada (1/26) e fortes formadoras de biofilme (16/26). Em seguida, cepas fortes formadoras de biofilmes foram escolhidas, sendo uma de cada espécie, para formação de biofilmes em lamínulas e fragmentos de unha, para análises pela microscopia óptica, confocal e eletrônica de varredura, posteriormente. As análises demonstraram que todas as espécies formaram biofilmes in vitro e ex vivo, com densidade e arquitetura distintas. M. gypseum e M. canis produziram biofilmes com maior e menor quantidade de biomassa, respectivamente. Em um segundo momento, conforme as preconizações do documento M38-A2 do CLSI, foram determinadas as concentrações inibitória mínima (CIMs) das três drogas contra as 26 cepas de dermatófitos, na forma plantônica. Os valores CIMs variaram entre 0,00195-0,25 µg/ml para itraconazol; 0,00195-0,125 para voriconazol e <0,0039-4 µg/ml para griseofulvina. Posteriormente foram formados biofilmes, em placas de microdiluição, que foram tratados com as mesmas drogas, nos valores de CIM, 10 x CIM e 50 x CIM. A viabilidade celular dos biofilmes foi quantificada utilizando o ensaio colorimétrico XTT. Para reduzir de forma significativa a atividade metabólica dos biofilmes (P<0,05) foi necessário usar 50 x CIM, para as três drogas. Este estudo pode contribuir para melhorar a compreensão da fisiopatologia do microrganismo e tolerância ou resistência ao tratamento.

AGUIAR, F. R. M. Biofilmes do complexo Sporothrix schenckii: formação e sensibilidade in vitro. 2016. 97 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-18T14:13:06Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_frmaguiar.pdf: 2310499 bytes, checksum: 79ee5f07e4f132b127796c1e72156695 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-18T14:13:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_frmaguiar.pdf: 2310499 bytes, checksum: 79ee5f07e4f132b127796c1e72156695 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-18T14:13:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_frmaguiar.pdf: 2310499 bytes, checksum: 79ee5f07e4f132b127796c1e72156695 (MD5) Previous issue date: 2016-11-17 / Sporotrichosis is a cosmopolitan subcutaneous mycosis, found mainly in tropical and subtropical areas of Latin America, caused by species of Sporothrix schenckii complex. The aim of this study was to demonstrate the capacity of Sporothrix schenckii complex to produce in vitro biofilms and to determine the profile of these biofilms against to classical antifungal drugs. Four species from Sporothrix schenckii complex were used: S. brasiliensis (n=10), S. schenckii sensu stricto (n=2), S. globosa (n=2) and S. mexicana (n=4). The formation of biofilms was performed by transferring inoculum of 2 x 105 conidia/mL for microdilution plates, which were incubated at 25 °C for 5 days. After each day of incubation, XTT and Crystal Violet assays were made to determine the metabolic activity and biomass of biofilm, respectively. For susceptibility tests, three different concentrations (planktonic MIC, 10 x MIC and 50 x MIC) of antifungals amphotericin B (AMB), caspofungin (CAS), ketoconazole (KTC), voriconazole (VRC) and fluconazole (FLC) were transferred to biofilm wells, which were incubated for 72 hours at 25 °C. The biofilms profile then antifungal drugs presence was determined by the XTT and crystal violet assays. Biofilms were produced in Thermanox™ coverslips for viewing by optical microscopy with congo-red staining, scanning electron microscopy and confocal microscopy. It was found that all species from S. schenckii complex are strong biofilm-forming, with no difference formation between them. Absorbance of biofilm after drug exposure showed that biomass and metabolic activity was significantly reduced (p<0.05), mainly in S. brasiliensis. Antifungal drugs tested showed metabolic activity and biomass reduction, especially at concentrations 50 times higher than the planktonic MICs, demonstrating the protective increase in sessile form when compared for planktonic form. / A esporotricose é uma micose subcutânea cosmopolita, encontrada, principalmente, em áreas tropicais e subtropicais da América Latina, sendo causada por espécies do complexo Sporothrix schenckii. O objetivo deste estudo foi demonstrar a capacidade de fungos do complexo S. schenckii de produzir biofilmes in vitro e determinar o perfil desses biofilmes frente às drogas antifúngicas clássicas. Foram utilizadas 4 espécies do complexo Sporothrix schenckii: S. brasiliensis (n=10), S. schenckii sensu stricto (n=2), S. globosa (n=2) e S. mexicana (n=4). A formação dos biofilmes foi feita através da transferência de inóculos de 2 x 105 conídios/mL para placas de microdiluição, que foram incubadas a 25 °C por 5 dias. Após cada dia de incubação, realizaram-se ensaios de XTT e Cristal violeta, para se determinar a atividade metabólica e biomassa dos biofilmes, respectivamente. Para os ensaios de sensibilidade, três concentrações diferentes (MIC planctônico, 10 x MIC e 50 x MIC) dos antifúngicos anfotericina B (AMB), caspofungina (CAS), cetoconazol (KTC), voriconazol (VRC) e fluconazol (FLC) foram transferidas para os poços com biofilmes, que foram incubados por 72 horas a 25 °C. O perfil dos biofilmes frente às drogas antifúngicas foi determinado através de ensaios de XTT e cristal violeta. Biofilmes foram produzidos em lamínulas de Thermanox™ para visualização através de microscopia óptica com coloração de vermelho-congo, microscopia eletrônica de varredura e microscopia confocal. Verificou-se que todas as espécies do complexo S. schenkii são fortes formadoras de biofilme, não havendo diferença de formação entre as espécies. A absorbância dos biofilmes após exposição às drogas demonstrou que a biomassa e a atividade metabólica foram reduzidas de forma significativa (p<0,05), principalmente, em S. brasiliensis. Os antifúngicos testados mostraram redução na atividade metabólica e biomassa, principalmente, em concentrações 50 vezes maiores que os MICs planctônicos, demonstrando o incremento protetivo que a forma séssil possui frente à forma planctônica.