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Previous issue date: 2016-02-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Considered the most destructive disease of rice (Oryza sativa), the blast caused by the fungus M.
oryzae is of concern worldwide. Because the pathogen staying power in the soil and crop residues
for long and indeterminate periods is essential monitoring before the pathogen's entry into new
areas, due to the commitment of nearby plantations. The seeds are considered the main ways of
spread of disease due to storage, transportation and introduction into harmless areas. The
methodology currently recommended by the Ministry of Agriculture for fungi monitoring seed is
the "Blotter test", however, the morphological characterization can often be uncertain due to the
rapid growth of fungal invasion and the similarity between structures of some pathogens.
Morphologically M. oryzae can be indistinguishable from some species, such as the causal agent of
rice blast wheat and other grasses therefore the most adequate way for safe diagnosis is the
molecular detection. In seeds percentage infestation is often low, which is nevertheless important
because the seed of transmission capacity for the seedling, however small conidia concentrations
may be insufficient for the molecular detection by techniques potentially used as PCR (Polymerase
Chain Reaction). Technically a methodology for molecular amplification isothermal LAMP (Loop-
Mediated Isothermal Amplification) simpler recently been developed, which allows to safely
identify the target, due to the projection of specific primers based on exclusive regions of the
genome of the organism. The technique has advantages as high sensitivity due to the recognition
by the initiators of six regions of the target, in addition to specificity, speed and security in the
diagnosis. It is important to consider the cost reduction compared with PCR, due to use of constant
temperature and straightforward interpretation of results using turbidity generated in positive
samples or color change if the addition of dyes, eliminating the use of devices, specialized
professionals in handling high standard laboratories. The interpretation the results with the naked
eye makes the seed control in environments such as laboratories, warehouses, cooperatives with
minimal structure, reflecting positively on the proper targeting of lots, either for planting,
consumption or disposal. Therefore, the aim of this study was to survey the main potentially
destructive pathogenic fungi found in seeds, and develop a rapid detection kit by LAMP
methodology for M. oryzae. / Considerada a doença mais destrutiva do arroz (Oryza sativa), a Brusone, causada pelo fungo
Magnaporthe. oryzae é motivo de preocupação no mundo todo. Devido a capacidade de
permanência do patógeno no solo e em restos culturais por longos e indeterminados períodos é
essencial o monitoramento perante a entrada do patógeno em novas áreas, em razão do
comprometimento dos próximos plantios. As sementes são consideradas as principais formas de
disseminação da doença devido à capacidade de armazenamento, transporte e introdução em áreas
indenes. A metodologia atualmente recomendada pelo Ministério da Agricultura para
monitoramento de fungos em sementes é o “Blotter test”, entretanto, a caracterização morfológicapode muitas vezes ser incerta devido à invasão de fungos de crescimento rápido e a semelhança
entre estruturas de alguns patógenos. Morfologicamente M. oryzae pode ser indistinguível de
algumas espécies, como é o caso do agente causal da brusone de diversas gramíneas, portanto, a
maneira mais adequada para diagnose segura é a detecção molecular. Em sementes, a porcentagem
de infestação muitas vezes é baixa, o que não deixa de ser importante devido a capacidade de
transmissibilidade da semente para a plântula, no entanto as pequenas concentrações de conídios
podem ser insuficientes para a detecção molecular, por meio de técnicas potencialmente utilizadas
como a PCR (Reação Polimerase em Cadeia). Tecnicamente mais simples, recentemente foi
desenvolvida uma metodologia de amplificação molecular isotérmica LAMP (Loop-Mediated
Isothermal Amplification), que permite identificar de forma segura o alvo, em decorrência da
projeção de iniciadores específicos, baseados em regiões exclusivas do genoma do organismo. A
técnica apresenta vantagens como, alta sensibilidade devido ao reconhecimento pelos iniciadores
de seis regiões do alvo, além da especificidade, agilidade e segurança no diagnostico. È importante
considerar a redução de custos em comparação com a PCR, devido ao uso de temperaturas
constantes, e interpretação direta dos resultados por meio da turbidez gerada em amostras
positivas, ou mudança de coloração no caso da adição de corantes, dispensando o uso de aparelhos,
profissionais especializados e manuseio em laboratórios de alto padrão. A intepretação dos
resultados a olhos nus facilita o controle de sementes em ambientes como laboratórios, armazéns,
cooperativas com estrutura mínima, refletindo positivamente sobre o direcionamento adequado de
lotes, seja para o plantio, consumo ou descarte. Portanto, o objetivo deste trabalho foi realizar o
levantamento dos principais fungos patogênicos potencialmente destrutivos encontrados em
sementes, e desenvolver um kit de detecção rápida por meio da metodologia LAMP para M.
oryzae.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/7949 |
| Date | 16 February 2016 |
| Creators | Teixeira, Nara Cristina |
| Contributors | Filippi, Marta Cristina Corsi de, Wendland, Adriane, Wendland, Adriane, Cunha, Marcos Gomes da, Coelho, Regina Melo Sartori |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Agronomia (EAEA), UFG, Brasil, Escola de Agronomia e Engenharia de Alimentos - EAEA (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 842119561133988381, 600, 600, 600, 600, 4500684695727928426, -8449819070180741964, 2075167498588264571 |
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