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Previous issue date: 2007-06-01 / Lectins are proteins or glicoproteins of non-immune origin with binding specificities
for carbohidrates, that interact with glicocomponents present in plant and animal
cells, bacteria and viruses. This property makes lectins remarkable markers used in
histochemical and biochemical studies, and for characterization and differentiation of
cells. Leguminous plants are the major source of lectins, proteins that possess
important biological activities, like insecticidal and antiproliferative against cancer cell
lines. Thus, the aim of this work was to develop a heterologous expression system
for a recombinant lectin from Bauhinia forficata, a leguminous plant popularly known
as pata-de-vaca , in E. coli, to study its characteristics and biological activities. The
lectin gene bfl was amplified by PCR from genomic DNA, and cloned to expression
vectors pQE30 e pET32a(+). Recombinant BFL was expressed in E. coli in insoluble
form by using the vector pET32a(+)/bfl. The lectin was purified by Ni +2 -Sepharose
affinity chromatography, with a yield of 40 mg.L -1 . The sequence and carbohidrate
specificity of rBFL is similar to other related lectins. The rBFL lectin presents in
monomer and dimer forms, with aparent molecular mass of 44 and 94 kDa,
respectively, shows biological activity in hemagglutination assay in the presence of
divalent metal cations (Ca +2 and Mn +2 ) and antiproliferative effect on human cancer
cell lines MCF-7 (breast cancer), HT-29 (colon cancer) and HL-60 (leukemia)
according as the concentration used. The rBFL lectin showed dose-dependent
inhibition in HT-29 cells, stimulatory effect on proliferation of MCF-7 cells in higher
concentrations, and no induction of cell death was observed in any cancer cell line.
The results obtained in this work, about rBFL lectin, never before isolated or
produced in heterologous system, motivates the performance of new characterization
assays to elucidate possible applications. / Lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não imune com propriedade de
ligação especifíca a carboidratos, capazes de interagir com glicocomponentes
presentes em células de plantas, animais, bactérias e vírus. Essa propriedade faz
das lectinas notáveis marcadores utilizados em estudos histoquímicos, bioquímicos
e na caracterização e diferenciação de células. Plantas leguminosas constituem-se
na maior fonte de lectinas, que possuem atividades biológicas importantes, como
atividade inseticida e antiproliferativa sobre células tumorais. Diante disto, o objetivo
deste trabalho foi desenvolver um sistema de expressão heteróloga para uma lectina
de Bauhinia forficata (rBFL), popularmente conhecida como pata-de-vaca , em E.
coli, com o intuito de elucidar suas características e atividades biológicas. O gene bfl
da lectina foi amplificado por PCR a partir do DNA genômico, e clonado nos vetores
de expressão pQE30 e pET32a(+). A lectina rBFL foi expressa em larga escala pelo
vetor pET32a(+)/bfl em E. coli, na forma insolúvel. A purificação foi realizada por
cromatografia de afinidade em coluna de Ni +2 -Sepharose, com rendimento de 40
mg.L -1 . A seqüência da lectina rBFL e sua especificidade por carboidrato é similar a
de lectinas relacionadas. A lectina rBFL apresenta-se na forma de monômeros e
dímeros, com massa molecular aparente de 44 e 94 kDa, respectivamente, possui
atividade biológica em ensaio de hemaglutinação na presença de cátions divalentes
(Ca +2 and Mn +2 ) e demonstra efeito antiproliferativo sobre as linhagens tumorais
humanas MCF-7 (câncer de mama), HT-29 (câncer de cólon) e HL-60 (leucêmica),
dependendo da concentração utilizada. A rBFL demonstrou efeito inibitório dose-dependente
sobre HT-29, e efeito estimulatório sobre a proliferação da linhagem
MCF-7 em altas concentrações, não induzindo morte celular em nenhuma das
linhagens. Os resultados obtidos neste trabalho acerca da rBFL, nunca antes isolada
ou produzida em sistema heterólogo, motivam a realização de novos ensaios de
caracterização visando possíveis aplicações.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:123456789/1240 |
| Date | 01 June 2007 |
| Creators | Camacho, Natália Neutzling |
| Contributors | CPF:42251850015, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4723107D9, Dellagostin, Odir Antônio |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFPel, BR, Biotecnologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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