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Previous issue date: 2017-09-15 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Oil has a non-renewable fossil origin, and still represents the largest source of energy today. Hydrocarbons constituting the complex petroleum blend, such as HPA's, pose a threat to human populations, animals and the environment as they are extremely toxic, mutagenic and carcinogenic xenobiotics. The process of removing oil and by-products from polluted environments requires speed, efficiency, low toxicity and low costs. In this sense, different approaches have been used with the purpose of recovering areas impacted with oil. The use of degrading microorganisms in the recovery of impacted environments has been shown to be an effective method, by aggregating ideal conditions. This work aimed to isolate, select and characterize, petroleum degrading microorganisms, natives from aquatic environments located near the Urucu Petroleum Base, Coari, Amazonas-Brazil. For isolation of the microorganisms, water samples were enriched in BH broth with petroleum, and then plated on BH agar plus 1% petroleum as the sole carbon source. The microbial isolates were submitted to the qualitative and quantitative biodegradation test with redox indicator 2,6 dichlorophenol indophenol - DCPIP. The characterization of the strains with degradation potential was performed by sequencing the 16S and 18S gene regions for bacteria and yeast, respectively. The rate of biodegradation was obtained by gas chromatography coupled to GC/MS mass spectrometry. The antimicrobial susceptibility test was performed. Three lines with potential to degrade oil were selected by means of the qualitative test with DCPIP, which discolored the medium plus oil in the maximum time of 16 hours. Two bacterial strains were identified as belonging to the species Serratia marcescens and Bacillus toyonensis, and a yeast strain as Candida mesorugosa. In the quantitative assay with DCPIP, the bacterial species S. marcescens AMS212 reduced the DCPIP concentration to 13.08 mg.L-1 in 48 hours and the B. toyonensis AM07 species was able to reduce the concentration of DCPIP to 7.23 mg.L-1 in 72 hours. In the susceptibility test, S. marcescens presented multiple resistance to four different antibiotics. The species C. mesorugosa AM15 degraded 79.4% of HPA's. The results obtained in the present study demonstrated the ability of the isolates to degrade oil and derivatives, suggesting their use in future projects aiming at the recovery of impacted areas with these xenobiotics. / O petróleo possui origem fóssil não renovável, e representa, ainda, a maior fonte de energia na atualidade. Os hidrocarbonetos constituintes da complexa mistura do petróleo, como os HPA‘s, representam uma ameaça às populações humanas, aos animais e ao meio ambiente por se tratar de xenobióticos extremamente tóxicos, mutagênicos e carcinogênicos. O processo de remoção do petróleo e derivados de ambientes poluídos, requer rapidez, eficiência, baixa toxicidade e custos reduzidos. Nesse sentido, diferentes abordagens têm sido utilizadas com a finalidade de recuperar áreas impactadas com petróleo. O uso de microrganimos degradadores na recuperação de ambientes impactados, tem se mostrado um método eficaz, por agregar condições ideais. Este trabalho teve como objetivo isolar, selecionar e caracterizar, microrganismos degradadores de petróleo, nativos de ambientes aquáticos localizados no entorno da Base Petrolífera de Urucu, Coari, Amazonas-Brasil. Para isolamento dos microrganismos, as amostras de água foram enriquecidas em caldo BH com petróleo, em seguida plaqueadas em ágar BH acrescido de 1% de petróleo como fonte única de carbono. Os isolados microbianos foram submetidos ao teste qualitativo e quantitativo de biodegradação com indicador redox 2,6 diclorofenol indofenol – DCPIP. A caracterização das linhagens com potencial degradador foi realizada por meio do sequenciamento das regiões gênicas 16S e 18S, para bactérias e levedura, respectivamente. A taxa de biodegradação foi obtida por meio da análise de cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas – CG/MS. Foi realizado o teste de susceptibilidade a antimicrobianos. Foram selecionadas por meio do ensaio qualitativo com DCPIP, três linhagens com potencial para degradar petróleo, as quais descoloriram o meio acrescido de petróleo no tempo máximo de 16 horas. Duas linhagens bacterianas foram identificadas como pertencentes às espécies Serratia marcescens e Bacillus toyonensis, e uma linhagem leveduriforme como sendo da espécie Candida mesorugosa. No teste quantitativo com DCPIP, a espécie bacteriana S. marcescens AMS212 reduziu a concentração do DCPIP a 13.08 mg.L-1 em 48 horas e a espécie B. toyonensis AM07 foi capaz de reduzir a concentração do DCPIP a 7.23 mg.L-1 em 72 horas. No teste de susceptibilidade, S. marcescens apresentou resistência múltipla a quatro antibióticos diferentes. A espécie C. mesorugosa AM15 degradou 79.4% de HPA‘s. Os resultados obtidos no presente estudo demonstraram a capacidade dos isolados em degradar petróleo e derivados, sugerindo sua utilização em projetos futuros visando à recuperação de áreas impactadas com esses xenobióticos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/6022 |
| Date | 15 September 2017 |
| Creators | Peixoto, Ferdyanne Beatriz Sabóia, 92-99171-2553 |
| Contributors | ppgbiotec@ufam.edu.br, Astolfi Filho, Spartaco, Pereira, José Odair, Peixoto, Jean Charles da Cunha |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Amazônia Legal - BIONORTE, UFAM, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/embargoedAccess |
| Relation | 461231695918095045, 500 |
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