Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-09-04T17:28:37Z
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Previous issue date: 2017-06-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leishmania infantum chagasi é um protozoário intracelular responsável por causar uma doença fatal em humanos, a leishmaniose visceral. Identificar moléculas que estejam envolvidas no processo de infecção da célula do hospedeiro pelo parasito é importante para a concepção de estratégias para o controle da doença. Dentre estas moléculas estão as Proteínas Ligantes de Heparina (PLH’s), cuja característica principal é a capacidade de se ligar a carboidratos presentes em glicoproteínas ou glicolipídios. Há evidências de que PLH’s presentes na superfície de Leishmania participam dos processos de adesão e penetração dos parasitos nos tecidos e células, tanto dos hospedeiros vertebrados quanto dos invertebrados. Portanto, compreender as interações entre a PLH de L. chagasi (PLHLc) e o açúcar ao qual ela se liga, a heparina, bem como demonstrar propriedades da proteína, é importante para desenvolver mecanismos que interrompam a progressão da infecção. Este trabalho foi dividido em dois manuscritos onde foi proposto para o primeiro identificar e realizar análises estruturais in silico e análises funcionais da PLHLc. A proteína foi sequenciada e identificada como sendo a proteína LPG3 de L. infantum chagasi, que foi então sintetizada, clonada e a composição da sua estrutura foi determinada. Cromatografia de gel filtração, eletroforese em gel não desnaturante e ensaio de cross- linking sugerem que a rPLHLc/LPG3 está organizada como um tetrâmero. Calorimetria de titulação isotérmica confirma a capacidade da proteína em se ligar a heparina com afinidade micromolar. A inibição da atividade ATPásica pela presença da heparina, juntamente com as análises in silico, sugerem que o sítio de ligação a heparina sobrepõe ao sitio de ligação ao ATP. No segundo trabalho a proteína recombinante produzida foi avaliada para o imunodiagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina apresentando sensibilidade de 79-87% e especificidade de 63-83%, indicando o potencial da rPLHLc/LPG3 recombinante no diagnóstico imunológico da LVC. / Leishmania infantum chagasi is an intracellular protozoan parasite responsible for causing a fatal disease in humans, visceral leishmaniasis. Identification of molecules from the parasites involved in the host cell infection process is important for designing strategies to control this disease. Among these molecules is Heparin Binding Protein (HBP), whose main characteristic is the ability to bind to carbohydrates present in glycoproteins or glycolipids. Evidence suggests that HBP's present on Leishmania surface participate in the adhesion of parasites to tissues of both vertebrate and invertebrate hosts as well as in cell invasion. Therefore, understanding the interactions between L. chagasi HBP (HBPLc) and the sugar to which it binds, heparin, as well as demonstrating protein properties, is important to develop mechanisms that interrupt the infection progression. This work was divided into two manuscripts where it was proposed to first identify and perform in silico structural and functional PLHLc analyzes. The protein was sequenced and identified as the L. infantum chagasi LPG3 protein, which was then synthesized, cloned and the composition of its structure determined. Gel filtration chromatography, non-denaturing gel electrophoresis and cross-linking assay suggest that rPLHLc/LPG3 is organized as a tetramer. Isothermal titration calorimetry confirms the ability of the protein to bind heparin with micromolar affinity. Inhibition of ATPase activity by the presence of heparin, together with in silico analyzes, suggests that the heparin binding site overlaps the ATP binding site. In the second study, the recombinant protein was evaluated for the Canine Visceral Leishmaniasis immunodiagnosis presenting a sensitivity of 79-87% and specificity of 63-83%, indicating the potential of recombinant rPLHLc/LPG3 in the immunological LVC diagnosis.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:123456789/11682 |
| Date | 30 June 2017 |
| Creators | Martins, Thaís Viana Fialho |
| Contributors | Oliveira, Leandro Licursi de, Silva, Eduardo de Almeida Marques da |
| Publisher | Universidade Federal de Viçosa |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFV, instname:Universidade Federal de Viçosa, instacron:UFV |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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