La microflore des raisins est importante d’un point de vue technologique car elle conditionne en partie la qualité du vin. Or, la diversité des flores fongiques présentes sur baies de raisin ainsi que leur potentiel de contamination du produit final ne sont pas encore pleinement connus. Dans ce cadre, la caractérisation des flores fongiques cultivables présentes sur baies de raisin a été réalisée par PCR ITS-RFLP. 41 espèces de moisissures différentes sur les 43 étudiées appartenant à 11 genres différents ont été caractérisées de façon fiable. Seules les espèces Penicillium thomii et Penicillium glabrum ont présenté le même profil. Ainsi 96.3% des souches étudiées ont été caractérisées avec au maximum 4 enzymes de restriction et 41.5% des souches ont pu l’être avec seulement 2 enzymes de restriction. Ces résultats ont permis d’enrichir les bases de données, moyennement pourvues en séquences ITS caractéristiques de genres ou d’espèces de moisissures présentes sur baies de raisin. De plus, une étude exhaustive des moisissures présentes sur baies de raisin en Bourgogne a permis, par PCR ITS-RFLP, d’identifier 199 souches au niveau de l’espèce et ce quelque soit le genre. Penicillium spinulosum est l’espèce majoritaire isolée pour le millésime 2008 en Bourgogne. Parallèlement, la quantification de Botrytis cinerea, choisi comme micro-organisme modèle, a été réalisée par qPCR. La technique qPCR décrite dans ce travail présente (i) une bonne sensibilté avec une limite de détection de 6.4 pg d’ADN correspondant à 540 spores, (ii) l’originalité de travailler en échantillons naturellement contaminés et la fiabilité d’utiliser un standard interne. L’évaluation de l’efficacité de différentes stratégies de traitements anti-Botrytis a confirmé l’importance de la prophylaxie (effeuillage) dans la lutte contre Botrytis cinerea. / Microbial population of grapes is important from a technological point of view because it determines the quality of wine. But few studies have focused on fungal populations of grapes. A better knowledge of the fungal diversity on grapes, particularly as concerns species responsible for wine defects, may help efforts to control their development.We report the development of a PCR ITS-RFLP method as a fast and easy technique for identifying species of fungal genera present on grapes. By this methode, 41 different fungal species among 43 studied species belonging to 11 genera were characterized at the species level. Only P. thomii remained indistinguishable from P. glabrum. Using this PCR-ITS-RFLP, 96.3% strains tested could be differentiated to the species level with only four enzymes and 41.5% only with two enzymes. Moreover this work has contributed to the enriching of the database of fungal ITS sequences.Thus 199 isolated strain were on grapes in Burgundy vineyard were chacacterized at species level indepdantly of the genus by this method. P. spinolusum was the most frequently isolated species of Penicillium in Burgundy for 2008 vintage. Paralelly, the quantification of Botrytis cinerea, used as model, was developped by qPCR. The assay contained an internal amplification control to compensate for variations in DNA extraction and the various compounds from grapes, had high efficiency and the limit of detection was estimated to be 6.3 pg DNA (corresponding to 540 spores). This method was applied to assess the effects of various treatment strategies against Botrytis in the vineyard and demonstrates the importance of the prophylactic method.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:theses.fr/2010DIJOS045 |
| Date | 16 December 2010 |
| Creators | Diguta, Camelia Filofteia |
| Contributors | Dijon, Universitatea Bucureşti, Guilloux-Bénatier, Michèle, Campeanu, Gheorghe, Rousseaux, Sandrine |
| Source Sets | Dépôt national des thèses électroniques françaises |
| Language | French, English |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation, Text |
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