A técnica de cultivo em camada delgada contendo ágar Middlebrook 7H11 modificado foi comparada com o cultivo padrão em meio de Stonebrink, visando avaliar a sensibilidade e o tempo de detecção de Mycobacterium bovis em órgãos de bovinos e bubalinos oriundos de abatedouros comerciais. Posteriormente, a PCR foi utilizada para a confirmação do crescimento observado nos cultivos, bem como a coloração de Ziehl-Neelsen na pesquisa de bacilos álcool-ácido resistentes. As 49 amostras testadas foram descontaminadas pelo método tradicional de Petroff e trabalhadas em duas etapas. Na primeira, todas foram semeadas nas placas contendo o meio de Middlebrook 7H11 em camada delgada e nos tubos contendo o meio de Stonebrink, e as colônias observadas macroscopicamente em ambos os meios foram submetidas à PCR. Na segunda, 10 amostras cultivadas na primeira etapa foram submetidas a novo cultivo, somente em camada delgada, para observação do crescimento microscópico das colônias e também analisadas pela PCR. Os resultados obtidos demonstraram que: 1) a técnica de cultivo de Mycobacterium bovis em camada delgada no meio de Middlebrook 7H11 modificado em amostras de órgãos de bovinos e bubalinos mostrou-se viável quando comparada ao cultivo clássico no meio de Stonebrink, reduzindo o tempo de isolamento e podendo ser utilizada de forma complementar aos métodos tradicionais de diagnóstico da tuberculose bovina; 2) foi possível a identificação precoce do crescimento das micobactérias em camada delgada (entre 12º e 25º dia de crescimento) quando comparadas ao Stonebrink; 3) a PCR mostrou-se uma ferramenta complementar à somatória das técnicas de descontaminação de Petroff, coloração de Ziehl-Neelsen e cultivo em camada delgada na confirmação do diagnóstico de presença de micobactérias em amostras de órgãos de bovinos e bubalinos. / The modified thin layer Middlebrook 7H11 cultivation was compared to the standard culture technique containing Stonebrink media, in order to evaluate the sensitivity and time for the detection of Mycobacterium bovis in bovine and buffalo organs deriving from commercial slaughterhouses. The PCR was applied for confirmation of the growth observed in the cultures, as well as the Ziehl-Neelsen color technique in order to detect acid-fast bacilli. 49 samples were submitted to the classic Petroff\'s decontamination method, and worked in two stages. In the first one, all of them were sowed in plates containing modified Middlebrook 7H11 agar in thin layer and in tubes containing the Stonebrink media, and the colonies observed macroscopically in both medias were submitted to the PCR. In the second stage, 10 samples from the first stage were submitted to a new culture, only in thin layer, for microscopical growth observation of the colonies and also submitted to the PCR. The results showed that: 1) Mycobacterium bovis cultivation in modified thin layer Middlebrook 7H11 for bovine and buffalo samples were viable when compared to the classic culture in Stonebrink, reducing the time of isolation, and can be applied as a complement to the traditional bovine tuberculosis diagnosis methods; 2) earlier identification of mycobacteria growth was found in thin layer (between 12nd and 25th day of growth) when compared to the Stonebrink; 3) PCR technique showed to be a complementary tool to the sum of techniques including Petroff decontamination, Ziehl-Neelsen color and thin layer cultivation for the diagnosis confirmation of the presence of mycobacteria in bovine and buffalo organs samples .
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-24032011-134445 |
| Date | 16 August 2010 |
| Creators | Rosário, Tatiana Reis do |
| Contributors | Benites, Nilson Roberti |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Tese de Doutorado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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