FERREIRA, Emerson Ramalho. A revacinação com a BCG modula a produção de citocinas frente a antígenos do Mycobacterium leprae, em contatos menores de 15 anos de pacientes com hanseníase. 2010. 104 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-04-29T13:37:28Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_erferreira.pdf: 2370142 bytes, checksum: 0b5a10a59056f54a2a9027b3e71e0163 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-04-29T16:29:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_erferreira.pdf: 2370142 bytes, checksum: 0b5a10a59056f54a2a9027b3e71e0163 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-29T16:29:51Z (GMT). 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Before revaccination the serum anti-PGL1 IgG and IgM isotypes were measured by ELISA assays performed with native PGL1- coated microplates, and PPD-skin reaction was measured 2 to 3 months after revaccination. The study was approved by the local Ethic Committee, number 006-08, May 7th, 2008. BCG revaccination can induces IFN-gamma and/or IL-10 production related to antigen and age, but did not correlated with PPD-skin reaction or anti-PGL1 levels. The PBMC’s production of IFN-gamma against MLT (total M. leprae antigen) after BCG was higher on children under 4 years old (N= 8, 4203,0 ± 539,2 pg/mL before BCG x 9141,0 ± 860,9 pg/mL after BCG, p=0,015, Mann-Whitney’s test). Children between 5 and 9 years old showed an increase either of IFN-gama levels (N=11, 4912 ± 1065 pg/mL x 9249,0 ± 1171 pg/mL, p=0,024, Mann-Whitney’s test) or IL-10 levels (N=11, 210,6 ± 39,4 pg/mL x 680,3 ± 76,74 pg/mL, p=0, 0,001, Mann-Whitney’s test). However children between 10 and 15 years old failed to increase the cytokines levels after BCG booster. Contacts of multibacillary patients produced higher IFN-gamma levels (N= 13, 4536,0 ± 543,1 pg/mL x 9263,0 ± 989,0 pg/mL, p=0,0012, Mann-Whitney’s test) and IL-10 levels (N= 13, 235,9 ± 46,5 pg/mL x 743,5 ± 87,8, p=0,0012, Mann-Whitney’s test) against MLT after BCG, but only IFN-gamma levels (N=12, 4975,0 ± 995,8 pg/mL x 8126,0 ± 788,6, p=0,0342, Mann-Whitney’s test) increased after BCG on contacts of paucibacillary patients. The production of IFN-gamma and IL-10 against two synthetic peptides (p38 and p67), before and after BCG vaccine, were similar as seen with MLT antigen, but the absence of cytokine production against p69 help to identify this peptide as a effective diagnostic marker. / Estudos em diferentes populações têm mostrado que a vacinação com a BCG concede proteção parcial contra a hanseníase. Entretanto, a necessidade da revacinação e seu impacto na resposta imune contra antígenos do Mycobacterium leprae é pouco compreendida, principalmente nas crianças que são contatos destes pacientes com hanseníase, e constituem uma população de risco para o adoecimento. Neste estudo, investigamos o papel da revacinação com a BCG na modulação da resposta imune em contatos menores de quinze anos de pacientes com hanseníase. Amostras de sangue periférico de vinte e cinco crianças, vacinadas com a BCG ao nascer, foram coletas antes e dois meses após a revacinação com a BCG. Suas células mononucleares (PBMC) foram estimuladas com proteínas e peptídeos do M. leprae, dosando-se as quantidades de IFN-γ e IL-10 por ELISA. Anteriormente a revacinação, foram coletas amostras para dosagem de IgM e IgG anti-PGL-1 e realizado o teste tuberculínico (PPD) para avaliação da eficácia vacinal após a revacinação. Identificamos o potencial papel da BCG em estimular a produção de IFN-γ e/ou IL-10 dependendo do antígeno e da idade do contato, sem relação com o PPD e sorologia anti-PGL-1. Estes resultados sugerem que a BCG modula a resposta imune dos contatos frente aos antígenos do M. leprae, com o frequente aumento nos níveis de IFN-γ, frente ao MLT, nas crianças com idade entre 1 a 4 anos (4.203 + 539,2 pg/mL pré-BCG x 9.141 + 860,9 pg/mL pós-BCG, p=0,001). Já os contatos entre 5 a 9 anos mostram aumento na produção de IL-10 (210 +39,4 pg/mL pré-BCG x 680 + 76,74 pg/mL pós-BCG, p=0,001) e IFN-γ (4.912 + 1.065 pg/mL x 9.249 + 1.171 pg/mL, p=0,024). Estes achados são acompanhados com o aumento dos casos de hanseníase em crianças entre 5 a 9 anos na comunidade. Entretanto, nos contatos entre 10 a 15 anos a revacinação falha em induzir o aumento de IFN-γ e IL-10. Os contatos de MB produziram, simultaneamente, altos níveis de IFN-γ e IL-10 em resposta ao MLT, enquanto que os contatos de PB somente produziram altos níveis de IFN-γ após a revacinação. A produção de IFN-γ e IL-10 frente aos peptídeos sintéticos p38 e p69 indica que estes antígenos podem ser possíveis marcadores de infecção. Assim, a BCG pode ser protetora, sendo eficiente em induzir o aumento da resposta por IFN-γ nestes contatos, frente aos antígenos do M. leprae.

O Mycobacterium bovis é o agente causador da tuberculose em bovinos, zoonose que produz prejuízos para a produção de carne e leite em muitos países. Para apoiar estudos epidemiológicos no âmbito dos programas de controle, recentemente surgiram vários métodos de discriminação molecular de isolados de M. bovis. Os mais utilizados são o Spoligotyping, Mycobacterial Interspersed Repetitive Units (MIRU) e Exact Tandem Repeat (ETR), que apresentam diferentes poderes de discriminação. No presente estudo calculou-se a diversidade alélica para cada locus de MIRU e de ETR e o índice discriminatório de Hunter-Gaston (HGI) para o Spoligotyping, 10 MIRU e 3 ETR em 116 amostras de M. bovis isoladas de bovinos. Além disso, verificou-se se a capacidade de detectar agrupamentos espaciais de focos aumenta na medida em que é aumentado o poder discriminatório das análises moleculares. Comparou-se a utilização dessas três técnicas moleculares em análises espaciais para verificação de agrupamentos de focos da doença. A análise da diversidade alélica indicou que os MIRU 16, 26 e 27 e os ETR A, B e C foram os que apresentaram maior diversidade dentre os ensaiados. O HGI para cada uma das técnicas foi de: Spoligotyping = 0,738381; MIRU = 0,829835 e ETR = 0,825337. A associação desses métodos aumentou o poder discriminatório: Spoligotyping + MIRU = 0,930585; Spoligotyping + ETR = 0,931034; MIRU + ETR = 0,953373. O maior poder discriminatório foi alcançado quando as três técnicas foram associadas (HGI = 0,98051). Considerando as análises realizadas no presente estudo, o método inicial deveria ser o Spoligotyping, por diferenciar o M. bovis dos outros integrantes do complexo Mycobacterium tuberculosis. Como as associações do MIRU e do ETR com o Spoligotyping resultaram em HGI praticamente idênticos, depois do Spoligotyping, o método ETR parece ser a melhor escolha, pois é mais rápido e econômico do que o MIRU. Finalmente, o MIRU deve ser o último método a ser realizado. Assim, a escolha do método depende do poder discriminatório necessário para o objetivo em questão. Embora a capacidade de detectar agrupamentos espaciais de focos não tenha sido aumentada na medida em que cresceu o poder discriminatório das análises moleculares, a premissa continua válida. / Mycobacterium bovis is the causative organism of bovine tuberculosis, has zoonotic character and leads economic losses in livestock production in a lot of countries. To support the epidemiological researches on the disease control programs several molecular methods has been used to detect M. bovis strains. Among them, Spoligotyping, Mycobacterial Interspersed Repetitive Units (MIRU) and Exact Tandem Repeat (ETR) are the molecular analyses that present different powers of Mycobacterium bovis discrimination. In this study, allelic diversity of MIRU and ETR locus and Hunter-Gaston discriminatory index (HGI) were calculated for Spoligotyping, 10 MIRU and 3 ETR of 116 isolates of M. bovis from Brazilian bovines. The use of those three molecular techniques was compared in space analyses for verification of groupings of focuses of the disease. Besides, it was verified if the capacity to cluster of focuses increases in the measure in that the discriminatory power of the molecular analyses is increased. The analysis of the allelic diversity indicated that MIRU 16, 26, 27 and ETR A, B, C presented larger diversity among the rehearsed. The HGI for each individual technique was: Spoligotyping = 0.738381; ETR = 0.825337 and MIRU = 0.829835. The associations of these methods increased the discriminatory power: Spoligotyping + MIRU = 0.930585; Spoligotyping + ETR = 0.931034; MIRU + ETR = 0.953373. The greater discriminatory power was verified when the three techniques were associated (HGI = 0,98051). Considering the analyses performed, the initial method for differentiating M. bovis from the other species of the M. tuberculosis complex should be Spoligotyping. The association of MIRU and ETR with Spoligotyping resulted in HGI almost identical, after Spoligotyping, the ETR technique showed to be the best choice, due the shorter time to process and economic benefits when compared to MIRU. Finally, MIRU is the last method to be performed. Thus, the choice among the techniques depends on the discriminatory power necessary for the task. Although the capacity to detect clusters of focuses has not been increased in the measure in that it increased the discriminatory power of the molecular analyses, the premise continues valid.

A tuberculose continua sendo uma importante doença infecciosa, tanto nos humanos quanto nos animais, com índices de morbidade e mortalidade significativos e perdas econômicas em todo o mundo. A tuberculose bovina é uma doença infecciosa causada pela bactéria Mycobacterium bovis, que gera perdas na produção nos rebanhos infectados, sendo também considerada uma importante zoonose. Os métodos de diagnóstico direto têm fundamental importância para um sistema de vigilância para a tuberculose bovina e a agregação de métodos moleculares, notadamente aqueles que têm aplicação em epidemiologia, traz maior precisão diagnóstica para esses sistemas. Dentre as técnicas moleculares, destacam-se o TB Multiplex PCR, o RD Multiplex PCR e o Multispacer Sequence Typing, para a identificação dos isolados e o Variable Number Tandem Repeat (VNTR) e o Spoligotyping, como técnicas de fingerpint de M. bovis. Assim, o presente estudo teve como objetivo a identificação molecular de amostras oriundas de várias regiões do Brasil utilizando estes padrões de técnicas moleculares. Os espoligotipos identificados em maior abundância foram o SB0121, o qual apresentou-se amplamente distribuído entre as amostras, seguido pelo SB0295, SB1380, SB0140 e SB1050. Além disso, foram detectados quatro perfis nunca antes descritos na literatura, sendo que um deles foi o terceiro mais frequente entra as amostras pesquisadas. Os resultados observados neste trabalho demonstraram ainda que a tipagem pelo MIRU-VNTR revelou-se superior ao Spoligotyping para discriminar os isolados. Nesta perspectiva, acredita-se que as pesquisas moleculares voltadas a identificação de micobactérias, aliadas as técnicas epidemiológicas tradicionais, possam melhorar sensivelmente a performance dos sistemas de vigilância para tuberculose bovina no Brasil. / Tuberculosis remains a major infectious disease in both humans and animals, with morbidity and mortality and significant economic losses. Bovine tuberculosis is an infectious disease caused by Mycobacterium bovis, with yield losses in infected herds and is also considered an important zoonosis. The methods of direct diagnosis are important for a surveillance system for bovine tuberculosis and aggregation of molecular methods brings greater diagnostic accuracy for these systems, especially those that have application in epidemiology. Among them, TB Multiplex PCR, RD Multiplex PCR, and Multispacer Sequence Typing for the identification of strains, and Variable Number Tandem Repeat (VNTR) and Spoligotyping, for fingerprint of M. bovis. Thus, the present study aimed to identify molecular samples from different regions of Brazil using these molecular techniques. The most abundant were the spoligotype SB0121, which has become widely distributed among the samples, followed by SB0295, SB1380, SB0140, and SB1050. In addition, four profiles never before described in the literature were detected, one of which was the third most frequent. The results of this study also showed that the MIRU-VNTR typing has proved superior to Spoligotyping to discriminate the isolates. In this perspective, it is believed that the research focused on molecular identification of mycobacteria, combined traditional epidemiological techniques, can significantly improve the performance of surveillance systems for bovine tuberculosis in Brazil.

A tuberculose continua sendo uma importante doença infecciosa, tanto nos humanos quanto nos animais, com índices de morbidade e mortalidade significativos e perdas econômicas em todo o mundo. A tuberculose bovina é uma doença infecciosa causada pela bactéria Mycobacterium bovis, que gera perdas na produção nos rebanhos infectados, sendo também considerada uma importante zoonose. Os métodos de diagnóstico direto têm fundamental importância para um sistema de vigilância para a tuberculose bovina e a agregação de métodos moleculares, notadamente aqueles que têm aplicação em epidemiologia, traz maior precisão diagnóstica para esses sistemas. Dentre as técnicas moleculares, destacam-se o TB Multiplex PCR, o RD Multiplex PCR e o Multispacer Sequence Typing, para a identificação dos isolados e o Variable Number Tandem Repeat (VNTR) e o Spoligotyping, como técnicas de fingerpint de M. bovis. Assim, o presente estudo teve como objetivo a identificação molecular de amostras oriundas de várias regiões do Brasil utilizando estes padrões de técnicas moleculares. Os espoligotipos identificados em maior abundância foram o SB0121, o qual apresentou-se amplamente distribuído entre as amostras, seguido pelo SB0295, SB1380, SB0140 e SB1050. Além disso, foram detectados quatro perfis nunca antes descritos na literatura, sendo que um deles foi o terceiro mais frequente entra as amostras pesquisadas. Os resultados observados neste trabalho demonstraram ainda que a tipagem pelo MIRU-VNTR revelou-se superior ao Spoligotyping para discriminar os isolados. Nesta perspectiva, acredita-se que as pesquisas moleculares voltadas a identificação de micobactérias, aliadas as técnicas epidemiológicas tradicionais, possam melhorar sensivelmente a performance dos sistemas de vigilância para tuberculose bovina no Brasil. / Tuberculosis remains a major infectious disease in both humans and animals, with morbidity and mortality and significant economic losses. Bovine tuberculosis is an infectious disease caused by Mycobacterium bovis, with yield losses in infected herds and is also considered an important zoonosis. The methods of direct diagnosis are important for a surveillance system for bovine tuberculosis and aggregation of molecular methods brings greater diagnostic accuracy for these systems, especially those that have application in epidemiology. Among them, TB Multiplex PCR, RD Multiplex PCR, and Multispacer Sequence Typing for the identification of strains, and Variable Number Tandem Repeat (VNTR) and Spoligotyping, for fingerprint of M. bovis. Thus, the present study aimed to identify molecular samples from different regions of Brazil using these molecular techniques. The most abundant were the spoligotype SB0121, which has become widely distributed among the samples, followed by SB0295, SB1380, SB0140, and SB1050. In addition, four profiles never before described in the literature were detected, one of which was the third most frequent. The results of this study also showed that the MIRU-VNTR typing has proved superior to Spoligotyping to discriminate the isolates. In this perspective, it is believed that the research focused on molecular identification of mycobacteria, combined traditional epidemiological techniques, can significantly improve the performance of surveillance systems for bovine tuberculosis in Brazil.

O Mycobacterium bovis é o agente causador da tuberculose em bovinos, zoonose que produz prejuízos para a produção de carne e leite em muitos países. Para apoiar estudos epidemiológicos no âmbito dos programas de controle, recentemente surgiram vários métodos de discriminação molecular de isolados de M. bovis. Os mais utilizados são o Spoligotyping, Mycobacterial Interspersed Repetitive Units (MIRU) e Exact Tandem Repeat (ETR), que apresentam diferentes poderes de discriminação. No presente estudo calculou-se a diversidade alélica para cada locus de MIRU e de ETR e o índice discriminatório de Hunter-Gaston (HGI) para o Spoligotyping, 10 MIRU e 3 ETR em 116 amostras de M. bovis isoladas de bovinos. Além disso, verificou-se se a capacidade de detectar agrupamentos espaciais de focos aumenta na medida em que é aumentado o poder discriminatório das análises moleculares. Comparou-se a utilização dessas três técnicas moleculares em análises espaciais para verificação de agrupamentos de focos da doença. A análise da diversidade alélica indicou que os MIRU 16, 26 e 27 e os ETR A, B e C foram os que apresentaram maior diversidade dentre os ensaiados. O HGI para cada uma das técnicas foi de: Spoligotyping = 0,738381; MIRU = 0,829835 e ETR = 0,825337. A associação desses métodos aumentou o poder discriminatório: Spoligotyping + MIRU = 0,930585; Spoligotyping + ETR = 0,931034; MIRU + ETR = 0,953373. O maior poder discriminatório foi alcançado quando as três técnicas foram associadas (HGI = 0,98051). Considerando as análises realizadas no presente estudo, o método inicial deveria ser o Spoligotyping, por diferenciar o M. bovis dos outros integrantes do complexo Mycobacterium tuberculosis. Como as associações do MIRU e do ETR com o Spoligotyping resultaram em HGI praticamente idênticos, depois do Spoligotyping, o método ETR parece ser a melhor escolha, pois é mais rápido e econômico do que o MIRU. Finalmente, o MIRU deve ser o último método a ser realizado. Assim, a escolha do método depende do poder discriminatório necessário para o objetivo em questão. Embora a capacidade de detectar agrupamentos espaciais de focos não tenha sido aumentada na medida em que cresceu o poder discriminatório das análises moleculares, a premissa continua válida. / Mycobacterium bovis is the causative organism of bovine tuberculosis, has zoonotic character and leads economic losses in livestock production in a lot of countries. To support the epidemiological researches on the disease control programs several molecular methods has been used to detect M. bovis strains. Among them, Spoligotyping, Mycobacterial Interspersed Repetitive Units (MIRU) and Exact Tandem Repeat (ETR) are the molecular analyses that present different powers of Mycobacterium bovis discrimination. In this study, allelic diversity of MIRU and ETR locus and Hunter-Gaston discriminatory index (HGI) were calculated for Spoligotyping, 10 MIRU and 3 ETR of 116 isolates of M. bovis from Brazilian bovines. The use of those three molecular techniques was compared in space analyses for verification of groupings of focuses of the disease. Besides, it was verified if the capacity to cluster of focuses increases in the measure in that the discriminatory power of the molecular analyses is increased. The analysis of the allelic diversity indicated that MIRU 16, 26, 27 and ETR A, B, C presented larger diversity among the rehearsed. The HGI for each individual technique was: Spoligotyping = 0.738381; ETR = 0.825337 and MIRU = 0.829835. The associations of these methods increased the discriminatory power: Spoligotyping + MIRU = 0.930585; Spoligotyping + ETR = 0.931034; MIRU + ETR = 0.953373. The greater discriminatory power was verified when the three techniques were associated (HGI = 0,98051). Considering the analyses performed, the initial method for differentiating M. bovis from the other species of the M. tuberculosis complex should be Spoligotyping. The association of MIRU and ETR with Spoligotyping resulted in HGI almost identical, after Spoligotyping, the ETR technique showed to be the best choice, due the shorter time to process and economic benefits when compared to MIRU. Finally, MIRU is the last method to be performed. Thus, the choice among the techniques depends on the discriminatory power necessary for the task. Although the capacity to detect clusters of focuses has not been increased in the measure in that it increased the discriminatory power of the molecular analyses, the premise continues valid.

Thesis (M.S.)--Case Western Reserve University, 2007. / [School of Medicine] Department of Pathology. Includes bibliographical references.

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:56:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6708_TALITA PAOLI20140326-101818.pdf: 1646891 bytes, checksum: de14d9da58942614842c7040aa3e1f9d (MD5) Previous issue date: 2013-08-20 / A tuberculose bovina é uma doença bacteriana crônica, causada pelo Mycobacterium bovis, que atinge animais e humanos. Além de uma importante zoonose, também causa perdas econômicas na produção de carne e leite. Até o momento a prevalência e distribuição regional da tuberculose não estão bem caracterizadas para o território brasileiro e este conhecimento é fundamental para o direcionamento das ações de controle dessa doença. Pelo exposto, buscou-se para o Estado do Espírito Santo estimar a prevalência e determinar o risco dos bovinos nas diferentes regiões do Estado de desenvolverem tuberculose com base nos achados de lesões tuberculosas em bovinos abatidos em matadouros estaduais no período de janeiro de 2009 a dezembro de 2012. A análise estatística dos dados revelou prevalência de 0.23% para tuberculose bovina no Estado. Os bovinos da região D, que abrange os municípios do extremo sul capixaba, apresentam risco relativo de desenvolver tuberculose 11.36, 7.07 e 1.7 vezes superior às regiões A, B e C respectivamente. O município de Muqui apresentou a maior prevalência (1%) e risco relativo para tuberculose bovina até 19.6 vezes superior quando comparado aos demais municípios da região D. Estes resultados indicam a necessidade de elaboração e adoção de medidas que visem o controle da tuberculose no Estado, sobretudo na região de maior prevalência.

Bovine tuberculosis (BTB) is a chronic infectious disease caused by the bacterium Mycobacterium bovis. It infects animals and can be a source of zoonosis. In the last five years, Canada has faced two outbreaks of bovine tuberculosis in the years 2018 and 2016. BTB is mainly diagnosed using the Tuberculin skin test, a test that detects the cellular immune response to administered purified protein derivative (PPD). A drawback of this test is the high level of false-positive test results caused by the immune response to PPD proteins that are conserved in non-tuberculous mycobacteria. Current serodiagnostic tests can detect the disease especially in the advanced state with, low sensitivity ranging between 9-45%. It is hypothesized that the profiling of the humoral immune responses to selected proteins will lead to the discovery of novel immunogenic protein antigens for improved BTB diagnostic tests. Bioinformatic tools used in this research for the prediction of extracellular or outermembrane proteins from M. bovis genome sequences identified 96 protein candidates. Also, a proteomic study conducted to identify proteins secreted by M. bovis, together with the review of previous proteomic studies of the PPD, led to the identification of an additional 92 protein candidates. A high throughput system was developed to efficiently express and analyze these antigens involving the PCR amplification, in vivo cloning, and in vitro expression of open reading frames (ORFs) coding for selected protein candidates. This was followed by a high throughput recombinant protein purification and a microarray analysis of these purified recombinant proteins with sera from M. bovis-infected animals. The system successfully amplified, cloned, and expressed 159 recombinant proteins. From the microarray screening, 13 antigens exhibited immunological reactions and were able to differentiate the sera of the infected animals from the controls. Out of those 13 antigens, 4 novel antigens Mb2740c, Mb0598c, Mb3469c, and Mb3453c, in addition to two well-known antigens MPB70 and MPB83, gave the highest reactivity; they were selected for further evaluation for diagnostic applications using ELISA and dot blot assays. Two antigens Mb3469c and Mb3453c had a significant ability to differentiate between infected and control cattle as tested in ELISA and dot blot assays, respectively and demonstrated by ROC curve analysis. These two novel antigens could be added to the panel of serodiagnostic antigens for improving BTB serodiagnosis and could be beneficial in the detection of outbreaks caused by certain M. bovis strains.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La tuberculosis bovina (TBB) es una enfermedad crónica y zoonótica, producida por Mycobacterium bovis. El costo de la enfermedad se relaciona a la disminución en la productividad de los animales severamente infectados, al control de movimiento animal, pruebas de diagnóstico para la detección y eliminación de animales positivos para evitar la propagación del agente, los decomisos y el menor valor de la leche. Se considera como una enfermedad ocupacional, ya que las personas que tienen mayor riesgo de contagiarse con M. bovis son quienes pasan largos periodos en contacto cercano con el ganado. La TBB en Chile se encuentra presente, y para apoyar el plan para su control y erradicación, se está estudiando el uso de la vacuna con cepa BCG de M. bovis en el ganado bovino. Fue desarrollada por Calmette y Guérin, quienes informaron la inducción de protección en el ganado contra la exposición a la bacteria. Como esta vacuna corresponde a una cepa atenuada de M. bovis, el objetivo de este trabajo es evaluar la interferencia que tiene su aplicación, con el diagnóstico tradicional de la infección en planteles lecheros de la Región Metropolitana. Para ello, 56 vaquillas fueron vacunadas y 48 fueron inyectadas con NaCl 0,9% a modo de controles. A todas se les tomó muestra de sangre tres y seis meses después de la vacunación las que luego fueron estimuladas con distintos antígenos y se dejaron incubar. Una vez finalizado el tiempo de incubación, se cosecharon los plasmas y finalmente se procedió a realizar el ensayo diagnóstico, ELISA IFN-γ con antígenos DIVA añadidos. Los antígenos DIVA corresponden a antígenos que fueron eliminados de la cepa vacunal. Los resultados demostraron un aumento en la cantidad de individuos falsos positivos al diagnóstico tradicional de TBB en los primeros seis meses después de la vacunación. Esto quiere decir, que fueron positivos a la tuberculina bovina, pero negativos a la prueba DIVA (Detecting Infected among Vaccinated Animals), debido a la reacción con la vacuna. Se concluye que se hace necesario utilizar una prueba complementaria para el diagnóstico de la tuberculosis en el ganado, en este caso, la prueba DIVA, durante los primeros meses después de vacunar con la cepa M. bovis BCG / Bovine tuberculosis is a chronic and zoonotic disease, caused by Mycobacterium bovis. The cost of the disease is associated to the decrease in the productivity of severely infected animals, the restrictions for the animal movement, the diagnostic tests for the detection and elimination of positive animals to avoid the spread of the agent, confiscations and the lower price of milk. It is considered an occupational disease, since people who have the highest risk for M. bovis zoonotic infection are those who spend long time in close contact with livestock. Bovine tuberculosis in Chile is an endemic disease, and the plan for the control and eradication of the disease is being supported by the study of the vaccination with the M. bovis BCG strain in cattle. It was developed by Calmette and Guerin, who reported the induction of protection in cattle against exposure with M. bovis. As this vaccine corresponds to a strain of M. bovis, the objective of this work is to evaluate the interference that has its application, with the traditional diagnosis of infection in dairy farms from the Metropolitan Region. For this, 56 heifers were vaccinated and 48 were injected with NaCl 0,9%. Blood samples were taken at three and six months after the vaccination. Once at the lab, samples were stimulated with different antigens and, after an incubation period, plasmas were harvested and IFN-γ detected by carrying out an ELISA diagnostic assay.-- The results showed an increase in the number of false positive individuals to the traditional diagnosis of bovine tuberculosis in the first six months after vaccination. This means that they were positive to bovine tuberculin, but negative to the DIVA (Detecting Infected among Vaccinated Animals) test, due to the reaction with the vaccine. It is concluded that it is necessary to use a complementary test for the diagnosis of tuberculosis in cattle, in this case, the DIVA test, during the first months after vaccination with the M. bovis BCG strain / Convenio SAG-FAVET

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 2001. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 73-91).