Avaliou-se a atividade conservante do Borato de Sódio para amostras de tecidos com lesão tuberculosa. Inicialmente, foi feito um teste de inoculação experimental em hamsters. A partir dos resultados observados neste estudo, foram selecionadas as variáveis para a segunda etapa do experimento, com lesões de abatedouro de bovinos. Noventa hamsters foram inoculados experimentalmente com Mycobacterium bovis e foram eutanasiados 40 dias após a inoculação, quando foi feita a colheita dos baços. Esses órgãos foram, individualmente, armazenados em solução saturada de Borato de Sódio, em quatro períodos de armazenamento distintos (30, 60, 90 e 120 dias após a eutanásia), em duas temperaturas (27ºC e 37ºC), exceto o grupo controle processado no dia da eutanasia. Na segunda etapa do experimento, 69 lesões de órgãos de bovinos foram colhidas de um abatedouro e armazenadas em solução de borato de sódio em três períodos de armazenamento distintos (30, 60 e 90 dias após a colheita), na temperatura de 27ºC, exceto o grupo controle, processado no dia de entrada no laboratório. As análises dos dois experimentos foram feitas separadamente e mostraram-se concordantes. Em relação aos períodos de armazenamento dos órgãos em Borato de Sódio foram consideradas duas variáveis, a proporção de isolados de micobactérias a partir dos órgãos e o número de U.F.C. de micobactérias desses mesmos órgãos. Com base nos resultados observados em ambos os testes, concluiu-se que o armazenamento de tecidos com lesões tuberculosas em solução de Borato de Sódio pode ser feito por até 30 dias em altas temperaturas, 27ºC a 37ºC. Além disso, observou-se que conforme a temperatura ambiente aumenta, diminui a sensibilidade do isolamento de M. bovis a partir de amostras armazenadas em solução saturada de Borato de Sódio. / The preservative activity of Sodium Tetraborate was evaluated for tissues with tuberculous lesion. Initially, an experimental infection essay was performed in hamsters. Based on the results observed in this essay, the variables for the second experiment, involving samples from a slaughterhouse, were selected. The 90 animals were euthanized 40 days after inoculation when the spleens were colected. These organs were individually stored in saturated Sodium Tetraborate solution, in four distincts storage periods (30, 60, 90 and 120 days after the euthanasia), in two temperatures (27º and 37ºC), except for the control group processed on the euthanasia day. On the second part of the experiment, sixty nine samples of bovine organs with tuberculous lesions were collected from a slaughterhouse. The samples were stored in saturated Sodium Tetraborate solution, in three distincts storage periods (30, 60 and 90 days after collection), at the temperature of 27ºC, except for the control group processed on the day of entry in the laboratory. The analysis of both experiments were done separately and were concordant. In relation to the storage periods of the organs in Sodium Tetraborate solution, two variables were considered, the proportion of mycobacterial isolates from the organs and the number of mycobacterial C.F.U from the same organs. Based on the results observed on both essays, it was concluded that tissues with tuberculous lesions can be stored in Sodium Tetraborate solution up to 30 days in high temperatures, 27ºC a 37ºC. Furthermore, it was observed that as the environmental temperature increases the M. bovis isolation sensibility from the samples stored in Sodium Tetraborate decreases.

A resistência térmica dos microrganismos sofre influência, entre outros fatores, das características do agente e das características do substrato, como o teor de gordura. Um dos objetivos da pasteurização do creme é a eliminação dos patógenos eventualmente presentes no leite. Entretanto, não há padrão de tempo e temperatura de pasteurização para este produto na legislação. O Mycobacterium bovis é considerado o patógeno não formador de esporo de maior resistência térmica que pode normalmente ser transmitido pelo leite. Assim, este trabalho se propõe a avaliar a inativação de Mycobacterium bovis (espoligotipo BR024) em creme de leite fresco submetido a alguns parâmetros comerciais de pasteurização. Creme de leite foi contaminado e pasteurizado em Banho-Maria a 75°C, 80°C, 85°C e 90°C, por 5 e 15 segundos. O agente foi quantificado por semeadura em duplicata das diversas diluições em meio Stonebrink, após incubação a 36°C/45 dias. A redução na população variou de 3,9 log UFC/mL até a 6,8 log UFC/mL o que mostra que, nas condições do estudo, todos os binômios estudados mostraram-se capazes de reduzir a carga contaminante para níveis tão baixos ou menores que 0,1 log UFC/mL, considerando a máxima contaminação inicial natural do leite por M. bovis (4 log UFC/mL), segundo Ball (1943) / The thermal resistance of microorganisms is influenced by the agent in question, the initial microbial load and the characteristics of the substrate that can exert a protective effect on the cell, for example, the fat content. The pasteurization of whipping cream aims to eliminate pathogen microorganisms that may occasionally be present in milk. However, there is no standard in the law of time and temperature for this product, making it necessary more detailed study to consider the specific feature of thermal resistance of microorganisms at different temperatures for pasteurization, especially considering the high fat product. Mycobacterium spp is considered the pathogen spore-non-forming of higher heat resistance that can be transmitted by milk, among species, M.bovis is the most pathogenic. Therefore, this study aims to evaluate the inactivation of Mycobacterium bovis (spoligotype BR024) in fresh whipping cream subjected to some parameters of commercial pasteurization. Whipping cream was contaminated and pasteurized in a water bath at 75°C, 80°C, 85°C and 90°C for 5 and 15 seconds. The agent was measured in duplicate in the middle Stonebrink after incubation at 36°C/45 days. The reduction in the population ranged from 3.9 log CFU / mL up to 6.8 log CFU/ mL which shows that under the conditions of the study, all binomials studied were able to reduce the contaminant load to such low levels or lower than 0.1 log CFU / ml, the maximum initial natural contamination of milk by M. bovis (4 log CFU / mL), according to Ball (1943)

A técnica de camada delgada em placas com meio de Middlebrook 7H11 foi comparada com a técnica padrão de cultura em meio de Stonebrink, a fim de se avaliar a sensibilidade e o tempo de detecção de micobactérias em amostras de leite, experimentalmente inoculadas com Mycobacterium bovis (estirpe AN5), em uma diluição 10-2, e submetidas a duas diferentes técnicas de processamento, utilizando-se da gordura (técnica 1)e do sedimento (técnica 2), descontaminadas pelo método de Petroff modificado (adicionado de Tween 80) e confrontadas com a técnica do leite total submetida ao método de Petroff e semeadas nos dois meios. Os resultados destas técnicas (1 e 2) foram comparados entre si pelo teste não paramétrico de Wilcoxon, e entre os resultados obtidos na técnica de leite total submetida ao método tradicional de Petroff, por meio do teste não paramétrico de Mann-Whitney. Posteriormente, amostras de leite nas diluições 10-3, 10-4 e 10-5 foram então submetidas às mesmas técnicas de processamento e descontaminação para averiguação de sensibilidade. Os resultados obtidos demonstraram que: 1) a técnica de cultivo de micobactérias em amostras de leite no meio de Middlebrook 7H11 se mostrou viável frente à tradicional; 2) a técnica de camada delgada permitiu a visualização precoce das micobactérias quando comparadas ao meio de Stonebrink; 3) as técnica 1 e 2 forneceram maior recuperação de micobactérias e maior proporção de cultivos positivos nos dois empregados; 4) a técnica de camada delgada em meio de Middlebrook 7H11 modificado pode ser usada como uma técnica complementar aos métodos tradicionais de diagnóstico da tuberculose bovina em amostras de leite para fins de vigilância epidemiológica. / The modified thin layer Middlebrook 7H11 cultivation technique was compared to the tradicional culture technique using the Stonebrink in order to evaluate the sensibility and the time for the detection of positive cultures of mycobacteria in milk samples, experimentally inoculated by Mycobacterium bovis (strain AN5), 10-2 dilution, were submitted by two types of procedures named technique 1 (milk fat) and 2 (milk sediment), descontamined by modified Petroff method, added with Tween 80, and compared with total milk samples submitted to tradicional Petroff method, in the same media types. The results of the two tecniques were compared within each other by the non-parametric Wilcoxon test, and within the results of standard milk submitted by the tradicional Petroff method, by the non-parametric Mann-Whitney. Milk samples were diluted to 10-3, 10-4 and 10-5 and submitted by the tecniques 1 and 2 descontaminated by the modified Petroff method, and total milk by tradicional Petroff method to averiguate the sensibility. The results found in this experiment demonstrated that 1) the modified thin layer technique of isolation of mycobacteria in milk samples was practicable against the tradicional one; 2) the time needed for the detection of mycobacteria colonies was slightly less with the thin layer technique than the tradicional culture method; 3) techniques 1 and 2 gave more number of colonies and more proportion of positive culture than the tradicional one in all media used; 4) this technique should be used as a complementary method to the tradicional one in the diagnostic of bovine tuberculosis from milk samples in orther to improve epidemiologic vigilance.

Avaliou-se a atividade micobactericida de cinco desinfetantes químicos frente a uma estirpe de Mycobacterium bovis isolada de caprinos, tipificada por PCR (polymerase chain reaction) e com 32 dias de cultivo no meio de Stonebrink. O teste de desinfetantes foi realizado utilizando-se a técnica de cultivo em camada delgada de ágar Middlebrook 7H11 modificado e foi comparado ao teste em tubos com meio de Stonebrink, tradicionalmente utilizado no laboratório de zoonoses bacterianas da FMVZ/USP. Os cinco desinfetantes ensaiados foram: \"A\" : grupo controle; \"B\" - hipoclorito de sódio (2,5 % de cloro ativo); \"C\"- glutaraldeído (2 %); \"D\" - ácido peracético 0,25 % e peróxido de hidrogênio 5 %; \"E\" - iodóforo (2,6% de iodo) e \"F\"- compostos fenólicos (orto-fenilfeno 12,243 g; orto-benzil paraclorofenol 11,080 g; para-terceário amilfeno 4,1222 g.). A diluição destes produtos foi feita conforme recomendação do fabricante. Os meios de cultura adotados para o procedimento de isolamento e preparo da suspensão bacteriana foram o meio de Stonebrink e o meio de Middlebrook 7H11 modificado. Os testes foram realizados na presença e ausência de matéria orgânica e à temperatura ambiente (21 ± 2°C) e à temperatura de 4 °C. Os resultados obtidos nas contagens de colônias foram transformados em percentual de redução para análise estatítica e demostraram que: a técnica de cultivo de micobactérias em camada delgada no meio de Middlebrook 7H11 permitiu uma visualização precoce das micobactérias e se mostrou viável para realização de testes de desinfetantes; os cinco tipos de desinfetantes analisados apresentaram atividade micobactericida e o melhor desempenho foi obtido pelo ácido peracético seguido pelo hipoclorito de sódio. A atividade micobactericida dos iodóforos foi instisfatória na presença de matéria orgânica. / The mycobactericidal activity of five chemical disinfectants was evaluated against a strain of Mycobacterium bovis isolated from a goat, typified by PCR (polymerase chain reaction) and with 32 days of growth in the Stonebrink medium. The disinfectants were tested using the modified thin layer Middlebrook 7H11 cultivation technique and it was compared to the test made in tubes with Stonebrink medium, which is tradicionally used at the Bacterian Zoonosis Laboratory of the Veterinary Medicice Faculty of the University of São Paulo. The five disinfectants were: \"A\" was the control group; \"B\"- sodium hypochlorite (2,5% of active chlorine); \"C\"- glutaraldehyde (2 %); \"D\"- peracetic acid (0,25 %) and hydrogen peroxide (5 %); \"E\" - iodine compounds (2,6%) e \"F\"- fenolic compounds (orto-fenilfeno 12,243 g; orto-benzil paraclorofenol 11,080 g; para-terceario amilfeno 4,122 g.). The products were diluted according to label instructions. The culture media used for the isolation procedure and preparation of the bacterian suspension were the Stonebrink and modified Middlebrook 7H11 medium. The assays were performed either in the presence or absence of organic matter, at temperatures of 4 °C and 21 ± 2°C The colony counting results were transformed into reduction percentages for the statistical analysis and concluded in: the modified thin layer Middlebrook 7H11 cultivation technique permitted an earlier visualization of the colonies and was practible for the realization of the disinfectants tests; the five disinfectants showed mycobactericidal activity and the peracetic acid had the best performance followed by the sodium hypochlorite. The mycobactericidal activity of the iodine compound was unsatisfactory when in the presence of organic matter.

Dada a importância do Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose (PNCEBT), a necessidade de uma eficiente caracterização bacteriológica dos focos como ponto fundamental do sistema de vigilância e as dificuldades encontradas pelos laboratórios quanto aos métodos de isolamento de Mycobacterium bovis fizeram crescer o interesse do meio científico por estudos, sobretudo moleculares, de isolados M. bovis. Para a realização dessas técnicas moleculares, é necessária abundância de massa bacilar, obtida através da manutenção dos isolados em laboratório e repiques em meios de cultura. Entretanto o crescimento fastidioso do M. bovis em meios de cultura traz grandes dificuldades para essas operações. Assim sendo, o presente estudo teve por objetivos: 1º) Comparar três métodos de descontaminação para homogeneizados de órgãos, etapa que precede a semeadura em meios de cultura, onde 60 amostras de tecidos com lesões granulomatosas, provenientes de abatedouros bovinos do Estado de São Paulo, foram colhidas e imersas em solução saturada de Borato de Sódio e transportadas para o Laboratório de Zoonoses Bacterianas do VPS-FMVZ-USP, onde foram processadas até 60 dias após a colheita. Essas amostras foram submetidas a três métodos de descontaminação: Básico (NaOH 4%), Ácido (H2SO4 12%) e 1- Hexadecylpyridinium chloride a 1,5% (HPC) e o quarto método foi representado pela simples diluição com solução salina (controle). Os resultados foram submetidos à comparação de proporções, pelo teste de &#967;², na qual verificou-se que o método HPC foi o que apresentou menor proporção de contaminação (3%) e maior proporção de sucesso para isolamento de BAAR (40%). 2º) Comparar três diferentes meios criopreservates para M. bovis, foram utilizados 16 isolados identificados pela técnica de spoligotyping. Cada um desses isolados foi solubilizado em três meios (solução salina, 7H9 original e 7H9 modificado), e armazenado em três diferentes temperaturas (-20ºC, -80ºC e -196ºC), sendo descongelado em três diferentes tempos (45, 90 e 120 dias de congelamento). Antes do congelamento e após o descongelamento foram feitos cultivos quantitativos em meios de Stonebrink Leslie. Os porcentuais de redução de Unidades Formadoras de Colônias (UFC) nas diferentes condições foram calculados e comparados entre si através de métodos paramétricos e não-paramétricos. Os resultados obtidos foram: na análise da variável tempo, em 90 dias de congelamento foi observada uma maior proporção de perda de M. bovis, quando comparado ao tempo 120 dias (p=0,0002); na análise da variável temperatura, foi observada uma diferença estatística significativa entre as proporções de perda média nas temperaturas de -20ºC e -80ºC (p<0,05); na análise da variável meio, foi observada uma diferença significativa (p=0,044) entre os meios A e C, para 45 dias de congelamento e -20ºC de temperatura de criopreservação. Embora as medianas dos porcentuais de perdas de UFC terem sido sempre inferiores a 4,2%, permitiram sugerir que o melhor protocolo de criopreservação de isolados de M. bovis é solubilizá-los em 7H9 modificado e mantê-los à temperatura de -20ºC / In the context of the National Program of Control and Eradication of Brucellosis and Tuberculosis (PNCEBT), the necessity of an efficient bacteriologic characterization of the infected herds as a cornerstone of the monitoring system and the difficulties faced by the laboratories regarding the methods for Mycobacterium bovis isolation led to a growing interest for scientific studies, especially molecular, of M. bovis isolates. To use these molecular techniques it is necessary to have an abundant bacillary mass, obtained through the maintenance of isolates in laboratory and replication in culture media. However the fastidious growth of M. bovis in culture media brings out great difficulties for these activities. Thus, the present study has the following objectives: First, to compare three decontamination methods for organ homogenates, phase that precedes the sowing in culture media, 60 samples of tissues with granulomatosis injuries, proceeding from bovine slaughterhouses in the State of São Paulo, were obtained, immersed in sodium borato saturated solution and transported to the Laboratório de Zoonoses Bacterianas of the VPS-FMVZ-USP, where they were processed up to 60 days after the sampling. These samples were submitted to three methods of decontamination: Basic NaOH 4%, Acid (H2SO4 12%) and 1- Hexadecylpyridinium chloride (HPC) 1.5% and a simple dilution with saline solution (control method). The results were analysed by means of the &chi test to compare proportions, and it was verified that HPC method presented the smallest proportion of contamination (3%) and the greatest proportion of success for M. bovis isolation (40%). Second, to compare three different cryopreservation media for M. bovis, 16 isolates identified by the technique of spoligotyping were used. Each one of these isolates was solubilized in three media (original saline solution, 7H9 and 7H9 modified), and stored in three different temperatures (-20ºC, -80ºC and -196ordm;C), and defrosted in three different time periods (45, 90 and 120 days of freezing). Before the freezing and after the unfreezing, quantitative cultivations in Stonebrink Leslie media were carried out. The proportions of Colony-Forming Units (CFU) loss in the different conditions were calculated and compared with one another through parametric and non-parametric methods. The results obtained were: in the analysis of the variable time, at 90 days of freezing a bigger proportion of CFU loss was observed when compared to 120 days (p=0,0002); in the analysis of the variable temperature, a statistically significant difference was observed between the average proportions of CFU loss for the temperatures of -20ºC and -80ºC (p<0,05); in the analysis of the variable media, a significant difference was observed (p=0,044) between the media A and C, for 45 days of freezing and -20ºC of cryopreservation temperature. Althougth the medium ones of the proportion of losses of CFU to always have been inferior 4,2%, had allowed to suggest that the best protocol for cryopreservation of M. bovis isolates is to solubilize them in 7H9 modified medium and to keep them at a temperature of -20ºC

O BCG é um bacilo atenuado de Mycobacterium bovis atualmente investigado na expressão de antígenos heterólogos. Genes oriundos de vírus, bactérias e parasitas são clonados em vetores de expressão micobacterianos e a partir deles, são geradas cepas de BCG recombinante, rBCG. Duas cepas micobacterianas, BCG e M. smegmatis, demonstraram a expressão do antígeno SmStoLP-2 e animais imunizados com este BCG não demonstra diferença na proteção contra a infecção por cercárias, apesar da resposta imune diferenciada. A otimização do códon de SmTSP-2 e SmVAL-5 permitiu sua expressão em M. smegmatis recombinante, mas não em BCG. M. smegmatis transformado com uma biblioteca de plasmídeos contendo o promotor L5p mutagenizado à montante de egfp demonstra acentuada diferença na fluorescência. 3 destes plasmídeos definidos como \'\'forte\'\' e \'\'fraco\'\', com base em sua capacidade de produzir GFP foram utilizados para expressar em BCG o antígeno Sm29 em maior e menor nível. / BCG is an attenuated bacillus derived from Mycobacterium bovis currently being investigated to express foreign antigens. Genes from viruses, bacteria and parasites are cloned to mycobacterial vectors and with them, recombinant BCG strains are created. Recombinant BCG and M. smegmatis strains where capable to express SmStoLP-2 and mice immunized with these rBCGs do not show better protection against infection with cercariae, although the distinct immune response observed. The use of codon optimization made possible the expression of SmTSP-2 and SmVAL-5 in M. smegmatis but not BCG. M. smegmatis transformed with a library of plasmids containing the L5p upstream egfp gene show a wide range in fluorescence. 3 of these plasmids strong and weak defined as their ability to produce GFP were used to express in BCG the antigen Sm29 at different levels by each promoter.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Mycobacterium bovis es el microorganismo zoonótico causante de la tuberculosis bovina, patología infectocontagiosa de distribución mundial responsable de graves problemas económicos y de salud en el sector ganadero. Debido a que varios estudios han establecido la utilidad de las secuencias de inserción IS6110 e IS1081 en la identificación y tipificación de cepas del complejo Mycobacterium tuberculosis, el objetivo de este estudio fue establecer protocolos de PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) para la amplificación de las secuencias IS6110 e IS1081 y determinar la existencia de diferencias en su capacidad de detectar Mycobacterium bovis en tejidos bovinos. El análisis estadístico de los resultados sugirió que no existen diferencias significativas entre los ensayos de PCR convencional basados en IS1081 e IS6110, lo que contrasta con lo señalado por otros autores, quienes postulan que IS1081 está presente en mayor número de copias en cepas de Mycobacterium bovis, y por tanto, su utilidad en el diagnóstico es mayor. Debido a que la concordancia de ambas pruebas fue baja, se requieren nuevos estudios destinados a determinar la aplicabilidad de ambas secuencias en conjunto, por ejemplo en una prueba de PCR múltiple, ya que este trabajo sugiere que son complementarias para el diagnóstico de tuberculosis bovina / Proyecto FIV 121014019102003

Orientador: Germano Francisco Biondi / Banca: Oswaldo Durival Rossi Júnior / Banca: Jean Guilherme Fernandes Joaquim / Resumo: A tuberculose bovina é causada principalmente pelo Mycobacterium bovis, uma enfermidade mundialmente reconhecida que além de ser um problema de saúde pública proporciona grandes perdas econômicas e impactos negativos ao mercado internacional da carne. O objetivo deste trabalho foi observar a prevalência de lesões sugestivas de tuberculose em um frigorífico localizado na região sudeste do estado de São Paulo, Brasil. Os dados foram coletados a partir das papeletas do serviço de Inspeção Federal, nas quais observou-se a proporção de positividade de tuberculose bovina quanto ao sexo do animal, ao tipo de lesão e a classificação dos linfonodos. Os resultados avaliados demonstraram que não houve uma diferença relevante nos índices de positividade quanto ao sexo masculino e feminino nos animais abatidos nem quanto às lesões calcificadas e caseosas. Porém, os linfonodos mais acometidos foram os retrofaringeanos e mediastínicos; que entre os anos de 2.007 e 2.011, respectivamente, os retrofaríngeos apresentaram prevalência de 55,42%, 53,62%, 53,20%, 47,01%, 44,16% e os mediastínicos, revelou uma prevalência de 36,06%; 39,05%, 38,43%, 36,53% e 35,93%. No entanto, os demais linfonodos como traqueo-brônquico, parotidiano, esofagiano, hepático, apical e mesentéricos não obtiveram grandes índices. O presente estudo demonstra a importância do exame post-mortem e dos mapas nosográficos nos estabelecimentos matadouro-frigorífico para identificar os animais infectados, controlar a doença e promover a Saúde Pública / Abstract: Bovine tuberculosis is caused mainly by Mycobacterium bovis, a globally recognized disease that besides being a public health problem is of great economic loss and negative impact on the international meat market. This study aimed to observe the prevalence of lesions that suggest tuberculosis in a refrigerator located in the southeastern state of Sao Paulo, Brazil. Data were collected from the ballots of Federal Inspection and a proportion of positive bovine tuberculosis on the sex of the animal, the type of injury and classification of lymph nodes were observed. The evaluated results showed that there was no significant difference in rates of positivity about the male and female animals slaughtered and the calcified and caseous lesions. But the lymph nodes were the most affected retropharyngeal and mediastinal that between the years 2007 and 2011, respectively, the retropharyngeal presented the prevalence of 55.42%, 53.62%, 53.20%, 47.01%, 44, 16% and mediastinal revealed a prevalence of 36.06%, 39.05%, 38.43%, 36.53% and 35.93%. Further as tracheo-bronchial lymph nodes, parotid, esophageal, liver, and mesenteric apical was also evaluated but did not get great rates. The present study demonstrates the importance of post-mortem examination and maps nosographic slaughter and fridgeestablishments to identify infected animals to control disease and to promote public health / Mestre

Thesis (PhD (Veterinary Tropical Diseases, Veterinary Science))--University of Pretoria, 2009.

The overall objective of this thesis is to provide an enhanced understanding of the epidemiology of Mycobacterium bovis in the Greater Riding Mountain Ecosystem (GRME) and provide a scientific basis for disease management from a systems perspective now and into the future. M. bovis prevalence has been consistently higher in elk compared to white-tailed deer, and higher within a defined Core area compared to areas outside. Prevalence in both species declined significantly between 2003 and 2013. Only one infected elk was detected in 2013; the last infected white-tailed deer was detected in 2009 and the last infected cattle herd was detected in 2008. Parallel interpretation of three blood-based assays resulted in effective selective culling of elk within Riding Mountain National Park (RMNP) with predictive value negative of 100%. A lymphocyte stimulation test (LST) was the most sensitive single blood-based assay, but was difficult to perform under field conditions. Combinations of humoral antibody tests and cell-mediated tests performed better than any single test, likely detecting the broad spectrum of host pathology present. Seven of 14 risk factors were identified for wild cervids testing culture positive with the three being most strongly associated with culture positivity being geographical location (within core area), elk density and year category (sampling phase). Age, sex, and surveillance method were also significant factors, but species was not. A rapid decline in elk density in combination with fencing of hay storage yard and non-selective culling were likely key factors resulting in the M. bovis prevalence decline observed in elk, and an overall decline in prevalence from 1997 for both species. Elk were the primary reservoir species in this episystem, but are now considered a spillover host, while white-tailed deer have always been a spillover host due to lower densities and shorter life expectancy. Very limited strain diversity exists within the GRME with one spoligotype restricted to cattle and associated with a limited outbreak in five herds in the early 1990’s, and three other shared strains between cattle and wildlife. A single monomorphic type was present in white-tailed deer. Significant spatial overlap of wildlife and cattle isolates delineated a core area where management activities are now focused. The relative simplicity of this episystem has allowed significant progress on control and management to be achieved, despite being located within a national park. Wildlife surveillance will need to continue until at least 2022 in order to achieve a 95% probability of freedom using three different surveillance streams. Latent cases are likely to be extremely rare in future and unlikely to result in ongoing transmission as the factors that created this wildlife reservoir no longer exist. Wild cervids should not be considered ideal maintenance hosts for M. bovis in North America but rather facultative hosts; acting either as a reservoir or spillover host dependent on regional/local density and presence/absence of baiting and feeding.