Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-06-19T21:38:54Z No. of bitstreams: 1 CláudioFigueira Caracterização de mutantes de Leptospira spp.....pdf: 700655 bytes, checksum: 75bf81169cbe8bb9b8be3dc83344b26e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-19T21:38:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CláudioFigueira Caracterização de mutantes de Leptospira spp.....pdf: 700655 bytes, checksum: 75bf81169cbe8bb9b8be3dc83344b26e (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / O gênero Leptospira inclui espécies não patogênicas, que vivem exclusivamente no ambiente, assim como espécies patogênicas capazes de infectar o homem e animais. Há poucos anos, os genomas de três espécies patogênicas e de uma não patogênica foram sequenciados. Leptospira interrogans é a principal espécie causadora da leptospirose humana, especialmente nas áreas urbanas do Brasil, e cerca de 1200 genes podem estar associados à virulência na L. interrogans. Ferramentas moleculares, capazes de modificar geneticamente espécies de leptospiras, são essenciais para a compreensão do papel funcional destes genes. Neste trabalho, foram caracterizados mutantes obtidos por diferentes abordagens moleculares para avaliação de potenciais fatores de virulência em L. interrogans. Utilizando-se a técnica de mutagênese randômica, por meio da inserção do transposon Himar1, foi obtido um mutante com o gene interrompido da lipoproteína Loa22, a qual possui um segmento idêntico ao domínio OmpA. Verificou-se que a ausência de Loa22 levou a perda de virulência desta bactéria em modelos animais, enquanto que o mutante com o gene loa22 reconstituído voltou a apresentar virulência semelhante à cepa selvagem original, sendo a primeira descrição de um fator de virulência em leptospiras. Para avaliar especificamente o papel da LigA e da LigB, proteínas com várias evidências de associação com virulência, duas estratégias foram utilizadas: a recombinação homóloga por mutação dirigida para obter a deleção do gene ligB em L. interrogans cepa L1130; e um plasmídeo replicativo para a inserção do gene ligA e ligB em L. biflexa. Como resultado, verificou-se que a ausência de LigB não é suficiente para provocar a perda de virulência da L. interrogans; e por fim, foi demonstrado que a expressão heteróloga de LigA e LigB em L. biflexa conferiu aumento na adesão em cultura de célula e em fibronectina. Este último estudo mostra que a expressão heteróloga em L. biflexa pode servir para caracterizar fatores de virulência do agente causador da leptospirose. O conjunto destes achados contribui para a compreensão da patogênese da leptospirose e poderá cooperar no desenvolvimento uma vacina eficaz para o controle da transmissão desta doença e para obtenção de novos métodos de diagnóstico para leptospirose. / The genus Leptospira includes non-pathogenic free-living and pathogenic species that can infect humans and animals. Recently the genome of four species, including a non-pathogenic one, was published. Leptospira interrogans is the main species that causes human leptospirosis, especially in the urban areas of Brazil, and about 1200 genes may be associated with virulence in this specie. For that reason, molecular tools used to genetically modify this agent are essential to understanding the biology of the agent and the role of these genes. In this work, mutants obtained by different molecular approaches were characterized to identify potential virulence factors in L. interrogans. The random mutagenesis with Himar1 transposon was used to obtain a mutant with interruption of the gene loa22, which product is a described protein with a predicted OmpA domain. The mutant showed loss of virulence in animal models, and the virulence was restored with the complementation with the homologous gene, becoming the first description of a virulence factor in leptospires. To evaluate the role of LigA and LigB, described putative virulence factors in leptospires, two different approaches were used: allelic exchange using targeted mutagenesis to disrupt the ligB gene in L. interrogans strain Fiocruz L1 130; and the use of replicative plasmid to insert the heterologous genes of ligA and ligB in the L. biflexa. As result, we showed that the absence of LigB is not sufficient to cause the loss in the virulence of L. interrogans; and it was also shown that heterologous expression of LigA and LigB in L. biflexa confers enhanced adhesion to cell culture and fibronectin. This study indicates that L. biflexa can serve as a surrogate host to characterize the role of virulence factors in Leptospira sp. .These results contribute to a better understanding of the pathogenesis of leptospirosis and may be important in studies for the development of an effective vaccine and new diagnostic methods.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-13T13:25:13Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Jackeline Patrícia de Moares.pdf: 1401335 bytes, checksum: b221f645635c631b3ba5eb43cacaa051 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-13T13:25:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Jackeline Patrícia de Moares.pdf: 1401335 bytes, checksum: b221f645635c631b3ba5eb43cacaa051 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / Os derivados pirimidínicos compreendem um diverso e interessante grupo de compostos. O anel pirimidínico está presente na estrutura de vários produtos farmacêuticos, tais como drogas para hipertensão, ansiolíticos, bem como em agentes antimicrobianos e antitumorais. Em estudos anteriores, foi realizada a síntese do composto Análise de genotoxicidade de compostos 4-amino-2,6-diaril-5-carbonitrila-pirimidínicos, os derivados 5 a-d foram testados em relação a atividades antiinflamatórias com resultados entusiasmantes. Porém seus efeitos na molécula de DNA são desconhecidos. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade mutagênica dessos compostos 5 a-d em cultura de células. A metodologia utilizada foi o teste do micronúcleo in vitro, que é referência para a avaliação de atividade mutagênica, com células das linhagens HeLa e HepG2. Os compostos foram dissolvidos em DMSO e depois diluídos em meio de cultura até atingirem as concentrações testadas: 364 μg/mL, 61 μg/mL, 10 μg/mL e 1,7 μg/mL. As frequências de micronúcleos nas culturas com cada concentração foram comparadas com culturas que receberam apenas DMSO e serviram como controles negativos em cada experimento. As análises estatísticas foram realizadas utilizando-se a análise de variância com pós-teste de Tukey. Não houve diferença significativa na frequência de micronúcleos entre qualquer dos compostos, em nenhuma das concentrações, e os controles negativos. Estes resultados demonstram que, nestas concentrações, os compostos pirimidínicos testados não apresentam atividade mutagênica. Mais testes de segurança devem ser feitos com tais compostos antes de testá-los efetivamente como fármacos, mas danos ao DNA podem ser descartados dos riscos que tais compostos oferecem.

Made available in DSpace on 2018-08-02T00:16:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9728_Dissertação_19_04_2016 OK.pdf: 1279544 bytes, checksum: 27f093183d758b0f2205caf2e52df6d3 (MD5) Previous issue date: 2016-03-28 / Coriandrum sativum L, conhecido como coentro, pertencente à família Apiaceae, trata-se de uma hortaliça originária do continente Europeu e Africano. Desta planta são aproveitáveis as flores, folhas e frutos. Além de seu papel na culinária, desempenha papel relevante na medicina popular sendo recomendada para tratamento de diversas doenças. É rica em compostos fenólicos, frequentemente relacionados a efeitos antioxidantes. Em geral, o substrato envolvido no processo de cultivo de plantas medicinais pode estar relacionado à produção de metabólitos secundários com princípios bioativos de interesse. Além da forma de cultivo, outro fator relevante na produção de metabólitos é o estádio de desenvolvimento na qual a planta se encontra. Devido à carência de trabalhos com esse enfoque envolvendo o coentro, o presente estudo teve o objetivo de avaliar a influência da adubação e de dois estádios de desenvolvimento vegetal (vegetativo e floração), na produção de metabólitos secundários de Coriandrum sativum, bem como relacionar essas condições com o potencial quimioprotetor, antimutagênico e antioxidante do extrato hidroalcóolico de suas folhas. As plantas foram cultivadas na região de Venda Nova do Imigrante/ES - Brasil, mantidas, em campo, sob os regimes de adubação orgânica (esterco bovino) e adubação química com nitrogênio, fosfato e potássio (NPK), envolvendo dois estádios de desenvolvimento (vegetativo e a floração). As partes aéreas foram secas e submetidas à maceração em etanol 70% para a obtenção do extrato bruto o qual passou por uma caracterização fitoquímica por métodos fitoquímicos preliminares e espectrometria de massas. Foi detectada a presença de metabólitos como cumarinas, esteroides e flavonoides, em todos os extratos e a espectrometria de massas apontou picos moleculares similares entre os extratos avaliados. O extrato bruto de C. sativum no estádio vegetativo e adubação química apresentou melhor atividade antioxidante, segundo o teste DPPH, em comparação aos demais grupos de tratamento e o extrato obtido a partir de plantas no estádio vegetativo apresentou maior redução na frequência de micronúcleos, em relação ao controle positivo, tanto no ensaio de pré-tratamento quanto no simultâneo.

Orientadores : Edi Lucia Sartorato, Andrea Trevas Maciel-Guerra / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-28T10:46:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_CamilaAndreade_M.pdf: 22663535 bytes, checksum: eafe5501ec4ef1c5c411ae66d825395b (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Segundo dados da Organização Mundial de Saúde (OMS), 10% da população mundial apresenta algum tipo de problema auditivo e esta prevalência aumenta com a idade. Não há dados oficiais da prevalência da deficiência auditiva no Brasil. Em países desenvolvidos a deficiência auditiva está presente em cerca de 1 em cada 1.000 crianças, estimando-se que 60% dos casos de surdez pré-lingual isolada tenham bases genéticas. Embora no Brasil a maioriados casos ainda sejam devidos a fatores ambientais,a proporção de casos de origem genética tende a aumentar com a melhoria na saúde pública. Até o momento já foram clonados 16 genes que causam deficiência auditiva não sindrômica de herança autossômica recessiva (NSRD). O gene GJB2, que determina a produção da proteína conexina 26 (Cx26), foi o primeiro a ser associado a NSRD, e mutações nesse gene são a principal causa genética de surdez no ser humano. A conexina 26 está envolvida na formação de gap junctions, canais de comunicação intercelular necessários à produção de potenciais de ação e que estão presentes em células da cóclea.Mutações no gene GJB2 vêm sendo detectadas em várias populações; uma delas, a 35delG, é particularmente freqüente entre Caucasóides do sul da Europa. A frequência de heterozigotos para essa mutação foi recentemente estimada em recém-nascidos de uma região próxima a Campinas como sendo de 0,97%. Neste trabalho foi realizada a análise do gene GJB2 em 39 famílias com surdez não sindrômica,tanto familial quanto esporádica,a fim de determinara freqüência e o tipo de mutações nesses pacientes. Em 36 casos-índice (grupo A) foi realizada uma avaliação clínica prévia para excluir ao máximo a possibilidade de uma origem ambiental. Dados clínicos e moleculares de outros três pacientes surdos com mutação na Cx26 previamente diagnosticados (grupo B) também foram considerados. Mutações no gene GJB2 foram identificadas em 8 das 36 famílias do grupo A (22%), incluindo metade dos 10 pacientes com surdez familial e 3 dos 26 casos isolados (11,5%). A mutação 35 delG foi encontrada em 84,2% (16/19) dos alelos mutados. Três outras mutações foram observadas: V95M, V37I e delE120. Seis pacientes eramhomozigotos para a mutação 35delG, 2 heterozigotos compostos e 3 heterozigotos, ou seja, foi encontrado somente um alelo mutado. O polimorfismo V27I foi encontrado em dois casos esporádicos.Esses resultados indicam que em nossa região, assim como vem sendo observado em outras populações, mutações na conexina 26 sejam a principal causa de surdez de origem genética. Assim sendo, devem ser pesquisadas tanto em casos hereditários quanto, principalmente, em casos esporádicos de origem indefinida, de modo a possibilitar o aconselhamento genético e o diagnóstico precoce de novos casos que venham a surgir nessas famílias / Abstract: WHO data show that 10% of world population carry some hearing loss and this prevalence tends to increase with age. In Brazil, there is no official studies about deafness prevalence. Hearing impairment is a frequent disorder that affects one in 1000 children. In developed countries, about 60% of the cases of isolated deafness have a genetic origin. Although the majority of cases of hearing loss in Brazil are due to environmental factors, the proportion of genetic causes tend to increase as a result of improvement in health care. Recent progress in research on deafness genes led to localization of at least 20 genes that cause nonsyndromic autosomal recessive deafness (NSRD). The GJB2 gene, which encodes the connexin 26 molecule, was the first to be associated with NSRD and is considered the main cause of genetic deafness in manoThe connexin 26 is a protein componentof the gapjunctions, which connect adjacent cells allowing small molecules to pass from one to the next. They are found on the epithelial supporting cells surrounding the sensory hair cells of the cochlea and on the fibrocytes lining the cochlear dueto Mutations in the GJB2 gene have been identified in many populations; one of them, 35delG, is particularly common among Caucasoids from southem Europe. In a city near Campinas,the carrier rate of 35delG was estimated in neonates as 0.97%. In order to determine the frequency and type of connexin 26 mutations among patients with nonsyndromic hearing loss, the analysis of mutations in the GJB2 gene were performed in 39 Brazilian families with either familial or sporadic deafness.A previous clinical evaluation was carried out on 36 index cases (group A) in order to ruIe out as much as possible the influence of environrnental factors on the etiology of deafness in these patients. Clinical and molecular data from three other deaf patients with connexin26 mutation (group B) were also taken in account. Mutations in the GJB2gene were found in 8 of the 36 families from group A (22%), including half of the 10 patients with familial deafness and 3 of the 26 isolated cases (11.5%). The 35delG mutation accounted for 84,2% (16/19) of the GJB2 mutated alleles. Three other mutations were observed: V95M, V37I and deIE120. Six patients were homozygous for 35delG mutation, two were compound heterozygous, and three were apparently heterozygous for 35delG. The polymorphismV27I was found in two sporadic cases. These results indicate that also in Brazil connexin 26 mutations are a major source of genetic deafness. As a consequence, a systematic search for these mutations is necessary in individuals presenting nonsyndromic deafness, either hereditary or sporadic of unknown origin in order to allow genetic counseling and also early diagnosisof other affected childrenin these families / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

A produção de culturas de feijão, soja, algodão, batata, girassol, vêm sofrendo perda de até 70% ocasionada pelo fungo de solo denominado mofo-branco, da espécie Sclerotinia sclerotiorum, filamentoso e necrotrófico. Esse fungo na forma de escleródio apresenta-se como grânulo que se confunde com os grãos nas etapas de colheita e limpeza, podendo chegar ao consumidor final. Entretanto, ainda não são conhecidas as consequências do consumo desse fungo na forma de escleródios nos alimentos que são base da alimentação humana. Assim, a presente proposta visa o maior conhecimento da composição e aspectos toxicológicos desse fungo tão comum nos principais produtos agrícolas disponibilizados para o consumidor. Para identificação de solventes adequados à extração de compostos dos escleródios foram realizados testes cromatográficos que apontaram a escolha do acetato de etila para produção do extrato. Foram preparadas rações fúngicas contendo 6, 60 e 600 mg do extrato em 100g de ração, resultando num consumo de 25, 240 e 2600 mg de extrato por kg de peso corpóreo. No estudo in vivo, o consumo de ração fúngica não causou alterações nutricionais nos animais. O teste de cometa apresentou aumento no comprimento da cauda de cometas em 106,34; 174,77 e 131,90% para sangue; aumento de Tail Moment de 166%, 380% e 271% (linfócitos) e 660%, 639% e 429% (fígado) e aumento de 129%, 212% e 160% (linfócitos) e 284%, 296% e 260% (fígado) no % de DNA na cauda. Os testes de micronúcleos de medula óssea e cólon apresentaram aumento da frequência de micronúcleos em 186,95%; 147,82%; 239,13% para eritrócitos e 202,63; 173,68 e 223,68% em células do cólon. Este resultado também foi significativo para o teste de apoptose demonstrando aumento de 568,88, 457,77e 513,33% no numero de células apoptóticas. Estes resultados demonstram a ação mutagênica de escleródios do fungo Sclerotinia sclerotiorum, que podem ser desde a quebra do DNA, quanto a alterações nas fibras do fuso ou rearranjos cromossômicos associados ou não a fragmentação do DNA. Esses aspectos tornam os escleródios compostos que devem ser alvo de mais estudo sobre esses efeitos lesivos, uma vez que os mesmos podem chegar ao consumo alimentar de homens e animais por meio de alimentos e rações contaminadas, respectivamente. / The crop of soybean, beans, canola, cotton, peas, lettuce, potatoes, currently represent one of the most important agricultural activities in Brazil. These crops have been threatened, leading to losses of up to 70% of its total volume by the presence of soil fungus called popularly white mold or rot soil, the species Sclerotinia sclerotiorum. This fungal species is characteristic to be filamentous and cause necrosis in their hosts, and often find themselves in the granules form (sclerotia) which mix themselves with the seeds in the stages of harvesting and cleaning, thereby they can reach the final consumer in batches containing up to half of its grains contaminated by dormant mycelium of the fungus For identification of suitable solvents for extraction of compounds of sclerotia chromatographic tests were performed which indicated the choice of ethyl acetate to extract production. fungal diets containing 6, 60, and 600 mg of extract in 100 g of feed were prepared, resulting in a consumption of 25, 240 and 2600 mg of extract per kg body weight. In the in vivo study, the consumption of fungal feed caused no nutritional changes in animals. The comet test showed an increase in the length of comet tail 106,34; 174.77 and 131.90%. in blood; increase of Tail Moment 166%, 380% and 271% (lymphocytes) and 660%, 639% e 429% (liver) and increase of 129%, 212% and 160% (lymphocytes) and 284%, 296% and 260% (liver) in % of DNA in tail. Micronucleus tests in bone marrow and colon showed increased micronuclei frequency 186.95%; 147.82%; 239.13% to 202.63 and erythrocytes; 173.68 and 223.68% in colon cells. This result was also significant for apoptosis test showing increased 568.88, 513.33 457,77e% in the number of apoptotic cells. These results demonstrate the mutagenic action of sclerotia of Sclerotinia sclerotiorum, which may be from the DNA breakage, as changes in spindle fiber or chromosomal rearrangements associated or not with DNA fragmentation. These aspects render the compounds sclerotia that should be subject to further study on these damaging effects, as they can reach the food intake of humans and animals through contaminated food and feed, respectively.and the other half mixed with the sclerotia. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Departamento de Biologia Celular, 2012. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-03-09T18:12:04Z No. of bitstreams: 1 2012_JanaínadoNascimentoLimaMatiasdePaula.pdf: 7173674 bytes, checksum: 7c990900f97d3592a318d5a455f033bc (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-04-11T19:32:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_JanaínadoNascimentoLimaMatiasdePaula.pdf: 7173674 bytes, checksum: 7c990900f97d3592a318d5a455f033bc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-11T19:32:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_JanaínadoNascimentoLimaMatiasdePaula.pdf: 7173674 bytes, checksum: 7c990900f97d3592a318d5a455f033bc (MD5) / A estratégia de humanização de anticorpos tem sido eficiente para melhorar o uso clínico desses biofármacos. Porém, a manipulação da cadeia polipeptídica, eventualmente, leva a uma perda de afinidade, reduzindo sua eficácia. Este estudo é uma continuação dos testes necessários para a melhoria da afinidade de ligação, de um anticorpo humanizado pelo Grupo de Imunologia Molecular da UnB. Em trabalhos anteriores descritos pelo grupo, um anticorpo anti-CD3 humanizado para fins clínicos, foi comparado com o anticorpo original murino quanto a sua capacidade de ligação ao antígeno humano CD3. Os resultados sugeriram que parte da afinidade foi perdida durante o processo de humanização. Então, este estudo visa compreender a interação química e estrutural entre o anti-CD3 humanizado e seu antígeno. Para isto, foram realizadas mutagêneses sítio-dirigidas por PCR overlap, no anticorpo humanizado, com base na estrutura cristalina do complexo OKT3-CD3, que identificou a participação de ligação dos resíduos de aminoácidos chave envolvidos na ligação. Os anti-CD3 com as mutações de interesse foram produzidos em células de ovário de hamster chinês (CHO) na forma de fragmento de anticorpo FvFc (scFv ligado diretamente aos domínios CH2-CH3 de IgG 1 humana). Purificamos estas proteínas e, em paralelo, produzimos um CD3 de cadeia única recombinante usando um sistema de expressão de antigenos solúveis em bactéria. Os anticorpos mutados e o antígeno, serão usados em testes de afinidade, competição, bloqueio e proliferação usando as técnicas de ELISA e FACS. O mapeamento detalhado dos resíduos chave envolvidos intimamente com a ligação ao antígeno, permitirá o desenvolvimento mais eficaz de anticorpos anti-CD3 para uso clínico no futuro. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The strategy of antibody humanization has been effective in improving the clinical use of biopharmaceuticals. Thus, the manipulation of the polypeptide chain, eventually leads to an affinity loss, reducing its effectiveness. This study is a continuation of the tests needed to improve the binding affinity of an antibody humanized by the Group of Molecular Immunology, UnB. In previous work described by the group, a humanized anti-CD3 antibody for clinical purposes, was compared with the original murine antibody and its ability to bind to the human CD3 antigen. The results suggested that part of the affinity was lost during the process of humanization. So, this study aims to understand the chemical and structural interaction between the anti-CD3 humanized antibody and its antigen. With this pourpose, we performed site-directed mutagenesis in the humanized antibody, based on the crystal structure of the complex CD3-OKT3 (a murine monoclonal antibody), which identified the participation of key binding residues involved in binding. Some amino acids residues of the humanized anti-CD3, were selected and modified by PCR overlap. Mutants were produced Chinese Hamster Ovary (CHO) cells in the form of antibody fragment FvFc (a scFv linked to human IgG1 CH2-CH3 domains). We purified this protein and in parallel, produced a scFv CD3  recombinant expression system that permits the purification of soluble bacterial antigens. The recombinant molecules will be used in assays for affinity, competition, blocking and proliferation using the ELISA and FACS. The detailed mapping of key residues intimately involved with binding to the antigen, will allow the development of more effective anti-CD3 antibody for clinical use in the future.

Submitted by Haroudo Xavier Filho (haroudo.xavierfo@ufpe.br) on 2016-02-26T12:26:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE - Adiles Paulo de Lima.pdf: 1609682 bytes, checksum: 889f967461ad04b505907e00ea91cfab (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T12:26:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE - Adiles Paulo de Lima.pdf: 1609682 bytes, checksum: 889f967461ad04b505907e00ea91cfab (MD5) Previous issue date: 2015-03-12 / REUNI / CAPES / PT-31 [3-(2-cloro-6-fluorobenzil)-imidazolidina-2,4-diona] é um composto descrito com atividade analgésica e o elixir SANATIVO® (SAN e extrato de SAN, E. SAN) é um fitoterápico comum no Nordeste do Brasil. Esses produtos terapêuticos necessitam de testes adicionais antes de ter aplicabilidade humana, inclusive ensaios genéticos. Assim, dois testes de danos genéticos foram escolhidos para o presente trabalho: o Teste de Mutação e Recombinação Somática (SMART) em Drosophila melanogaster que detecta tipos diferentes de mutações e recombinação, e mutantes de recombinação e reversão de Saccharomyces cerevisiae, ambos apresentam baixo custo, confiabilidade e rapidez, visando a análise genética para o uso mais seguro dos compostos. O fármaco PT-31 foi avaliado através da técnica SMART e pelo teste com os mutantes de S. cerevisiae; com o elixir SANATIVO® foi formada uma curva de sobrevivência larval utilizando os dois tipos de cruzamentos (ST e HB) do SMART, em seguida este ensaio foi empregado; e o extrato de SAN foi analisado pelo SMART e através das linhagens de S. cerevisiae. Notou-se a possibilidade de SAN ter reduzido a toxicidade do álcool por meio da sobrevivência larval. Enquanto que o SMART de SAN e de E. SAN revelou efeito mutagênico na maioria das concentrações testadas, com ativação metabólica e efeito recombinogênico ausentes, sem alteração identificável nos testes em S. cerevisiae. O PT-31 mostrou efeito mutagênico e atividade recombinogênica no teste SMART, aumentando o efeito mutagênico pela atividade metabólica do sistema P450, e nenhuma alteração fenotípica no teste em S. cerevisiae. Esses dados contribuem para a ampliação das informações sobre os compostos terapêuticos na literatura, para que futuros experimentos possam elucidar melhor a ação em organismos vivos. / PT-31 [3-(2-chloro-6-fluorobenzyl)-imidazolidine-2,4-dione] is a compound described with analgesic activity and SANATIVO® elixir (SAN e SAN extract, E. SAN) is a common phytotherapic in the Northeast of Brazil. Those therapeutic products require additional tests before human applicability, including genetic assays. The Mutation and recombination Somatic Test (SMART) in Drosophila melanogaster provides different sorts of mutations and recombination, and recombination and reversion mutants of Saccharomyces cerevisiae, both present low cost, reliability and speed, in order the genetic analysis for a safer use of the compounds. The PT-31 drug was evaluated by SMART technique and by the test with S. cerevisiae mutants; with the SANATIVO® elixir was constructed a larval survival curve using two types of crosses (ST and HB) of SMART, then this assay was used; and the SAN extract was assessed by SMART and by S. cerevisiae strains. It was noticed the possibility of SAN have reduced toxicity of the alcohol by larval survival. While the SMART of SAN and of E. SAN revealed mutagenic effect in most of the tested concentrations, with metabolic activation and absent recombinogenic effect, without identifiable modification in the tests in S. cerevisiae. The PT-31 showed mutagenic effect and recombinagenic activity in the SMART test, increasing of mutagenic effect by the metabolic activity of P450 system, and none phenotypic change in the test in S. cerevisiae. These data contribute to the expansion of information on the therapeutic compounds in the literature, so that future experiments will be able to elucidate the action in living organisms.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1562_1.pdf: 1103626 bytes, checksum: 29e0e4b87eca2e6d722ce5c11983e139 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Dentre os feijões cultivados, o feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.] se destaca pelo alto conteúdo protéico e pela capacidade de crescer em condições adversas. Sendo assim, esta espécie se tornou uma das culturas de subsistência mais importantes para a população do agreste nordestino. No entanto, a salinização dos solos, devido à irrigação inadequada, tem provocado além de crescentes problemas ambientais, a redução da produtividade de várias espécies vegetais, inclusive a do feijão-caupi. Sendo assim, o uso de técnicas biotecnológicas, como a mutagênese in vitro, mostra-se como alternativa para o desenvolvimento de novas cultivares. Com a finalidade de produzir variedades de feijão-caupi tolerantes à salinidade, a indução de mutação in vitro com uso de raios gama foi aplicada no presente trabalho. Foi escolhida a cultivar BR14-Mulato por ter sido aquela que em estudos primários mostraram satisfatória capacidade regenerativa in vitro tratando-se de importante cultivar para a agricultura do Nordeste brasileiro. O segundo passo foi estabelecer um protocolo apropriado para pressão de seleção in vitro das sementes irradiadas através da determinação da concentração de NaCl que inibisse a regeneração, fazendo-se uso das concentrações de 172 mM (1% - Tratamento 1), 258 mM (1,5% - Tratamento 2), 344 mM (2% - Tratamento 3) e 0 mM (Tratamento Controle), chegando-se, então, à conclusão de que a concentração de 172 mM seria a mais apropriada. Por fim, sementes foram irradiadas com três doses de radiação gama (100 Gy, 150 Gy e 200 Gy), além do material controle (0 Gy), e seus tecidos foram isolados e inoculados in vitro, simultaneamente, em meios de cultura com e sem sal. Como resultado, foi obtido um possível variante somaclonal advindo de material não irradiado (0 Gy) e inoculado em meio não seletivo, sendo transferido, posteriormente, para meio contendo NaCl, sobrevivendo a este. Outro resultado de grande importância foi a obtenção de um provável mutante sólido provocado pela dose de 150 Gy que, inicialmente, formou calo embriogênico na ausência de NaCl, sendo posto sob pressão de seleção na etapa conseguinte e, após verificada a possível mutação, retirado da condição de salinidade e preparado, através da indução de enraizamento, para futuras análises em campo e molecular. Os resultados obtidos forneceram subsídio com o desenvolvimento de protocolos bem estabelecidos para estudos posteriores de regeneração e indução de mutação in vitro, com os prováveis mutantes (induzidos ou espontâneos) oferecendo possibilidade de geração de variedade tolerante à salinidade

Centro Universitário de Patos de Minas / Caryocar brasiliense is a plant popularly known as pequi, native from the Brazilian cerrado , and is widely used in Brazilian cookery. Its fruit presents a high level - carotenes (which is a pro-vitamin A), retinol and vitamin C. These are efficient antioxidizing components, and they scavenging free radicals and prevent mutagenic action of physical and chemical agents. However, in high concentrations it may have mutagenic and recombinogenic effects. So to valuate the genotoxic effects of the pequi we prepared aqueous extracts of pequi (AEP) in concentrations of 1%, 5% and 10%. For this we used the wing spot test in Drosophila melanogaster (Somatic Mutation And Recombination Test SMART). The SMART was fulfilled through the following crossings: 1) standard cross (ST); flare3 virgin females (flr3/TM3, Bds) were crossed with mwh/mwh males; 2) HB High Bioactivation Cross which ORR (ORR, flr3/TM3, Bds) virgin females were crossed with mwh/mwh males. From these crossings, we obtained two kinds of descendents: marked heterozygote (MH - mwh +/+ flr3); balanced heterozygote (BH - mwh +/+TM3, Bds). 72-hour larvae from both crossings were treated with different concentrations of AEP (1%, 5% e 10%). Distilled water and doxorubicin (DXR) (0,125mg/mL) were respectively used as negative and positive controls. The present study aimed the valuating the genotoxic effects of AEP and its antigenotoxic effects against the genotoxic action of DXR (0,125mg/mL). The results obtained demonstrated that AEP induced a statistically significant increase in the frequency of mutant spots, when compared to negative control in all concentrations of HB crossi and only in the concentration of 10 % of ST crossi. In the analysis of HB descendents, we observed a recombinogenic effect of AEP, only when metabolized by P-450. When associated to DXR, there may be an overpotentiality of the genotoxic effect of this chemotherapy. This way, we may conclude that, in these experimental conditions and in the tested concentrations, the aqueous extract of pequi presented a mutagenic and recombinogenic potential. / A Caryocar brasiliense é uma planta, conhecida popularmente como pequi, nativa do cerrado brasileiro, amplamente utilizada na culinária brasileira. O fruto do pequizeiro apresenta alto teor de carotenos (que é uma pro-vitamina A) e retinol e vitamina C. Esses compostos são eficientes antioxidantes, seqüestrando radicais livres e prevenindo a ação mutagênica de agentes físicos e químicos. Contudo, em altas concentrações, podem ter efeitos recombinogênicos e mutagênicos. Para avaliar os efeitos genotóxicos do pequi foram preparados extratos aquosos do pequi (EAP) nas concentrações de 1%; 5% e 10%. Para tanto, utilizou-se o teste da mancha da asa em Drosophila melanogaster (Somatic Mutation And Recombination Test SMART). O SMART foi realizado por meio dos seguintes cruzamentos: 1) cruzamento Padrão (ST Standard Cross): fêmeas virgens flare3 (flr3/TM3, Bds) foram cruzadas com machos mwh/mwh; 2) cruzamento de alta bioativação (HB High Bioactivation Cross ), no qual fêmeas virgens ORR (ORR, flr3/TM3, Bds) foram cruzadas com machos mwh/mwh. Desses cruzamento foram obtidos dois tipos de descendentes: heterozigoto marcado (MH - mwh +/+ flr3); heterozigoto balanceado (BH - mwh +/+ TM3, Bds). Larvas de 72 horas, de ambos cruzamentos, foram tratadas com diferentes concentrações de EAP (1%, 5% e 10%). Como controles negativo e positivo foram utilizados, respectivamente, água destilada e doxorrubicina (DXR) (0,125mg/mL). O trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos genotóxicos do EAP e seus efeitos antigenotóxicos contra a ação genotóxica da DXR (0,125mg/mL). Os resultados obtidos demonstraram que o EAP induziu um aumento, estatisticamente significativo, na freqüência de manchas mutantes quando comparado com o controle negativo em todas as concentrações do cruzamento HB e somente na concentração de 10% do cruzamento ST. Na análise dos descentes BH observou-se efeito recombinogênico, do EAP, somente quanto metabolizado pelas P-450. Quando associado a DXR ocorre uma potencialização do efeito genotóxico desse quimioterápico. Portanto, pode-se concluir que, nestas condições experimentais e nas concentrações testadas, o extrato aquoso de pequi apresentou um potencial mutagênico e recombinogênico. / Mestre em Genética e Bioquímica

Submitted by TAMIRIS KEMPNER (tamireskempner@yahoo.com.br) on 2018-08-08T19:23:03Z No. of bitstreams: 1 Tese - Tamiris Kempner.pdf: 3257644 bytes, checksum: b017074bfe0af2c7904609b1f22127e9 (MD5) / Approved for entry into archive by Neli Silvia Pereira null (nelisps@fcav.unesp.br) on 2018-08-08T19:33:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 kempner_t_dr_jabo.pdf: 3257644 bytes, checksum: b017074bfe0af2c7904609b1f22127e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-08T19:33:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 kempner_t_dr_jabo.pdf: 3257644 bytes, checksum: b017074bfe0af2c7904609b1f22127e9 (MD5) Previous issue date: 2018-03-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Diante da importância do cancro cítrico para a citricultura mundial, a bactéria Xanthomonas citri subsp. citri, o agente causal da doença, tem sido amplamente estudada. Pesquisadores brasileiros realizaram o sequenciamento completo do genoma da X. citri subsp. citri isolado 306 (Xac306), com o intuito de elucidar os genes e mecanismos envolvidos na patogenicidade e/ou virulência da bactéria. As ORFs XAC2361 e XAC3898 possuem tamanhos e locais diferentes no genoma da Xac306, mas têm em comum o domínio Peptidase_M23, cujo processo biológico predito é de hidrolase de parede celular, mas a real função destas proteínas em Xac ainda é desconhecida. Este trabalho teve como objetivo avaliar, por meio da mutação sítio-dirigida, se as ORFs XAC2361 e XAC3898 estão relacionadas com a virulência e/ou patogenicidade de X. citri subsp. citri 306 e com o desenvolvimento do cancro cítrico. Para isso, foram realizados testes in vitro e in planta dos mutantes obtidos, visando observar alterações fenotípicas. Devido a presença de peptídeo sinal, a ORF XAC2361 foi fundida à proteína fluorescente mCherry (XAC2361-mCherry) para expressão in vivo e avaliação por microscopia de fluorescência. As análises fenotípicas demonstraram que o mutante ΔXAC2361 não apresentou alterações nos sintomas quando avaliado em limoeiro cravo (Citrus limonia Osbeck), porém apresentou menor capacidade de crescimento in vitro, menor motilidade swimming e swarming e menor capacidade de sobrevivência em SDS. Por outro lado, o mutante ΔXAC3898 apresentou uma significativa redução na virulência, menor capacidade de crescimento in planta, maior capacidade de crescimento in vitro, menor capacidade de agregação, maior produção de goma e biofilme e a avaliação por microscopia eletrônica de varredura mostrou que houve uma redução no comprimento das células da bactéria. A análise por microscopia de florescência da proteína de fusão XAC2361-mCherry mostrou, predominantemente, uma fluorescência dispersa, o que é um indício de que a mesma pode estar sendo direcionada para o citoplasma. Apesar disso, não foi possível confirmar a expressão da proteína de fusão XAC2361-mCherry por meio de Western-blot. Diante dos resultados obtidos, sugere-se que o domínio Peptidase_M23 está de alguma forma envolvido com a virulência e/ou patogenicidade de Xac, atuando na formação da parede celular. / In view of the importance of citrus canker in citrus culture worlwide, the bacterium Xanthomonas citri subsp. citri, the causal agent of this disease, has been extensively studied. Brazilian researchers performed the complete sequencing of the genome of X. citri subsp. citri isolate 306 (Xac306), in order to elucidate the genes and mechanisms involved in the pathogenicity and/or virulence of Xac. The ORFs XAC2361 and XAC3898 have different sizes and location in the genome, but have in common the M23 Peptidase domain, whose biological process is predicted to act as cell wall hydrolase, but the actual function of these proteins in Xac is still unknown. This work aimed to evaluate, through site-directed mutagenesis, whether XAC2361 and XAC3898 ORFs are related to the virulence and / or pathogenicity of Xac306 and the development of citrus canker. In order to observe phenotypic changes, in vitro and in planta tests of the mutants were carried out. Due to the presence of signal peptide, the ORF XAC2361 was fused to the mCherry fluorescent protein (XAC2361-mCherry) for in vivo expression and fluorescence microscopy evaluation. Phenotypic analyzes demonstrated that the ΔXAC2361 mutant showed no change in symptoms when evaluated in Mexican lime (Citrus limonia Osbeck), but presented lower in vitro growth capacity, lower swimming and swarming motility, and lower survival capacity in SDS. On the other hand, the ΔXAC3898 mutant showed a significant reduction in virulence, lower in plant growth capacity, higher in vitro growth capacity, lower aggregation capacity, higher gum production and biofilm, and scanning electron microscopy evaluation showed that there was a reduction in cell length. Microscopy analysis of the XAC2361-mCherry fusion protein showed predominantly dispersed fluorescence, which is an indication that it may be being directed to the cytoplasm. Despite this, the expression of XAC2361-mCherry fusion protein could not be confirmed by Western blotting. In view of the obtained results, it is suggested that the Peptidase_M23 domain is in some way involved with the virulence and/or pathogenicity of Xac, acting in the formation of the cellular wall.