Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In the present study, the sera levels of soluble CD40 ligand (sCD40L) and matrix
metalloproteinase-9 (MMP-9) were quantified by Luminex assay in Visceral leishmaniasis
patients before and during treatment follow-up and after regular antimony treatment and also
in individuals exposed to infection, living in endemic areas. Different from the other molecules
present in sera from classic VL patients, sCD40L and MMP-9 are fairly increased, and increase
over time during the follow-up of VL patients undergoing antimony treatment. sCD40L and
MMP-9 sera levels were also high in individuals living in endemic settings at high risk of
infection (endemic controls). On the other hand, sCD40L and MMP-9 were not observed in
sera from non-endemic controls, which are not exposed of infection. Additionally, negative
correlations were found between spleen sizes and MMP-9 before treatment and sCD40L at day
15 of treatment. Negative correlations were also found between parasite load with both sCD40L
and MMP-9. These findings indicate that both molecules can be used in monitoring therapeutic
efficacy in VL. Furthermore, these data suggest a protective effect of these molecules, since
the individuals exposed to infection without the symptoms of disease have high sera levels of
sCD40L and MMP-9. These data were published in BMC Infectious diseases journal [1]. To
confirm the protective effect of sCD40L present in sera of VL patients and determine if this
molecule had biological activity, the ability of sera from patients containing high levels of this
molecule sCD40L to control infection in vitro in Leishmania infantum infected macrophages,
and the ability to induce cytokines production. Thereby, macrophages from of healthy donor
were infected with Leishmnia infantum, and later incubated in presence of sera from individuals
exposed to infection in presence of anti-CD40L. The infection was evaluated by counting of
the number of infected macrophages/100 and the number of intracellular amastigotes/100
macrophages. The data showed that serum sCD40L decrease the number of infected
macrophages and the number of intracellular amastigotes. The blockage of sCD40L activity
with specific antibody, increase the infection. Moreover, the analysis of cytokines in
supernatant of these macrophage cultures by Luminex assay demonstrated that sCD40L induces
the IL-12, IL-23, IL-27, IL-15 e IL-1 production. The levels of these cytokines is inversely
correlated with infection rate and the number of intracellular parasites from infected
macrophages. A second manuscript with these data were published in PLOS One [2] . These
results demonstrated that serum sCD40L from individuals exposed to VL improve the
microbicide effect and the inflammatory cytokine production, suggesting its potential use in VL
immunotherapy. Nevertheless, there is still a long way to be approached in future experimental
and clinical studies. / No presente estudo, os níveis séricos dos marcadores inflamatórios CD40 ligante solúvel
(sCD40L) e da metaloproteinase de matrix-9 (MMP-9) foram quantificados por Luminex nos
pacientes com leishmaniose visceral antes, durante e após o tratamento com antimonial, e em
indivíduos controles expostos à infecção, residindo em áreas endêmicas. Ao contrário das outras
moléculas inflamatórias presentes nos soros de pacientes com LV, as moléculas sCD40L e
MMP-9 apresentaram elevação moderada, havendo um aumento significativo de ambas no
decorrer do tratamento com antimonial. Níveis séricos elevados de sCD40L e MMP-9 também
foram encontrados nos indivíduos controles sem doença, provenientes de áreas endêmicas e
expostos a infecção. Entretanto, o sCD40L e a MMP-9 não foram detectados nos soros de
indivíduos de áreas não endêmicas, os quais não estão expostos a infecção. Adicionalmente,
correlações negativas entre o tamanho do baço com a MMP-9 antes do tratamento e com o
sCD40L 15 dias após o início do tratamento foram observadas, bem como correlações negativas
entre ambas as moléculas com a carga parasitaria dos pacientes. Estes resultados indicam que
estas moléculas podem ser utilizadas no monitoramento da eficácia terapêutica na leishmaniose
visceral. Além disso, estes dados nos sugerem um efeito protetor dessas moléculas contra a
doença, desde que os indivíduos expostos e sem a doença apresentaram concentrações elevadas
dessas moléculas. Estes dados foram publicados no BMC Infectious diseases [1]. Para
confirmar o efeito protetor do sCD40L e investigar se a molécula presente nos soros dos
pacientes com LV tinha atividade biológica, foi avaliado se o sCD40L presente no soro dos
indivíduos infectados teria ação na resposta leishmanicida e na produção de citocinas por
macrófagos infectados por Leishmania infantum. Dessa forma, macrófagos de doadores
normais foram infectados com L. infantum e posteriormente incubados com soro de indivíduos
expostos a infecção na presença de anti-CD40L. A avaliação da infecção através da contagem
de células infectadas e do número de parasitas intracelulares demonstrou que a presença do
sCD40L sérico diminui o número de macrófagos infectados e o número de amastigotas
intracelulares. O bloqueio da atividade do sCD40L com anticorpo específico reverteu este
efeito, aumentando a infecção. Além disso, a análise de citocinas no sobrenadante das culturas
de macrófagos por Luminex mostrou que a adição de sCD40L induziu a produção de IL-12, IL-
23, IL-27, IL-15 e IL-1. As concentrações destas citocinas correlacionaram-se inversamente
com as taxas de infecção e com o número de parasitas intracelulares nos macrófagos infectados.
Um segundo artigo com estes resultados foi publicado na PLOS One [2]. Estes resultados
demonstram que o sCD40L sérico dos indivíduos expostos à LV melhora a capacidade
microbicida e a produção de citocinas inflamatórias, sugerindo seu potencial uso na
imunoterapia na LV humana, embora este seja um longo caminho a ser abordado em estudos
futuros experimentais e clínicos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:ri.ufs.br:riufs/3621 |
| Date | 25 February 2016 |
| Creators | Oliveira, Fabrícia Alvisi de |
| Contributors | Jesus, Amélia Maria Ribeiro de, Moura, Tatiana Rodrigues de |
| Publisher | Universidade Federal de Sergipe, Pós-Graduação em Ciências da Saúde, UFS, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFS, instname:Universidade Federal de Sergipe, instacron:UFS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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