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Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Leishmaniose Visceral causada pela Leishmania infantum é uma doença zoonótica no Novo Mundo em que o cão é o principal hospedeiro doméstico. O conhecimento prévio dos mecanismos imunopatogênicos associados à infecção por L. infantum é necessário para o desenvolvimento de vacinas e outras estratégias de controle. O objetivo geral desta tese foi correlacionar a expressão clínica, a carga parasitária, a resposta imunológica do hospedeiro e a diversidade genética dos parasitos em cães naturalmente infectados por L. infantum. O presente estudo é uma avaliação transversal de noventa e dois cães naturalmente infectados por L. infantum provenientes do estado do Mato Grosso. A infecção dos animais incluídos no estudo foi confirmada por sorologia, cultura e /ou PCR. O diagnóstico etiológico foi realizado por PCR-RFLP para o gene hsp70 e por eletroforese de enzimas nos parasitos isolados. Foram ainda analisados os sinais clínicos, a resposta imune pela expressão gênica de citocinas, a carga parasitária por qPCR, as alterações histológicas no baço e fígado e a as populações e genótipos de L. infantum circulantes por meio da análise do polimorfismo de microssatélites. Foram definidos grupos de acordo com a carga parasitária esplênica e hepática. Os animais com alta carga parasitária apresentaram altos títulos de anticorpos específicos anti-Leishmania e mais sinais clínicos da doença
A carga parasitária no baço foi maior do que no fígado e houve correlação com o rompimento da arquitetura esplênica, caracterizado principalmente pela desorganização da polpa branca. No fígado, a carga parasitária foi correlacionada positivamente à ocorrência de granulomas, à degeneração dos hepatócitos bem como à intensidade do infiltrado inflamatório. Mostramos que a maior carga parasitária promoveu menor expressão gênica de IL-12, IFN\03B3, TNF, IL-6, TGF\03B2 e IL-10 no baço e maior expressão de CCL2, CXCL8 e MAP4K4 no fígado. A análise genética dos parasitos é indicativa de que há infecção policlonal e tropismo tissular de alguns clones, mais evidente na análise das amostras pareadas (tecidos e isolados do tecido). Foi observada baixa variabilidade genética em que a maioria (96%, 49/51) das amostras foi caracterizada como pertencente a POP2, dentre as populações circulantes no Brasil previamente descritas pelo nosso grupo. Não houve associação entre a variabilidade genética dos parasitos e os parâmetros clínicos, parasitológicos ou imunológicos. Apesar disso, os dados gerados pelos ensaios in vitro com as cepas de diferentes populações sugerem que há sim diferenças na infectividade entre cepas com genótipos de microssatélites distintos. Foi reunida uma série de dados que, em conjunto, mostram que na região estudada a Leishmanise Canina é causada por população geneticamente homogênea não tendo sido observada nenhuma correlação entre genótipos específicos e o fenótipo da infecção canina / Visceral leishmaniasis is a zoonotic disease in the New World and the domestic dog
is the main host of
Leishmania infantum
. Prior knowledge of the immunopathogenic
mechanisms associated with infection by
L. infantum
is required for the development
of
vaccines and other control strategies. The overall aim of this thesis was to
compare the clinical expression, parasite load, the host immune response and
genetic diversity of parasites in dogs naturally infected with
L. infantum
. This study is
a cross
-
sect
ional assessment
of
ninety
-
two dogs naturally infected by
L. infantum
.
Infection was confirmed by serology, parasite culture and / or PCR. The etiology was
assessed by
hsp70
PCR
-
RFLP
and MLEE
.
We
further analyzed
clinical signs
,
immune response by cytokine
gene expression, molecular parasite
load
by qPCR,
histological changes in sple
nic
and
hepatic compartments
and
also
L. infantum
populations and genotypes through microsatellite
analysis.
Groups according to the
spleen and liver parasite load were defined.
Animals with high parasite load had high
titers of anti
-
Leishmania antibodies and more clinical signs. The paras
ite
load in the
spleen was higher than in liver and correlated with disruption of splenic architecture,
mainly characterized by white pulp diso
rganization.
Liver parasite
load
was
correlated with the occurrence of granulomas, degeneration and intensity of the
inflammatory infiltrate.
We show that the higher parasite load promoted lower gene
expression o
f IL
-
12, IFNγ, TNF, IL
-
6, IL
-
10 and TGFβ in the spleen and increased
expression of CCL2, CXCL8 MAP4K4
in the
liver. Genetic analysis of parasites is
indicative
of
polyclonal infection and tissue tropism of some clones, more evident in
the analysis of paire
d samples (
strain
isolated and tissue).
We also found l
ow genetic
variability
,
in which the majority (96%, 49/51) of the samples was characterized as
belonging to POP2,
among tree populations
previously described by our group.
There was no association betw
een the genetic variability of the parasites and the
clinical, parasitological and immunological parameters. Nevertheless, the data
generated by
in vitro
assays with strains from different populations suggest that there
are
differences in infectivity betwe
en strains with distinct m
icrosatellite genotypes.
Taken together, these results show that in the region studied Canine
Leishmaniasis
is caused by genetically homogeneous population
without any
correlation between
specific genotypes
and the
phenotype
of
ca
nine infection
.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/13516 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Cavalcanti, Amanda dos Santos |
| Contributors | Pirmez, Claude, Romero, Gustavo, Figueiredo, Fabiano, Calabrese, Kátia, Ferreira, Gabriel Melim, Porrozzi, Renato, Moraes, Milton Ozório |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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