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Influência da via de transmissão do Trypanosoma cruzi na carga parasitária e produção de anticorpos específicos

Santana, Camilla Alves 06 August 2015 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2015. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-02-18T16:55:17Z No. of bitstreams: 1 2015_CamilaAlvesSantana.pdf: 1674794 bytes, checksum: 8759cdf852cfc0b2c3ae27292328abdf (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2016-02-28T11:11:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_CamilaAlvesSantana.pdf: 1674794 bytes, checksum: 8759cdf852cfc0b2c3ae27292328abdf (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-28T11:11:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_CamilaAlvesSantana.pdf: 1674794 bytes, checksum: 8759cdf852cfc0b2c3ae27292328abdf (MD5) / A doença de Chagas é uma das principais doenças parasitárias na América Latina, atingindo cerca de oito milhões de pessoas. As manifestações da doença afetam o coração, intestinos e sistema nervoso. Seu tratamento é considerado ineficiente, não existindo medicamentos ou vacinas capazes de prevenir o desenvolvimento da patologia. Dessa forma, a maneira mais efetiva de se combater a doença de Chagas é realizando seu diagnóstico precoce e atuando sobre suas diversas vias de transmissão. Este estudo teve como objetivo avaliar a relação entre via de transmissão do Trypanosoma cruzi, o estabelecimento da carga parasitária e produção de anticorpos específicos, parâmetros avaliados para se estabelecer o diagnóstico da infecção. Camundongos BALB/c foram infectados com 103 formas tripomastigotas de T. cruzi pelas vias intraperitoneal, oral e ocular. Infecções pelas vias sexual e congênita ocorreram de maneira natural. As avaliações foram realizadas durante a fase crônica da infecção. A qPCR revelou uma maior carga parasitária em camundongos infectados pela via intraperitoneal, o que também foi acompanhado por uma maior produção de anticorpos. As vias oral e ocular apresentaram mínima carga parasitária e não obtiveram títulos de anticorpos reagentes. O aumento da concentração de T. cruzi inoculada por essas duas vias promoveu um aumento da carga parasitária com consequente produção de anticorpos específicos. As vias sexual e congênita mostraram baixa, porém relevante, carga parasitária, o que as tornou reagentes nos testes sorológicos. Destaca-se que 54,6% dos camundongos infectados pela via congênita apresentaram diagnóstico molecular positivo com testes sorológicos negativos. O desafio desses animais com formas tripomastigotas de T. cruzi resultou em soroconversão em apenas 41,6% dos animais, sugerindo que os demais podem ter sido tolerizados aos antígenos parasitários. A demonstração de que a rota de aquisição do T. cruzi influencia na determinação da carga parasitária de camundongos na fase crônica da doença, bem como no perfil de produção de anticorpos, auxiliará na compreensão da epidemiologia da doença de Chagas em diferentes ecossistemas, onde predominam diferentes vias de transmissão. / Chagas disease is a major parasitic disease in Latin America, affecting about eight million people. The clinical manifestations affect the heart, intestines and nervous system. The treatment is considered ineffective, with no drugs or vaccines able to prevent disease development. The most effective way to fight Chagas disease is thus conducting early diagnosis and acting on its various routes of transmission. This study aimed to evaluate the relationship between T. cruzi transmission route, the establishment of parasite load and specific antibodies production, parameters evaluated to establish the diagnosis of the infection. BALB /c mice were infected with 103 T. cruzi trypomastigotes by intraperitoneal, oral and ocular routes. Sexual and congenital transmissions occurred naturally. Analyses were conducted during Chagas disease chronic phase. qPCR revealed a higher parasite load in mice infected by intraperitoneal route, which was also accompanied by an increased production of antibodies. Oral and ocular pathways had minimal parasite burden and did not obtain positive antibodies titers. A higher concentration of T. cruzi inoculums in these two pathways promoted an increase in parasite load and antibodies production. Sexual and congenital routes showed low but significant parasite load, which made them positive in serological tests. It is noteworthy that 54.6% of congenital infected mice tested positive in qPCR and negative in serological tests. The challenge of these animals with T. cruzi trypomastigotes resulted in serum conversion in only 41.6% animals, suggesting tolerization to parasite antigens. The demonstration T. cruzi acquisition route influences in parasite load of mice in the chronic phase of the disease and antibody production profile will assist in the understanding of Chagas disease epidemiology in different ecosystems.
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Avaliação da atividade leishmanicida do antimônio trivalente livre ou em formulação lipossomal convencional, associado ou não ao ácido ascórbico, em camundongos BALB/c infectados com Leishmania infantum.

Castro, Renata Alves de Oliveira e January 2013 (has links)
Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-08-20T16:55:32Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 1353741 bytes, checksum: d35a91a5ba75fa3d48e954528062cc3a (MD5) / Rejected by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br), reason: O PDF não é o da descrição. on 2014-08-25T13:06:19Z (GMT) / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-08-28T19:19:41Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 2387079 bytes, checksum: 408539ffed7be7b6d46f7b881d7c3cc6 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-08-29T16:38:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 2387079 bytes, checksum: 408539ffed7be7b6d46f7b881d7c3cc6 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-29T16:43:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 2387079 bytes, checksum: 408539ffed7be7b6d46f7b881d7c3cc6 (MD5) Previous issue date: 2013 / O presente estudo avaliou a utilização de lipossomas convencionais como veículos vetores do antimônio trivalente, na forma de tártaro emético, bem como sua associação ao ácido ascórbico, para o tratamento da leishmaniose visceral no modelo murino. Lipossomas constituídos por distearoilfosfatidilcolina/colesterol (5:4) foram obtidos pela metodologia de congelamento/descongelamento. A caracterização da formulação mostrou tamanho aproximado de 222,5 nm, índice de polidispersão de 0,214, eficiência de encapsulação de 15%, concentração final de 4 mg SbIII/mL e cinética de liberação bifásica avaliada in vitro. Lipossomas vazios, igualmente obtidos e hidratados com tampão fosfato serviram como controle. Camundongos BALB/c com idade entre 6 e 8 semanas foram inoculados com 1 x 107 promastigotas de Leishmania (Leishmania) infantum (cepa C43) por via endovenosa. Após seis semanas de infecção, os animais foram divididos em sete grupos (n=8) e tratados por via intraperitoneal, em dose única com: (1) tampão fosfato, (2) antimônio trivalente (SbIII) - 9 mgSb/Kg, (3) lipossomas vazios, (4) lipossomas de SbIII (9 mgSb/Kg), (5) ácido ascórbico (AA) - 300 mg/kg; (6) associação do AA (300 mg/kg) ao SbIII (9 mgSb/kg) e (7) associação de AA (300 mg/kg) aos lipossomas de SbIII (9 mgSb/kg). Dez dias após o tratamento, os animais foram eutanasiados e avaliou-se: a carga parasitária no fígado, baço e medula óssea pelo método de diluição limitante; o padrão de células do baço por citometria de fluxo; a função renal, hepática e cardíaca por análises bioquímicas e o padrão histopatológico do fígado, rins e coração. Observou-se redução significativa na carga parasitária após tratamento com antimônio trivalente lipossomal no fígado, baço e medula óssea de 47%, 33% e 47%, respectivamente, indicando a capacidade do sistema de vetorização de direcionar o medicamento para esses compartimentos. A administração concomitante do AA e SbIII livre ou em formulação lipossomal não interferiu na atividade leishmanicida do SbIII. Não foi observada diminuição na carga parasitária após tratamento com antimônio trivalente livre em nenhum dos órgãos avaliados. Os resultados mostraram nenhuma alteração no padrão fenotípico de células do baço por citometria de fluxo ou nas funções hepática, cardíaca e renal por análises bioquímicas. As análises histopatológicas mostraram que a coadministração dos lipossomas de SbIII e AA foi capaz de preservar os tecidos hepático e renal quando comparados os diferentes grupos experimentais. Os resultados desse trabalho permitiram concluir que a referida preparação lipossomal representa uma alternativa terapêutica capaz de reduzir a carga parasitária nos diferentes órgãos alvo, com potencial para a eliminação do parasito na medula óssea. A coadministração do AA aos lipossomas de SbIII acarretou redução na toxicidade do SbIII. Em conjunto, nossos dados apontam os benefícios do encapsulamento do SbIII em lipossomas unilamelares demonstrados pela redução das alterações histopatológicas para fígado e rins, particularmente em combinação com AA. Acreditamos que nosso trabalho será útil para a proposição de novos regimes terapêuticos para o tratamento da leishmaniose visceral, garantindo a adesão do paciente à terapia devido à redução dos efeitos colaterais. _______________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The present study evaluated the utilization of conventional liposomes as carriers of trivalent antimony (SbIII), and its association with ascorbic acid, for the treatment of murine visceral leishmaniasis. Liposomes composed of diestearoylphosphatidylcholine and cholesterol (5:4) were obtained according to the freeze / thaw technique and hydrated in a solution of tartar emetic. Empty liposomes, hydrated in phosphate buffer, served as control vehicles. Characterization of the liposomal formulation revealed size, polydispersity index and encapsulation efficiency of 222.5 nm, 0.214 and 15%, respectively, for a formulation containing 4 mg SbIII/mL. It also displayed biphasic release kinetics in vitro. BALB/c mice, aged 6 to 8 weeks, were intravenously inoculated with 1 x 107 Leishmania (Leishmania) infantum promastigotes (C43 strain). Six weeks post infection, the animals were divided into seven groups (n=8) and treated intraperitoneally, as a single dose, with either (1) phosphate buffer, (2) SbIII at 9 mg Sb/kg, (3) empty liposomes, (4) SbIII-entrapped liposomes at 9 mg Sb/kg, (5) ascorbic acid (AA) at 300 mg/kg, (6) association of AA (300 mg/kg) with SbIII at 9 mg Sb/kg or (7) association of AA (300 mg/kg) with SbIII-entrapped liposomes at 9 mg Sb/kg. Ten days after treatment, animals were euthanized and the parasite load associated to the liver, spleen and bone marrow evaluated through the limiting dilution technique. Immunophenotyping of spleen cells was performed using flow cytometry. Enzyme activities in the serum were used to monitor hepatic, kidney and cardiac functions. Histopathological examinations of the liver, kidney and heart were also conducted. After treatment with SbIII-entrapped liposomes it was observed 47%, 33% and 47%, reductions in parasite load in the liver, spleen and bone marrow, respectively, indicating the ability of such delivery system to target the active principle to these compartments. Parallel administration of ascorbic acid with either free SbIII or SbIII-entrapped liposomes did not interfere with SbIII´s leishmanicide activity. No reduction in parasite load was observed after treatment with free SbIII for any of the investigated organs. Our results did not reveal any significant alteration in the profile of spleen cells. In addition, no impairment in the hepatic, renal and cardiac functions were observed. Histopathological analyses demonstrated that the co-administration of ascorbic acid with SbIII-entrapped liposomes was able to preserve the integrity of the hepatic and kidney tissues, in comparison to those from other experimental groups. The obtained results allowed us to conclude that our proposed SbIII liposomal preparation represents a therapeutic alternative able to reduce parasite burden with the potential to eliminate parasitism at the bone marrow. Co-administration of AA and SbIII-entrapped liposomes promoted reduced toxicity of SbIII. Collectively, our data extended the proposed benefits of unilamellar liposomes carrying SbIII by demonstrating their reduced toxicity, particularly in combination with ascorbic acid to the liver and kidney tissues. We believe our investigation can be useful for the proposal of novel therapeutic regimens to successfully treat visceral leishmaniasis aiming to guarantee patient compliance whilst minimizing potential side effects.
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Avaliação da carga parasitária em cães com infecção natural Leishmania (Leishmania) infantum chagasi submetidos a tratamento experimental / Parasite load evaluation in gogs naturally infected with Leishmania (Leishmania) infantum chagasi submitted to experimental treatment

NASCIMENTO, Glaucia Grazielle 15 June 2015 (has links)
Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-06-13T11:58:04Z No. of bitstreams: 1 Glaucia Grazielle Nascimento.pdf: 1563273 bytes, checksum: 8be5176981c6636746920cd3e2419ba1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T11:58:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Glaucia Grazielle Nascimento.pdf: 1563273 bytes, checksum: 8be5176981c6636746920cd3e2419ba1 (MD5) Previous issue date: 2015-06-15 / The Canine Visceral Leishmaniasis is a disease whose etiological agent in Brazil is the species of Leishmania (Leishmania) infantum chagasi, endemic in several regions, transmitted by insect-vector Lutzomyia longipalpis. The domestic dog is considered the most important parasite reservoir. This study aimed to evaluate the parasite load in dogs naturally infected with Leishmania (L.) infantum chagasi submitted to experimental treatment. For this purpose we used 18 asymptomatic dogs naturally infected with Leishmania (L.) infantum chagasi of both sexes, various ages submitted to treatment protocol with allopurinol 10 mg / kg 12h hours, domperidone 1 mg / kg every 24 hours during twelve months, associated with inactivated vaccine, three doses at 21 days interval by the subcutaneous route at a dilution of lyophilized to two parts of a diluent. The animals were submitted to clinical evaluation, blood tests, biochemical, immunohistochemistry of skin and monitoring through the Polymerase Chain Reaction in moments zero (M0), six months (M6) and twelve months (12M). Were observed significant remission of clinical signs in 100% (18/18) of the dogs in the post-treatment times, as well as standardization and improvement of haematological and biochemical parameters. In immunohistochemistry the skin, there was a significant reduction and elimination of parasites in the skin between times. PCR detected DNA of the parasite in skin samples and bone marrow after twelve months of treatment, with significant reduction between the pre- and post-treatment. The results of this study conclude that the treatment with allopurinol and domperidone associated with inactivated vaccine, to promote remission of clinical signs and reduction of parasite burden in animals with visceral leishmaniasis. / A Leishmaniose Visceral Canina é uma doença que tem como agente etiológico no Brasil a espécie do protozoário Leishmania (Leishmania) infantum chagasi, endêmica em várias regiões, transmitida pelo inseto-vetor Lutzomyia longipalpis. O cão doméstico é considerado o mais importante reservatório do parasita. O objetivo deste trabalho foi avaliar a carga parasitária em cães naturalmente infectados com Leishmania (L.) infantum chagasi submetidos a tratamento experimental. Para tanto utilizou-se 18 cães sintomáticos, naturalmente infectados por Leishmania (L.) infantum chagasi de ambos os sexos, idades variadas submetidos a protocolo de tratamento com alopurinol 10 mg/kg a cada 12h horas, domperidona 1 mg/kg a cada 24 horas, durante doze meses, associado com a vacina inativada, três doses com intervalo de 21 dias, por via subcutânea, na diluição de duas partes do liofilizado para uma do diluente. Os animais foram submetidos à avaliação clínica, testes hematológicos, bioquímicos, imuno-histoquímica de pele e monitoramento através da Reação em Cadeia da Polimerase, nos momentos zero (M0), seis meses (M6) e doze meses (12M). Houve remissão significativa dos sinais clínicos em 100% (18/18) dos cães nos momentos pós-tratamento, bem como normalização e melhora dos parâmetros hematológicos e bioquímicos. Na imuno-histoquímica da pele, houve redução significativa e eliminação dos parasitos na pele entre os momentos. Na PCR foi detectado DNA do parasita nas amostras de pele e medula óssea após doze meses de tratamento, embora com redução significativas entre os momentos pré e pós-tratamento. Os resultados deste trabalho concluem que o tratamento com alopurinol e domperidona associado com a vacina inativada, promove a remissão dos sinais clinicos e redução da carga parasitária em animais com leishmaniose visceral.
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Estudo da correlação entre entre a carga parasitária de cães com diferentes apresentações clínicas da Leishmaniose Visceral e a transmissão ao vetor da Leishmania infantum

Borja, Lairton Souza January 2013 (has links)
Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-11-07T16:33:35Z No. of bitstreams: 1 Lairton Souza Borja Estudo da Correlação entre a carga parasitária de cães com diferentes...pdf: 1237856 bytes, checksum: 9bc0086e1a2811c6ba645a2fc3b31e9f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-07T16:33:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lairton Souza Borja Estudo da Correlação entre a carga parasitária de cães com diferentes...pdf: 1237856 bytes, checksum: 9bc0086e1a2811c6ba645a2fc3b31e9f (MD5) Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil. / No Novo Mundo, a leishmaniose visceral (LV) é causada pela Leishmania infantum, que tem como vetor o inseto flebotomíneo Lutzomyia longipalpis. Os cães são considerados o principal reservatório urbano da infecção. Devido ao fato do controle da LV se basear, principalmente, no controle da leishmaniose visceral canina (LVC), é importante estudar o papel dos cães na transmissão da infecção. Foi demonstrado que cães apresentando diferentes apresentações clínicas da LV, inclusive os assintomáticos transmitem a infecção ao vetor flebotomíneo. Nenhum estudo sistemático avaliou a associação direta entre a carga parasitária em diferentes tecidos e a transmissão do parasito. A hipótese desse estudo é que cães com baixa carga parasitária na pele e no sangue não transmitem a infecção ao vetor flebotomíneo. O objetivo deste estudo foi analisar se há correlação entre a carga parasitária de cães com diferentes apresentações clínicas da LV e a transmissão ao vetor Lutzomyia longipalpis. Foram selecionados 35 cães de dois canis, locazidos em area endêmica (n=23) e não endêmica (n=12) para LV. Os animais foram classificados de acordo com o número de sinais clínicos em: assintomáticos (sem sinais; n=12), oligossintomáticos (1-3 sinais; n=15) e polissintomático (<3 sinais; n =8). Todos os 35 cães foram positivos em pelo menos um dos testes diagnósticos: ELISA (n=8), cultura de aspirado esplênico (n=9) e qPCR (n=35) dos tecidos avaliados. Diferentes tecidos (sangue periférico, aspirado esplênico e biópsia de pele) foram coletados para quantificação do DNA do parasito pela qPCR. Para avaliar a capacidade de transmissão dos cães, foi realizado xenodiagnóstico, seguido de determinação da carga parasitária em cada flebótomo utilizando qPCR. Finalmente, a capacidade de transmissão de Leishmania foi estimada pela determinação, após o xenodiagnóstico, da infectividade de cães ao flebótomo, da taxa de infecção de flebótomos, e da carga parasitária transmitida aos flebótomos. Baixa carga parasitária na pele e no sangue foi detectada em aproximadamente 85% dos cães assintomáticos. A infectividade de cães ao flebótomo variou de 60 a 90%, e foi similar entre animais apresentando diferentes números de sinais clínicos. Foi identificado que o maior percentual (51%) de cães transmite parasitos a um pequeno número de flebótomos (de 1 a 5 em 30 flebótomos utilizados no xenodiagnóstico). Entre os tecidos analisados, correlação positiva foi detectada entre a infectividade de cães ao vetor e a carga parasitária nas amostras de sangue (r = 0.50, p<0.01). Adicionalmente, foi observada, correlação positiva entre menor taxa de infecção dos flebótomos e baixa carga parasitária no sangue (r = 0.53, p<0.01). Em conjunto, estes dados mostram que cães com baixa carga parasitária são capazes de transmitir o parasito, porém a um pequeno número de flebótomos e com uma baixa carga parasitária. / In the New World, visceral leishmaniasis (VL) is caused by Leishmania infantum and is usually transmitted by Lutzomyia longipalpis. Dogs are considered the main urban reservoir of the parasite. Evaluation of the importance of dogs in Leishmania transmission in VL is well established. Dogs with different clinical forms of VL have shown to transmit the infection to the sandfly vector, even those with no clinical signs of the disease. Comprehensive studies that correlate transmission and parasite load in different tissues are scarce. Our hypothesis is that dogs with low parasite load in the skin and blood do not transmit the infection to the sandfly vector. We aimed to analyze the correlation between parasite load of dogs with different clinical forms of CVL and transmission to the vector Lutzomyia longipalpis. Thirty five dogs were selected from two canine kennels, located in an endemic (n=23) and non-endemic area (n=12) for VL. These animals were classified according to the clinical signs into asymptomatic (no signs; n=12), olygosymptomatic (1-3 signs; n=15) and polysymptomatic (>3 signs; n=8). All the 35 dogs tested positive for at least one of the diagnostic tests: ELISA (n=8), culture in splenic aspirates (n=9) and qPCR for Leishmania DNA detection (n=35). Different tissues (blood, splenic aspirate and skin biopsy) were collected for quantification of parasite load using qPCR. To evaluate the infectivity of the dogs to vector, first we performed the xenodiagnosis, then we quantified parasite load in each sandfly using qPCR. Finally, transmission of Leishmania was estimated by determining infectivity to sandflies, and the infection rate, and the parasite load transmitted to sandflies. Low parasite load in the skin and blood was detected in approximately 85% of asymptomatic dogs. Infectivity to sandflies varied from 60 to 90%, and shown to be similar among animals presenting different number of clinical signs. It was noted that the highest percentage (51%) of dogs transmitted infection to a small number of sandflies (from 1 to 5 in 30 sandflies used in xenodiagnosis). Positive correlation between infectivity to sandflies and parasite load was only detected in blood among the tissues analyzed (r = 0.50, p <0.01). Additionally, a lower parasite load in blood (r = 0.53, p <0.01) were correlated to the presence of lower number of positive sandflies in xenodiagnosis. These findings indicate that animals with low parasite load are capable to transmit Leishmania to sandflies, although to a lower number of sandflies and with a low parasite load.
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Avaliação da carga parasitária e fatores de virulência em lesões de pacientes com Leishmaniose Tegumentar Americanacorrelação com a forma clínica e resposta à terapêutica

Lourenço, Luana Souza de Aguiar January 2015 (has links)
Made available in DSpace on 2016-04-04T12:45:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 luana_lourenco_ioc_mest_2015.pdf: 2708180 bytes, checksum: 1ba7e6b26d3cc94cbe2e47f016f3d912 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Estudos prévios sobre os aspectos histopatológicos da leishmaniose tegumentar americana (LTA) causada por Leishmania (Viannia) braziliensis indicam que a carga parasitária, apesar de baixa, variava de acordo não só com a forma clínica, mas também com o tempo de evolução da doença. O insucesso do tratamento e a evolução para formas mais graves dependem de características do parasita e de aspectos da resposta imune do paciente, dentre outros. Os pacientes com a forma cutânea tendem a responder de forma satisfatória, mesmo com protocolo em que se usa baixa dose de antimoniato de meglumina. Entretanto, alguns desses casos demoram mais tempo para atingir a cura clínica ou recidivam ou ainda desenvolvem a forma mucosa. Este projeto teve como meta avaliar a carga parasitária inicial e fatores de virulência em lesões de pacientes com LTA, correlacionando com a forma clínica e resposta à terapêutica. Foram selecionados 82 pacientes com diagnóstico confirmado de LTA. A carga parasitária foi avaliada por PCR quantitativo (qPCR), utilizando-se como alvo genes de subunidade menor de RNA ribossomal (SSR). A análise da expressão gênica de GP63 deu-se pelo uso de RT-PCR e a imunolocalização de GP63 e LPG nas lesões foi conduzida por ensaios de imunoperoxidase. Os dados de quantificação da carga parasitária mostraram parasitismo maior nas lesões que evoluíram com boa resposta ao tratamento, enquanto que a expressão gênica de GP63 e a produção \201Cin situ\201D de GP63 e LPG foram mais significativas nos casos que evoluíram de forma desfavorável ao tratamento. Com isso podemos concluir que mais que a carga parasitária, a regulação de fatores de virulência no infiltrado inflamatório pode influenciar na evolução clínica da LTA causada por L.(V.) braziliensis / Previous studies on the histopathological aspects o f american cutaneous leishmaniasis (ACL) caused by Leishmania (V.) braziliensis indicate that the parasite load, although low, varied according not only to th e clinical form, but also with the disease progression. Treatment failure and progress ion to more severe forms depend on parasite characteristics and the aspects of pati ent immune response, among other factors. Patients with cutaneous form tend to respo nd satisfactorily, even with protocols that use low-dose meglumine antimoniate. However, some of these cases either take longer to reach clinical cure, relapse or even develop to mucosal form. This project aims to assess the initial parasite load an d virulence factors in patients with ACL injuries, correlating with the clinical present ation and response to therapy. We selected 82 patients with confirmed diagnosis of LT A. The parasitic load was measured by quantitative PCR (qPCR), using small su bunit ribosomal RNA (SSR) genes as targets. Analysis of GP63 gene expression was done by RT-PCR and immunolocalization of GP63 and LPG lesions was cond ucted by immunoperoxidase assays. The quantification of the parasite load dat a showed higher parasitism in lesions that evolved with good response to treatmen t, whereas gene expression of GP63 and "in situ" production of GP63 and LPG were more significant in cases that evolved unfavorably to treatment. Thus, we conclude d that rather than the parasite load, the regulation of virulence factors in the in flammatory infiltrate may be influencing the clinical course of ACL caused by L. (V.) braziliensis .
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Leishmaniose visceral caninacorrelação da resposta imunológica com a carga parasitária e a variabilidade genética do parasita

Cavalcanti, Amanda dos Santos January 2014 (has links)
Made available in DSpace on 2016-04-04T12:47:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 amanda_cavalcanti_ioc_dout_2014.pdf: 8125448 bytes, checksum: a21804f13675939416a209e2c1250af8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Leishmaniose Visceral causada pela Leishmania infantum é uma doença zoonótica no Novo Mundo em que o cão é o principal hospedeiro doméstico. O conhecimento prévio dos mecanismos imunopatogênicos associados à infecção por L. infantum é necessário para o desenvolvimento de vacinas e outras estratégias de controle. O objetivo geral desta tese foi correlacionar a expressão clínica, a carga parasitária, a resposta imunológica do hospedeiro e a diversidade genética dos parasitos em cães naturalmente infectados por L. infantum. O presente estudo é uma avaliação transversal de noventa e dois cães naturalmente infectados por L. infantum provenientes do estado do Mato Grosso. A infecção dos animais incluídos no estudo foi confirmada por sorologia, cultura e /ou PCR. O diagnóstico etiológico foi realizado por PCR-RFLP para o gene hsp70 e por eletroforese de enzimas nos parasitos isolados. Foram ainda analisados os sinais clínicos, a resposta imune pela expressão gênica de citocinas, a carga parasitária por qPCR, as alterações histológicas no baço e fígado e a as populações e genótipos de L. infantum circulantes por meio da análise do polimorfismo de microssatélites. Foram definidos grupos de acordo com a carga parasitária esplênica e hepática. Os animais com alta carga parasitária apresentaram altos títulos de anticorpos específicos anti-Leishmania e mais sinais clínicos da doença A carga parasitária no baço foi maior do que no fígado e houve correlação com o rompimento da arquitetura esplênica, caracterizado principalmente pela desorganização da polpa branca. No fígado, a carga parasitária foi correlacionada positivamente à ocorrência de granulomas, à degeneração dos hepatócitos bem como à intensidade do infiltrado inflamatório. Mostramos que a maior carga parasitária promoveu menor expressão gênica de IL-12, IFN\03B3, TNF, IL-6, TGF\03B2 e IL-10 no baço e maior expressão de CCL2, CXCL8 e MAP4K4 no fígado. A análise genética dos parasitos é indicativa de que há infecção policlonal e tropismo tissular de alguns clones, mais evidente na análise das amostras pareadas (tecidos e isolados do tecido). Foi observada baixa variabilidade genética em que a maioria (96%, 49/51) das amostras foi caracterizada como pertencente a POP2, dentre as populações circulantes no Brasil previamente descritas pelo nosso grupo. Não houve associação entre a variabilidade genética dos parasitos e os parâmetros clínicos, parasitológicos ou imunológicos. Apesar disso, os dados gerados pelos ensaios in vitro com as cepas de diferentes populações sugerem que há sim diferenças na infectividade entre cepas com genótipos de microssatélites distintos. Foi reunida uma série de dados que, em conjunto, mostram que na região estudada a Leishmanise Canina é causada por população geneticamente homogênea não tendo sido observada nenhuma correlação entre genótipos específicos e o fenótipo da infecção canina / Visceral leishmaniasis is a zoonotic disease in the New World and the domestic dog is the main host of Leishmania infantum . Prior knowledge of the immunopathogenic mechanisms associated with infection by L. infantum is required for the development of vaccines and other control strategies. The overall aim of this thesis was to compare the clinical expression, parasite load, the host immune response and genetic diversity of parasites in dogs naturally infected with L. infantum . This study is a cross - sect ional assessment of ninety - two dogs naturally infected by L. infantum . Infection was confirmed by serology, parasite culture and / or PCR. The etiology was assessed by hsp70 PCR - RFLP and MLEE . We further analyzed clinical signs , immune response by cytokine gene expression, molecular parasite load by qPCR, histological changes in sple nic and hepatic compartments and also L. infantum populations and genotypes through microsatellite analysis. Groups according to the spleen and liver parasite load were defined. Animals with high parasite load had high titers of anti - Leishmania antibodies and more clinical signs. The paras ite load in the spleen was higher than in liver and correlated with disruption of splenic architecture, mainly characterized by white pulp diso rganization. Liver parasite load was correlated with the occurrence of granulomas, degeneration and intensity of the inflammatory infiltrate. We show that the higher parasite load promoted lower gene expression o f IL - 12, IFNγ, TNF, IL - 6, IL - 10 and TGFβ in the spleen and increased expression of CCL2, CXCL8 MAP4K4 in the liver. Genetic analysis of parasites is indicative of polyclonal infection and tissue tropism of some clones, more evident in the analysis of paire d samples ( strain isolated and tissue). We also found l ow genetic variability , in which the majority (96%, 49/51) of the samples was characterized as belonging to POP2, among tree populations previously described by our group. There was no association betw een the genetic variability of the parasites and the clinical, parasitological and immunological parameters. Nevertheless, the data generated by in vitro assays with strains from different populations suggest that there are differences in infectivity betwe en strains with distinct m icrosatellite genotypes. Taken together, these results show that in the region studied Canine Leishmaniasis is caused by genetically homogeneous population without any correlation between specific genotypes and the phenotype of ca nine infection .
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Análise da composição celular e imunodetecção de MIF em linfonodos de cães com Leishmaniose Visceral

Bandarra, Márcio de Barros [UNESP] 22 July 2010 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-22Bitstream added on 2014-06-13T18:56:55Z : No. of bitstreams: 1 bandarra_mb_me_jabo.pdf: 1017344 bytes, checksum: e535ebeb65428859bad53de71a4fb528 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Leishmaniose Visceral (LV) é uma zoonose de interesse em saúde pública e o cão é o principal reservatório doméstico de Leishmania chagasi. Este protozoário modula a resposta imune do hospedeiro. A citocina MIF favorece a permanência do macrófago no sítio da injúria e protege-o da apoptose. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de MIF nos linfonodos de cães com LV, comparando estes achados com a densidade de macrófagos parasitados nos linfonodos e com o estadiamento clínico dos cães. Neste estudo utilizou-se 33 cães oriundos de Araçatuba, município endêmico para a LV. Os cães foram distribuídos nos grupos assintomático (A), oligossintomático (O) e sintomático (S). As alterações morfológicas dos linfonodos poplíteo, subescapular, ilíaco e mesentérico foram avaliadas quanto ao perfil celular, determinado por escores. A carga parasitária e a imunodetecção de MIF foi feita pela técnica de imuno-histoquímica. Nos cães dos grupos com sinais clínicos (O e S), as reações inflamatória granulomatosa e plasmocitária foram predominantes. No grupo S, a atrofia linfóide predominou e associou-se ao maior número de granulomas e a maior carga parasitária. A densidade de parasitos nos linfonodos periféricos diferiu significativamente do grupo S para os demais grupos (P<0,05). A densidade de macrófagos imunomarcados com MIF foi maior no grupo S e apresentou uma correlação significativa com a carga parasitária no linfonodo poplíteo (P<0,05). Conclui-se que macrófagos são uma das células mais envolvidas na resposta ao parasito. O protozoário utiliza MIF para manter o macrófago no sítio de infecção, favorecendo a sua sobrevivência no hospedeiro / Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonotic disease critical for the public health and the dog is the main Leishmania chagasi„s domestic reservoir. This protozoan modulates the immune response of the host. The MIF cytokine facilitates the permanence of the macrophage in the site of injury and protects it from apoptosis. The aim of this study was to evaluate the MIF presence in the lymph nodes of dogs with VL, comparing these findings with the parasite density in the lymph nodes and with the clinical outcome of the dogs. Third three dogs from Araçatuba, an endemic city for VL, were used in this study. Dogs were distributed in the asymptomatic (A), oligosymptomatic (O) and symptomatic (S) groups. The cellular profile of the morphologic changes of the popliteal, subscapular, iliac and mesenteric lymph nodes were evaluated and scored. Immunohistochemistry did the parasite load and the MIF immunodetection technique. Granulomatous and plasmocitary inflammatory reaction predominated in the groups with clinical signs (O and S). In the S group, lymphoid atrophy predominated and was associated with high number of granulomas and high parasite load. Comparing the groups, the density of the parasites in the peripheral lymph nodes was significantly different for the S group (P<0.05). The density of the immunolabeling MIF macrophages was higher in the S group and had a significant positive correlation with the parasite load in the popliteal lymph node (P<0.05). In conclusion, the macrophages are the most involved cells, and the protozoan uses the MIF to keep the macrophage in the infection site, helping its survival in the host
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Avaliação da carga parasitária, produção de citocinas e alterações histológicas em camundongos Balb/c submetidos à esplenectomia e ao implante autógeno de baço após infecção com Leishmania chagasi

Lima, Izabelly Fávero Souza 17 June 2010 (has links)
Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-09-22T14:40:30Z No. of bitstreams: 1 isabellyfaverosouzalima.pdf: 1179067 bytes, checksum: dbb0904f6dd93dcd64a8658c4de22481 (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2016-09-26T20:29:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 isabellyfaverosouzalima.pdf: 1179067 bytes, checksum: dbb0904f6dd93dcd64a8658c4de22481 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-26T20:29:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 isabellyfaverosouzalima.pdf: 1179067 bytes, checksum: dbb0904f6dd93dcd64a8658c4de22481 (MD5) Previous issue date: 2010-06-17 / O implante autógeno de baço é uma opção para a preservação das funções esplênicas após esplenectomia total. Indivíduos esplenectomizados são mais susceptíveis a infecções por diversas bactérias, havendo poucos relatos sobre a importância do baço na resistência a infecção por parasitos do gênero Leishmania. As leishmanioses são doenças infecciosas causadas por protozoários unicelulares flagelados, que sobrevivem em macrófagos após a fagocitose. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da esplenectomia e de implantes esplênicos autógenos na carga parasitária e produção de citocinas como IFN-, IL-12, TNF-, IL-10 e IL-17 no fígado e baço de camundongos BALB/c infectados intraperitonialmente com 106 promastigotas de Leishmania chagasi. A presença de infiltrados inflamatórios no fígado dos animais infectados foi também avaliada em cortes de tecidos incluídos em parafina corados com hematoxilina-eosina. Camundongos BALB/c foram divididos nos seguintes grupos: esplenectomizado (SP), esplenectomizado e autotransplantado em grande omento (AT), e controle operado (CT). Trinta dias após a realização da cirurgia os animais foram infectados com 106 promastigotas de L. chagasi. Após trinta dias da infecção os animais foram eutanasiados, tendo o baço e fígado coletados, macerados e usados para avaliar a carga parasitária pelo método da diluição limitante e os sobrenadantes dos macerados utilizados para a produção de citocinas pelo método de ELISA. Os resultados obtidos mostram que os animais esplenectomizados apresentam carga parasitária maior no fígado quando comparados aos grupos CT e AT, coincidindo também com a maior produção de IL-10. Por outro lado, animais esplenetomizados tiveram menor produção de IFN-, IL-12 e TNF-quando comparados aos animais controle e autotransplantado em grande omento. Já a IL-17 foi produzida em maior quantidade no fígado dos animais esplenectomizados. Nos animais SP e AT foram observados poucos infiltrados de células mononucleares no fígado, em comparação aos animais CT, que mostraram um acúmulo moderado de infiltrados no fígado. Os resultados obtidos sugerem a importância do baço para o desenvolvimento de uma resposta imune mais efetiva à infecção com L. chagasi. Isto correlaciona com a produção elevada de citocinas pro-inflamatórias com perfil Th1, e maior recrutamento de células mononucleares para o sítio de infecção. Portanto a esplenectomia pode interferir no padrão de resposta imunológica dos animais infectados com L. chagasi, levando a maior suscetibilidade a infecção. / The autogenous implant of spleen is an option for the preservation of splenic function after total splenectomy. Although it has been demonstrated that splenectomized individuals are more sensitive to infections by various bacteria, few reports existing on the importance of the spleen in resistance to infection by Leishmania sp. Leishmaniasis is an infectious disease caused by an unicellular flagellate protozoa, which survive in macrophages after phagocytosis. The objective of this work was to evaluate the influence of splenectomy and autogenous implant of spleen on the parasitic load and in the production of IFN-, IL-12, TNF-,IL-10 and IL-17 in the liver and spleen of BALB/c mice infected intraperitoneally (i.p.) with 106 promastigotes of L. chagasi. Presence of inflammatory infiltrate in the liver of the infected animals was also evaluated, through hematoxylin-eosin staining of tissue cuts embedded in paraffin. BALB/c mice were divided into the following groups: splenectomized (SP), splenectomized and autotransplanted in the greater omentum (AT), and control group with sham operation (CT). Thirty days after the surgery the animals were infected i.p. with 106 promastigotas of L. chagasi. After thirty days of infection the animals were euthanized, the spleen and the liver collected, macerated, and used for evaluation of the parasitic load through the technique of limiting dilution, and for production of cytokines through the method of ELISA. The results obtained show that the splenectomized animals presented a larger parasitic load when compared to the CT and AT groups, having also a greater production of IL-10 in the liver. On the other hand, the CT and AT groups showed greater production of IFN-, IL-12 and TNF- than the splenectomized group. The production of IL-17 was greater in the liver of the splenectomized animals. In the splenectomized animals few infiltrates of mononuclear cells were observed, in comparison to the animals with intact spleen, which showed a moderate accumulation of mononuclear cells in the liver. The results obtained suggest that the presence of the spleen favors the development of a more effective immune response to infection with L. chagasi, this being correlated with an elevated production of pro-inflammatory cytokines with Th1 profile, and greater recruitment of mononuclear cells to the infection site. However, splenectomy can interfere in the pattern of immunologic reponse of animals infected with Leishmania chagasi, leading to a greater sensitivity to the infection.
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Contribuição para o desenvolvimento de uma vacina contra leishmaniose visceral canina.

Bagues, Naiara Carvalho Teixeira January 2016 (has links)
Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-06-21T17:33:38Z No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuição para o ... 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-06-21T17:33:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuição para o ... 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-21T17:33:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuição para o ... 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:19:17Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuicao para o 2016.pdf.txt: 243367 bytes, checksum: 9df9a4fb8bc7a3cd21d749f05648f537 (MD5) Naiara Carvalho Teixeira Bagues Contribuicao para o 2016.pdf: 2270065 bytes, checksum: ee36fb7fb8ecab2b0af558caddf66435 (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Gonçalo Moniz, Instituto de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / INTRODUÇÃO: A Leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecciosa e parasitária que se encontra em expansão no Brasil. A espécie que causa a doença no Brasil é a Leishmania infantum. O cão é o principal reservatório do parasita. Uma vacina contra leishmaniose visceral canina (LVC) pode favorecer o controle da doença. Este trabalho tem como objetivo contribuir para o desenvolvimento de uma vacina contra LVC. OBJETIVO: O estudo do primeiro capítulo visou o desenvolvimento de um modelo para a avaliação de antígenos candidatos à vacina contra LVC. METODOLOGIA: Um experimento foi realizado para obtenção de cães resistentes a LVC. Os linfócitos dos animais deveriam ser capazes de reconhecer antígenos potencialmente úteis para o desenvolvimento de uma vacina. Para isso, uma cepa de L.infantum foi isolada de cão naturalmente infectado e doente (Camaçari, Bahia). Seis cães adultos e sadios foram inoculados com 1x108 formas promastigotas em fase estacionária de cultura por via dérmica e acompanhados por dois anos. RESULTADOS: Os animais apresentaram: 1) área de induração e ulceração rasa no local da inoculação do parasita com cura espontânea em um período inferior a três meses, 2) ausência de manifestações clínicas e de alterações hematológicas e bioquímicas séricas, 3) produção baixa e flutuante de anticorpos da classe IgG reativos a antígenos de Leishmania, 4) resposta linfoproliferativa (em 4 de 6 cães) frente a estimulação com antígenos de Leishmania, 5) produção baixa de IFN-γ em um ensaio realizado com sangue total incubado por 24h com antígenos de Leishmania (4 de 5 cães), 6) carga parasitária baixa em aspirado de baço, detectada por PCR em tempo real. CONCLUSÃO: Os animais desenvolveram uma forma subclínica da infecção ao lado de resposta imune humoral e celular fracas. OBJETIVO: No segundo capítulo foi testado um ensaio de avaliação da produção de citocinas por células de sangue de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum. O quantiFERON modificado permite a avaliação in vitro e de maneira rápida da produção de citocinas contra Leishmania em animais de área endêmica. METODOLOGIA: Antígeno solúvel e antígenos recombinantes de L. infantum (rLci2-NT-5R-CT e rLci2-NT-CT) foram produzidos e utilizados no ensaio para a estimulação do sangue total de27 cães de área endêmica e não endêmica para LVC por 24h. O plasma foi coletado e a produção das citocinas caninas IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-10 e TNF-α foram quantificadas. RESULTADO: Devido a problemas técnicos não foi possível avaliar os dados obtidos e, consequentemente, não foi possível caracterizar grupos de animais susceptíveis e resistentes. OBJETIVO: No terceiro capítulo, a carga parasitária e aspectos histológicos em diferentes regiões do baço de cães com LVC foi analisada. METODOLOGIA: A carga parasitária e alterações histológicas no baço de 6 cães com LVC foram avaliados por amostragem de três secções inferior, média e superior do órgão. RESULTADO: Observou-se uma variação na distribuição na carga parasitária do baço do mesmo animal. Avaliações histológicas (desorganização polpa branca, granulomas, periesplenite, células plasmáticas, e infiltração polimorfonuclear) mostraram uma variação na freqüência (granulomas) ou intensidade (perisplenite) no baço de 2 dos 6 cães. CONCLUSÃO: Conclui-se que a distribuição da carga parasitária e as alterações histológicas no baço de cães com LV mostram um certo grau de heterogeneidade. / INTRODUCTION: Visceral Leishmaniasis (VL) is an infectious parasitic disease which is increasing in Brazil. The species that causes the disease in Brazil is Leishmaniainfantum. The dog is the main reservoir of the parasite. A canine visceral leishmaniasis vaccine (CVL) may favor the control of the disease. This paper aims to contribute to the development of a vaccine against CVL. OBJECTIVE: The first chapter study aimed the development of a model for the evaluation of candidate antigens for a vaccine against CVL. An experiment was conducted to obtain resistant dogs to CVL. Lymphocytes of these animals should be able to recognize potentially useful antigens for a vaccine development. METHODOLOGY: For this, a strain of L. infantum was isolated from naturally infected and sick dog (Camaçari, Bahia). Six dogs and healthy adults were intradermally inoculated with 1 x 108 promastigotes in the stationary phase culture and were followed for two years. RESULTS: The animals showed: 1) induration area and shallow ulceration in parasite inoculation site with spontaneous healing in a period of less than three months, 2) absence of clinical symptoms and hematological and biochemical changes, 3) low and floating production of antibodies IgG reactive to Leishmania antigens, 4) lymphoproliferative response (in 4 of 6 dogs) compared to stimulation with leishmanial antigens, 5) low IFN-γ in a test performed on whole blood incubated for 24 h with antigen Leishmania (4 of 5 dogs), 6) a low parasite load in spleen aspirates, detected by realtime PCR. CONCLUSION: These animals developed a subclinical form of the infection alongside with a weakspecific humoral and cellular immune response and weak cell. OBJECTIVE: The second section was tested in a trial evaluating cytokine production by blood cells of dogs naturally infected with Leishmaniainfantum. The modified QuantiFERON allows evaluation both in vitro and quickly production of cytokines against Leishmania in animals in an endemic area. METHODOLOGY: Soluble antigen and recombinant antigens of L. infantum (rLci2-5R-NT-CT and rLci2-NT-CT) were produced and used in the assay for the stimulation of whole blood of 27 animals from endemic and nonendemic area for LVC for 24h. Plasma was collected and cytokine production of canine IFN- γ, IL-2, IL-6, IL-10 and TNF-α cytokines were quantified. RESULTS: Due to technical some problems, it was not possible to characterize groups of animals susceptible and resistant in relation to modified QuantiFERON assay results. OBJECTIVE: In the third chapter, the parasite load and histological aspects in different regions of the spleen of dogs with CVL were analyzed. METHODOLOGY: The parasite load and histological changes in the spleen of 6 dogs with CVL were evaluated by sampling three sections of the spleen (lower, middle and upper section of the organ). RESULTS: There was a variation in parasitic load distribution in the spleen of the same animal. Histological evaluations (disorganized white pulp, granulomas, periesplenite, plasma cells, and polymorphonuclear infiltration) showed a variation in the frequency (granulomas) or intensity (perisplenite) in spleen in 2 of 6 dogs. CONCLUSION: Therefore, the distribution of the parasitic load and histological changes in dogs spleen with VL show a certain degree of heterogeneity.
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Aspectos epidemiológicos e laboratoriais (Eosinófilos e IgE total) em portadores de Schistosoma mansoni e Geohelmintos. / Epidemiological aspects and laboratory (Eosinophils and total IgE) in patients with Schistosoma mansoni and Geohelminths.

Gama, Danielle Correia 01 July 2010 (has links)
This study aimed to evaluate laboratory aspects (total IgE and eosinophils) in patients with Schistosoma mansoni and geohelminths in three localities in Rio Largo, Alagoas. Coprological survey was conducted in 3030 subjects and examined two slides for each stool sample by the Kato-Katz technique, blood count to determine the absolute and relative number of eosinophilic and quantification of serum total IgE using the automated chemiluminescence system (Automated Chemiluminescence Systems) ACS: 180 SIEMENS, adapted to the System II and MAGIC LITE using commercial kits in 547 individuals from three localities infested by the snail Biomphalaria glabrata, close to the river Mundaú and environmental similarities. The subjects were divided into four groups, G1 (co-infected with S. mansoni and geohelminths): n = 115 (21.02%) with mean age 21.18 ± 13.08 years, G2 (infected only by S. mansoni): n = 127 (23.22%) with mean age 29.59 ± 16.54 years; G3 (infected only by geohelminths): n = 149 (27.24%) with mean age 23.99 ± 15.52 years and G4 (negative for S. mansoni and geohelminths, the control group): n = 156 (28.52%) with mean age 25.44 ± 14.60 years. The parasitic load of S. mansoni was quantified and classified according to intensity of infection by the number of eggs per gram of feces detected. The study was approved by the Ethics Committee of the Federal University of Alagoas and implemented in accordance with the resolution MS-CNS 196/96. For processing and data analysis used the software SPSS 11.5. In all analysis was considered the 5% level of significance. The descriptive statistical analysis of qualitative and quantitative variables were performed by the distribution of relative frequencies and absolute position measurements (mean) and dispersion (standard deviation). He applied the normality test, t test, analysis of variance oneway (ANOVA), chi-square test, Fisher exact test, Pearson and Spearman correlation and linear regression. Of the 3030 samples, 1,209 (39.90%) were positive for any helminth, and 679 (22.41%) positive for A. lumbricoides, 546 (18.02%) for T. Trichiura, 220 (7.26%) to Ancyostomatidae and 242 (8.0%) for S. mansoni. There was no statistically significant difference (p>0.05) of individuals positive for S. mansoni separated by gender, age and locality, the mean parasite burden was moderate and 111 epg (minimum 24 and maximum of 4,080 epg). Eosinophils increased significantly with increasing parasite load (p<0.05). The absolute and relative eosinophilia appear to have greater significance in relation to group coinfected, because presented more frequently than the other groups. There were no significant differences (p>0.05) between worm burden of S. mansoni and total IgE levels, nor between serum total IgE and age. Thus the total IgE test was not considered relevant to the diagnosis of Schistosomiasis mansoni. There was no correlation between markers of total IgE and geohelminth infections, whether they are co-infected with S. mansoni. The results suggest the importance of including eosinophil counts in epidemiological surveys, the complementation of the findings and parasitological diagnosis of schistosomiasis, contributing to more precise investigations focused on the control of schistosomiasis in endemic areas. / Este estudo objetivou avaliar aspectos laboratoriais (IgE total e eosinófilos) em portadores de Schistosoma mansoni e geohelmintos em três localidades no município de Rio Largo, Alagoas. Foi realizado inquérito coprológico em 3.030 indivíduos e analisadas duas lâminas para cada amostra de fezes pela técnica de Kato-katz, hemograma para determinar o número absoluto e relativo de eosinífilos e quantificação sérica de IgE total utilizando o sistema de quimioluminescência automatizado (Automated Chemiluminescence Systems) ACS: 180 da SIEMENS, adaptado ao Sistema MAGIC LITE II e usando kits comerciais em 547 indivíduos de três localidades infestadas pelo molusco Biomphalaria glabrata, próximas ao rio Mundaú e com semelhanças ambientais. Os indivíduos foram divididos em 4 grupos, G1 (co-infectados por S. mansoni e geohelmintos): n=115 (21,02%) com média de idade 21,18 ± 13,08 anos; G2 (infectados apenas por S. mansoni): n=127 (23,22%) com média de idade 29,59 ± 16,54 anos; G3 (infectados exclusivamente por geohelmintos): n=149 (27,24%) com média de idade 23,99 ± 15,52 anos e G4 (negativos para S. mansoni e geohelmintos, considerado grupo controle): n=156 (28,52%) com média de idade 25,44 ± 14,60 anos. A carga parasitária do S. mansoni foi quantificada e classificada de acordo com a intensidade da infecção pelo número de ovos por grama de fezes detectados. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Federal de Alagoas e executado de acordo com a resolução CNS-MS 196/96. Para o processamento e análise dos dados utilizou-se o software SPSS 11.5. Em todas as análises foi considerado o nível de 5% de significância. A análise estatística descritiva das variáveis qualitativas e quantitativas foram realizadas através da distribuição de freqüências relativas e absolutas, medidas de posição (média aritmética) e dispersão (desvio padrão). Aplicou-se teste de normalidade, teste t, análise de variância one-way (ANOVA), teste do quiquadrado de Pearson, teste exato de Fisher, correlação de Pearson e Spearman e regressão linear simples. Das 3.030 amostras, 1.209 (39,90%) estavam positivas para algum helminto, sendo 679 (22,41%) positivas para A. lumbricoides , 546 (18,02%) para T. Trichiura, 220 (7,26%) para Ancyostomatidae e 242 (8,0%) para S. mansoni. Não houve diferença estatisticamente significante (p>0,05) dos indivíduos positivos para S. mansoni separados por gênero, faixa etária e localidades, a média da carga parasitária foi moderada e de 111 opg (mínimo de 24 e máximo de 4.080 opg). Os eosinófilos aumentavam significantemente conforme o aumento da carga parasitária (p<0,05). As eosinofilias absoluta e relativa parecem ter maior significado em relação ao grupo de co-infectados, pois apresentram maior frequência em relação aos demais grupos. Não foram observadas diferenças significantes (p>0,05) entre carga parasitária de S. mansoni e níveis de IgE total, nem entre níveis séricos de IgE total e faixa etária. Desta forma o teste de IgE total não foi considerado relevante para o diagnóstico de esquistossomose mansoni. Não houve correlação entre os marcadores de IgE total e as infecções geohelmínticas, independente de estarem co-infectados por S. mansoni. Os resultados sugerem a importância da inclusão de contagem de eosinófilos em inquéritos epidemiológicos, na complementação dos achados parasitológicos e no diagnóstico da esquistossomose, contribuindo para investigações mais precisas voltadas para o controle da esquistossomose mansônica nas áreas endêmicas.

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