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Previous issue date: 2016 / Fundação Gonçalo Moniz, Instituto de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / INTRODUÇÃO: A Leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecciosa e parasitária
que se encontra em expansão no Brasil. A espécie que causa a doença no Brasil é a
Leishmania infantum. O cão é o principal reservatório do parasita. Uma vacina contra
leishmaniose visceral canina (LVC) pode favorecer o controle da doença. Este trabalho tem
como objetivo contribuir para o desenvolvimento de uma vacina contra LVC.
OBJETIVO: O estudo do primeiro capítulo visou o desenvolvimento de um modelo
para a avaliação de antígenos candidatos à vacina contra LVC. METODOLOGIA: Um
experimento foi realizado para obtenção de cães resistentes a LVC. Os linfócitos dos animais
deveriam ser capazes de reconhecer antígenos potencialmente úteis para o desenvolvimento
de uma vacina. Para isso, uma cepa de L.infantum foi isolada de cão naturalmente infectado e
doente (Camaçari, Bahia). Seis cães adultos e sadios foram inoculados com 1x108 formas
promastigotas em fase estacionária de cultura por via dérmica e acompanhados por dois anos.
RESULTADOS: Os animais apresentaram: 1) área de induração e ulceração rasa no local da
inoculação do parasita com cura espontânea em um período inferior a três meses, 2) ausência
de manifestações clínicas e de alterações hematológicas e bioquímicas séricas, 3) produção
baixa e flutuante de anticorpos da classe IgG reativos a antígenos de Leishmania, 4) resposta
linfoproliferativa (em 4 de 6 cães) frente a estimulação com antígenos de Leishmania, 5)
produção baixa de IFN-γ em um ensaio realizado com sangue total incubado por 24h com
antígenos de Leishmania (4 de 5 cães), 6) carga parasitária baixa em aspirado de baço,
detectada por PCR em tempo real. CONCLUSÃO: Os animais desenvolveram uma forma
subclínica da infecção ao lado de resposta imune humoral e celular fracas.
OBJETIVO: No segundo capítulo foi testado um ensaio de avaliação da produção de
citocinas por células de sangue de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum. O
quantiFERON modificado permite a avaliação in vitro e de maneira rápida da produção de
citocinas contra Leishmania em animais de área endêmica. METODOLOGIA: Antígeno
solúvel e antígenos recombinantes de L. infantum (rLci2-NT-5R-CT e rLci2-NT-CT) foram
produzidos e utilizados no ensaio para a estimulação do sangue total de27 cães de área
endêmica e não endêmica para LVC por 24h. O plasma foi coletado e a produção das
citocinas caninas IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-10 e TNF-α foram quantificadas. RESULTADO:
Devido a problemas técnicos não foi possível avaliar os dados obtidos e, consequentemente,
não foi possível caracterizar grupos de animais susceptíveis e resistentes.
OBJETIVO: No terceiro capítulo, a carga parasitária e aspectos histológicos em
diferentes regiões do baço de cães com LVC foi analisada. METODOLOGIA: A carga
parasitária e alterações histológicas no baço de 6 cães com LVC foram avaliados por
amostragem de três secções inferior, média e superior do órgão. RESULTADO: Observou-se
uma variação na distribuição na carga parasitária do baço do mesmo animal. Avaliações
histológicas (desorganização polpa branca, granulomas, periesplenite, células plasmáticas, e
infiltração polimorfonuclear) mostraram uma variação na freqüência (granulomas) ou
intensidade (perisplenite) no baço de 2 dos 6 cães. CONCLUSÃO: Conclui-se que a
distribuição da carga parasitária e as alterações histológicas no baço de cães com LV mostram
um certo grau de heterogeneidade. / INTRODUCTION: Visceral Leishmaniasis (VL) is an infectious parasitic disease
which is increasing in Brazil. The species that causes the disease in Brazil is
Leishmaniainfantum. The dog is the main reservoir of the parasite. A canine visceral
leishmaniasis vaccine (CVL) may favor the control of the disease. This paper aims to
contribute to the development of a vaccine against CVL.
OBJECTIVE: The first chapter study aimed the development of a model for the
evaluation of candidate antigens for a vaccine against CVL. An experiment was conducted to
obtain resistant dogs to CVL. Lymphocytes of these animals should be able to recognize
potentially useful antigens for a vaccine development. METHODOLOGY: For this, a strain
of L. infantum was isolated from naturally infected and sick dog (Camaçari, Bahia). Six dogs
and healthy adults were intradermally inoculated with 1 x 108 promastigotes in the stationary
phase culture and were followed for two years. RESULTS: The animals showed: 1)
induration area and shallow ulceration in parasite inoculation site with spontaneous healing in
a period of less than three months, 2) absence of clinical symptoms and hematological and
biochemical changes, 3) low and floating production of antibodies IgG reactive to Leishmania
antigens, 4) lymphoproliferative response (in 4 of 6 dogs) compared to stimulation with
leishmanial antigens, 5) low IFN-γ in a test performed on whole blood incubated for 24 h with
antigen Leishmania (4 of 5 dogs), 6) a low parasite load in spleen aspirates, detected by realtime
PCR. CONCLUSION: These animals developed a subclinical form of the infection
alongside with a weakspecific humoral and cellular immune response and weak cell.
OBJECTIVE: The second section was tested in a trial evaluating cytokine production
by blood cells of dogs naturally infected with Leishmaniainfantum. The modified
QuantiFERON allows evaluation both in vitro and quickly production of cytokines against
Leishmania in animals in an endemic area. METHODOLOGY: Soluble antigen and
recombinant antigens of L. infantum (rLci2-5R-NT-CT and rLci2-NT-CT) were produced and
used in the assay for the stimulation of whole blood of 27 animals from endemic and nonendemic
area for LVC for 24h. Plasma was collected and cytokine production of canine IFN-
γ, IL-2, IL-6, IL-10 and TNF-α cytokines were quantified. RESULTS: Due to technical
some problems, it was not possible to characterize groups of animals susceptible and resistant
in relation to modified QuantiFERON assay results.
OBJECTIVE: In the third chapter, the parasite load and histological aspects in
different regions of the spleen of dogs with CVL were analyzed. METHODOLOGY: The
parasite load and histological changes in the spleen of 6 dogs with CVL were evaluated by
sampling three sections of the spleen (lower, middle and upper section of the organ).
RESULTS: There was a variation in parasitic load distribution in the spleen of the same
animal. Histological evaluations (disorganized white pulp, granulomas, periesplenite, plasma
cells, and polymorphonuclear infiltration) showed a variation in the frequency (granulomas)
or intensity (perisplenite) in spleen in 2 of 6 dogs. CONCLUSION: Therefore, the
distribution of the parasitic load and histological changes in dogs spleen with VL show a
certain degree of heterogeneity.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/14575 |
| Date | January 2016 |
| Creators | Bagues, Naiara Carvalho Teixeira |
| Contributors | Pinheiro, Cristiane Garboggini M. de, Oliveira, Ricardo Riccio, Carvalho, Lucas Pedreira de, Cardillo, Fabíola, Oliveira, Geraldo Gileno de Sá |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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