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Previous issue date: 2009 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / O objetivo do presente trabalho foi inicialmente extrair e purificar o polissacarídeo
fucana proveniente do Sargassum cymosum e utilizá-lo como agente de direcionamento de
nanopartículas para macrófagos. A caracterização do material extraído e purificado foi
efetuada utilizando análise elementar, espectroscopia de infravermelho (IV), ressonância
magnética nuclear de hidrogênio (RMN H1) e análise térmica e a determinação da massa
molecular foi efetuada por cromatografia de permeação em gel. Em seguida, o material obtido
foi utilizado na preparação das novas nanopartículas de Poli(cianoacrilato de isobutila)
revestidas de fucana (FC-PIBCA-NP). As nanopartículas foram obtidas através da
polimerização por emulsão aniônica (AEP) e polimerização por radicais redox (RREP)
utilizando mistura de dextrana e fucana em diferentes proporções. As nanopartículas foram
caracterizadas através do tamanho, potencial zeta, morfologia e estabilidade a longo prazo.
Nanopartículas estáveis foram obtidas com até 100% de fucana pelo método AEP. Por outro
lado, suspensões estáveis de nanopartículas foram obtidas com no máximo 25% de fucana por
RREP. As suspensões obtidas com porcentagem mais elevadas de fucana não permaneceram
estáveis. O potencial zeta das nanopartículas diminuiu com o aumento da quantidade de
fucana, alcançando o valor de 44 mV para as nanopartículas preparadas por AEP com 100%
de fucana. Estes resultados indicam que a fucana permanece localizada na superfície das
nanopartículas. A análise morfológica por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e
microscopia eletrônica de transmissão (MET) mostrou nanopartículas com forma esférica. A
estrutura interna das nanopartículas do tipo núcleo-coroa foi mostrada claramente por análise
MET o que está de acordo com os resultados do potencial zeta que sugerem a localização do
polissacarídeo na superfície das nanopartículas. As interações das nanopartículas com a
linhagem celular de macrófagos J774 e com fibroblastos NIH-3T3 foram investigadas pela
avaliação da citotoxicidade e pela observação da captura celular por microscopia confocal de
fluorescência. As nanopartículas preparadas pelo método AEP mostraram uma maior
citotoxicidade em macrófagos. Por exemplo, as nanopartículas obtidas pelo método AEP
contendo 25% de fucana mostraram-se 3 vezes mais citotóxicas em macrófagos J774
comparadas às nanopartículas RREP (IC50 = 4 ± 2μg/mL e IC50 11 ± 3μg/mL,
respectivamente). As observações efetuadas por microscopia confocal de fluorescência para
avaliar a captura e a distribuição das nanopartículas nas células não permitiram explicar o
aumento da citotoxicidade das nanopartículas obtidas pelo método AEP nos macrófagos. Todos os tipos de nanopartículas foram encontradas nos dois tipos de células, demonstrando
que elas podem ser capturadas independentemente pelos macrófagos e fibroblastos. As
diferenças na aparência da fluorescência no interior das células, i.e., pontual ou difusa,
sugerem que as nanopartículas penetraram nas células por mecanismos distintos. No entanto,
nenhuma correlação pode ser estabelecida entre o tipo de nanopartículas (AEP ou RREP) e o
teor de fucana. As nanopartículas foram administradas em ratos por via oral com objetivo de
investigar se elas poderiam ser direcionadas para os macrófagos do tecido linfóide intestinal.
As propriedades bioadesivas e localização no tecido intestinal das nanopartículas
fluorescentes foram investigadas por microscopia de fluorescência. Somente as nanopartículas
revestidas com fucana obtidas pelo método RREP apresentaram uma redução na bioadesão
comparada aos outros tipos de nanopartículas. A análise por microscopia de fluorescência
revelou que as nanopartículas foram principalmente encontradas associadas ao muco residual.
Apenas uma pequena quantidade de nanopartículas pôde ser visualizada na superfície das
células epiteliais, do lado da luz intestinal onde estão localizadas as vilosidades e as placas de
Peyer. Esses resultados sugerem a retenção das nanopartículas no muco e que uma pequena
quantidade de nanopartículas chega à superfície do epitélio para ser eventualmente capturada
pelos macrófagos. Embora o presente trabalho tenha permitido realizar a extração da fucana e
a preparação de nanopartículas de PIBCA revestidas com fucana, não foi capaz, no entanto,
de demonstrar que as novas nanopartículas podem ser utilizadas para aumentar a
especificidade e direcionamento para macrófagos. Experimentos complementares serão,
portanto, necessários para melhor compreender a origem da citotoxicidade das nanopartículas
obtidas pelo método AEP em macrófagos J774. Além do mais, para o direcionamento das
nanopartículas para macrófagos presentes em mucosas, as propriedades bioadesivas precisam
ser ajustadas com vistas a reduzir a retenção pelo muco e de permitir um maior alcance na
quantidade de nanopartículas a atingir a superfície das células epiteliais
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/1322 |
| Date | 31 January 2009 |
| Creators | LIRA, Mariane Cajubá de Britto |
| Contributors | MAGALHÃES, Nereide Stela Santos |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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