CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A coccidioidomicose à uma infecÃÃo sistÃmica causada pelos fungos dimÃrficos Coccidioides immitis e C. posadasii. A doenÃa acomete o homem e uma grande variedade de animais, sendo endÃmica no Estado do CearÃ, onde à causada pela espÃcie C. posadasii. O presente estudo buscou analisar as caracterÃsticas fenotÃpicas de C. posadasii e desenvolver mÃtodos independentes de cultivo para o diagnÃstico laboratorial da coccidioidomicose. O estudo fenotÃpico de 10 cepas (7 isolados clÃnicos e 3 isolados ambientais) foi conduzido por anÃlises macro e micromorfolÃgica, anÃlise da cinÃtica de crescimento frente a estresse salino, tÃrmico e de pH; testes de assimilaÃÃo de fontes de carbono e nitrogÃnio e determinaÃÃo do perfil de sensibilidade frente a antimicrobianos. Adicionalmente, foram avaliados mÃtodos de extraÃÃo de antÃgenos de cepas locais de C. posadasii e amplificaÃÃo de seqÃÃncias genÃticas exclusivas do fungo em escarro. Foram observadas trÃs variaÃÃes morfolÃgicas das cepas de C. posadasii cultivadas em Ãgar batata, Ãgar Sabouraud dextrose a 2% e Ãgar YEG. Com relaÃÃo a micromorfologia, foi detectado que a quantificaÃÃo de artroconÃdios estava relacionada à idade e a morfologia das colÃnias. A avaliaÃÃo da cinÃtica de crescimento das cepas, in vitro, revelou que as cepas de C. posadasii sÃo inibidas por elevada concentraÃÃo salina e temperaturas acima de 40 C, mas nÃo sofrem influÃncia quanto à variaÃÃo de pH do meio. A anÃlise nutricional demonstrou que vÃrios compostos, inclusive os Ãons oxidados nitrito e nitrato, podem ser utilizados como fontes de carbono e/ou nitrogÃnio. Todas as cepas de C. posadasii foram sensÃveis Ãs drogas antifÃngicas anfotericina B, caspofungina e aos derivados azÃlicos cetononazol, itraconazol, fluconazol e voriconazol. Foi observado que, a exceÃÃo da pirazinamida, todos as demais drogas antituberculose alteraram o crescimento das cepas de C. posadasii in vitro. CombinaÃÃes formadas pelos quimioterÃpicos antituberculose tambÃm mostraram efeito inibitÃrio sobre o crescimento das cepas. Os protocolos experimentais culminaram com uma preparaÃÃo antigÃnica estÃvel e imunoreativa, adequada para utilizaÃÃo em testes sorolÃgicos presuntivos para diagnÃstico da coccidioidomicose. A identificaÃÃo molecular de C. posadasii foi realizada, com sucesso, a partir da amplificaÃÃo da seqÃÃncia do gene pra diretamente de culturas filamentosas e escarro contendo estruturas parasitÃrias do fungo. Acredita-se que as caracterÃsticas fenotÃpicas descritas para as cepas de C. posadasii poderÃo auxiliar estudos futuros que objetivem a individualizaÃÃo biolÃgica das espÃcies C. immitis e C. posadasii. Os resultados desse estudo contribuÃram para o estabelecimento de estratÃgias para o maior conhecimento da coccidioidomicose no Brasil / Coccidiodomycosis is a systemic infection caused by the dimorphic fungi species Coccidioides immitis and C. posadasii. The disease affects both humans and animals, and is considered endemic in the semiarid areas of Cearà State (Northeast Brazil), where it is caused by C. posadasii. The aims of this study were to analyse the phenotypical characteristics of C. posadasii and to develop culture independent methods for improving of the laboratorial diagnosis of coccidioidomycosis. The phenotypical study was conducted with 10 strains (7 from clinical and 3 from ambiental sources) by macro and micromorphology analyses; in vitro growth under different conditions of salinity, temperature and pH; nutritional analysis and antimicrobial susceptibility tests. In addition, methods of antigens extraction and amplification of C. posadasii DNA directly in sputum were also tested. The mycological analysis showed three morphological variations of C. posadasii strains cultivated in potato agar, Sabouraud agar and YEG agar. Regarding to micromorphology, it was observed that arthroconidia counts were related to colony aging and texture. Growth rates of C. posadasii strains were inhibited by high salt concentrations, temperatures above 40 C, but were not affected by the range of pH. Nutritional analyses showed that several compounds, including the oxidized ions, nitrite and nitrate, were efficiently metabolized by C. posadasii strains as carbon and/ or nitrogen sources. The antifungal susceptibility analysis showed that all of the strains of C. posadasii were sensitive to amphotericin B, caspofungin and the azoles ketoconazole, itraconazole, fluconazole, and voriconazole. With the exception of pyrazinamide, all of the tested drugs interfered with the in vitro growth of C. posadasii. Combined antituberculosis drugs also inhibit fungal growth in vitro. Experimental protocols produced a stable and immunoreactive antigen, suitable in presumptive serologic tests for the diagnosis of coccidioidomycosis. Molecular identification of C. posadasii was achieved by PCR amplification of the specific pra gene directly from filamentous cultures and sputum with fungal parasitic structures. The data obtained by phenotypical analyses may be useful in future studies for biological distinction of C. immitis and C. posadasii species. The results of this study provided approaches for a better understanding of coccidioidomycosis in Brazil
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:557 |
| Date | 06 October 2006 |
| Creators | Rossana de Aguiar Cordeiro |
| Contributors | Josà JÃlio Costa Sidrim, Raimunda MagalhÃes da Silva, Zoilo Pires de Camargo, Bodo Wanke |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em CiÃncias MÃdicas, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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