Calcium ions are one of the most versatile signalling molecules. They are essential tothe proper functioning of various cellular processes in many different types of cells.The calcium signals have been studied in the past using ratiometric dyes like Fura-2.We showed that the genetically encoded calcium indicator GCaMP6m displays highersignal to noise ratio than Fura Red and therefore used it to study the calcium cytosolicconcentration in MDCK II cells. We use fluorescence microscopy to record and Pythonto analyse calcium signals in individual cells. Cellpose was used for automating thesegmentation. The cells were treated with ouabain, a cardiotonic steroid shown toincrease the intercellular communication between cells through gap junctions. Thecells were also transfected with connexins 43. We showed that ouabain does nothave an impact on the number of calcium peaks. We observed higher correlationsin the calcium between adjaçent transfected cells, but the results are not statisticallysignificant. We also observed clearly defined oscillations in one low confluencerecording with a period of around two minutes. / Kalciumjonen är en av de mest mångsidiga signalmolekylerna. De är nödvändiga förfunktionen av diverse cellulära processer i mångaolika typer av celler. I projektet studerades den cytosoliska kalciumkoncentrationeni MDCK II-celler. Fluorescensmikroskopi användes för att registrera, och Python föratt analysera, kalciumsignaler i enskilda celler. Cellpose användes för att automatiserasegmenteringen. Cellerna behandlades med ouabain, en kardiotonisk steroid somvisat sig öka den intercellulära kommunikationen mellan celler genom ”gap junctions”.Cellerna transfekterades också med connexin-43. Det påvisades att ouabain intehar någon inverkan på antalet kalciumtoppar. Högre korrelationer observeradesi kalcium mellan intilliggande celler som transfekterats, men resultaten är intestatistiskt relevanta. Tydligt definierade oscillationer observerades i en inspelning medlåg konfluens i en period på cirka två minuter. Slutligen visades att GCaMP6m har etthögre signal-brusförhållande än Fura Red.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:kth-329845 |
| Date | January 2023 |
| Creators | Latron, Emma |
| Publisher | KTH, Tillämpad fysik |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | English |
| Detected Language | English |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | TRITA-SCI-GRU ; 2023:125 |
Page generated in 0.0024 seconds