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Previous issue date: 2015-05-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The Amazon species Duroia macrophylla Huber (Rubiaceae) produces triterpenes and alkaloids with activity against Mycobacterium tuberculosis and an indole alkaloid active against tumoral cell lines. Previous studies showed that different plant extracts had difference on the chemical composition. So, the present study aim to assess the seasonal production of secondary metabolites in Duroia macrophylla extracts, in two specimens for one year. Also, callus in vitro were obtained for phytochemical extraction and secondary metabolites production analysis. For the two plants phytochemical analysis, leaves were collected monthly from April/2013 to March/2014. Plant material was grounded and extracted with hexane and methanol, with ultrasound bath. The concentrated extracts were analyzed by thin layer chromatography (TLC) and 1H-nuclear magnetic resonance (1H-NMR). The NMR spectra were compared by principal component analysis (PCA). The in vitro tissue cultures were established from young leaves with 50% of asepsis after several assays and with different immersion times of the chemical reagents: 70% etanol, 2% sodium hypochlorite and biocide solution. In vitro explants were induced to callus formation process by adding the growth regulators kinetin and 2,4-D, on Murashige & Skoog media, and then extracted with hexane and methanol. The production of secondary metabolites was analysed by TLC and 1H-NMR. All hexane and methanol extracts of two Duroia macrophylla individuals showed evidence of the presence of alkaloids and terpenes during a year. The PCA analysis showed seasonal variation on the chemical composition of the hexane extracts of Duroia macrophylla’s leaves, where the production of alkaloids increased during the rainy season. Regarding the methanol extracts of the leaves, the extract from November showed a lower alkaloid content. Being November the flowering species period, we can infer that the plant is redirecting its biosynthetic route for the production of less polar indole alkaloids or other metabolites. D. macrophylla callus extracts showed terpenes but not alkaloids production, and showed no antioxidant, toxic and antibacterial activities in the performed assays. / A espécie amazônica Duroia macrophylla Huber (Rubiaceae) é produtora de triterpenos e alcaloides com atividades sobre Mycobacterium tuberculosis e um alcaloide com atividade tumoral. Entretanto, coletas realizadas em épocas diferentes mostraram diferença na composição química de diferentes indivíduos. Assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a sazonalidade da produção de metabólitos secundários em extratos de Duroia macrophylla, durante um ano, em dois espécimes. Também foram obtidos calos in vitro da espécie para extrações fitoquímicas e análise da produção dos metabólitos secundários. Para as análises fitoquímicas dos dois indivíduos foram utilizadas folhas coletadas mensalmente de abril/2013 a março/2014. O material vegetal foi submetido à extração com hexano e metanol, em banho de ultrassom. Os extratos foram concentrados e posteriormente analisados por cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC) e ressonância magnética nuclear (RMN) de 1H. Os espectros foram comparados por meio de uma análise de componentes principais. As culturas de tecidos in vitro foram estabelecidas com 50% de assepsia, após vários testes, a partir de explantes provindos de folhas jovens e com diferentes tempos de imersão dos reagentes químicos: etanol 70%, hipoclorito de sódio 2% e solução biocida. Depois de estabelecidos, os explantes in vitro foram induzidos ao processo de calogênese através da adição dos reguladores de crescimento cinetina e 2,4-D, em meio Murashige & Skoog. Os calos foram posteriormente extraídos com hexano e metanol e a produção dos metabólitos secundários foi avaliada por análise em CCDC e RMN de 1H. Os extratos hexânicos e extratos metanólicos obtidos dos dois indivíduos de Duroia macrophylla apresentaram indícios da presença de alcaloides e terpenos em todos os meses, durante um ano. A análise de componentes principais demonstrou que há uma variação sazonal na composição química dos extratos hexânicos de folhas de Duroia macrophylla, onde o teor de alcaloides indólicos foi maior na época mais chuvosa. Nos extratos metanólicos das folhas, o mês de novembro apresentou teores significativamente menores de alcaloides indólicos em relação aos outros meses, para os dois indivíduos estudados. Sendo o mês de novembro a época de floração da espécie, pode-se inferir que a planta está redirecionando a sua rota biossintética para a produção de alcaloides indólicos menos polares e também para a produção de outros metabólitos. Os extratos dos calos de D. macrophylla apresentaram terpenos, mas não alcaloides, e não apresentaram atividades antioxidante, tóxica e antibacteriana nos ensaios realizados.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:tede/1989 |
| Date | 26 May 2015 |
| Creators | Zanca, Sabrina Schumacker |
| Contributors | Nunez, Cecilia Veronica |
| Publisher | Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia, Ciências Biológicas (Botânica), INPA, Brasil, Coordenação de Pós Graduação (COPG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações do INPA, instname:Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia, instacron:INPA |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -4946571689165666571, 600, 600, 600, 600, 3806999977129213183, -7397920248419280716, -2555911436985713659 |
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