Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1
dissertacao_carolina_felix.pdf: 7826200 bytes, checksum: 4432d1e031f9b3b4bdbc3946dbb901e0 (MD5)
Previous issue date: 2013-08-28 / Transport proteins related to drug efflux play an important role not only in the acquisition of drug-resistant phenotypes, but also in virulence of M. tuberculosis. The main objective of this study was to analyze the regulation of genes encoding the
protein Rv1258c Tap considering the expression of genes Rv1255c and Rv1257c. RNA was extracted from cultures of M. bovis BCG overexpressing Rv1255c and Rv1257c, as well as a control strain containing the vector pVV16, and qRT-PCR of
the Rv1258c gene was performed. RT-PCR was performed using RNA isolated previously from M. tuberculosis CDC1551, in order to verify that Rv1255c, Rv1256c, Rv1257c and Rv1258c genes are all connected to a transcript. The strain M. bovis
BCG, expressing a red fluorescent protein under control of the promoter Rv1258c (pVVTapPro) was grown in the presence of streptomycin and glycine to verify the induction of the promoter. The qRT-PCR showed a downregulation of the gene in the strain overexpressing Rv1258c and Rv1257c, but no difference was observed in the strain overexpressing Rv1255c compared with the control. An increase in fluorescence was observed in the strain containing the promoter of the tap in the presence of 1 mg/L of streptomycin in comparison with the control. A two-fold induction of gene Tap was also observed in the presence of 1.6 mM glycine. The results suggest a role for Rv1257c in the regulation Tap expression. Moreover, the
induction of Tap by streptomycin supports the importance of this protein in multidrugresistant M. tuberculosis. The effect of glycine on Tap promoter suggest a physiological role in cellular detoxification for this efflux pump. In conclusion, this study reinforces the need to obtain a deeper knowledge about the Tap protein operon and its regulation, in order to assist in the development of inhibitors of this efflux pump and possibly other mechanisms of induced resistance. / Proteínas transportadoras relacionada ao efluxo de drogas desempenham um papel importante não só na aquisição de fenótipos resistentes aos fármacos, mas também na virulência de M. tuberculosis. O principal objetivo deste estudo foi analisar a regulação do gene Rv1258c codificador da proteína Tap considerando a expressão dos genes Rv1255c e Rv1257c. RNA foi extraído a partir de culturas de M. bovis BCG superexpressando Rv1255c e Rv1257c, bem como de uma cepa controle contendo o vector pVV16 realizando o qRT-PCR do gene Rv1258c. RT-PCR foi realizada com RNA previamente isolado de M. tuberculosis CDC1551, a fim de verificar se o Rv1255c, Rv1256c, Rv1257c e Rv1258c genes estão todos ligados em um transcrito. A cepa M. bovis BCG, expressando uma proteína fluorescente vermelha sob o controle do promotor do Rv1258c (pVVTapPro) foi cultivado na presença de estreptomicina e glicina para verificar a indução deste promotor. O qRT-PCR demonstrou uma regulação negativa do gene Rv1258c na cepa sobre expressando Rv1257c, mas não foi observada diferença na cepa sobre expressando Rv1255c em comparação com o controle. Um aumento de
fluorescência foi observada na cepa contendo o promotor da Tap na presença de 1 mg/L de estreptomicina, em comparação com o controle. Uma indução de duas vezes do gene Tap foi também observada na presença de glicina 1,6 mM. Os
resultados sugerem um papel para o gene Rv1257c na regulação da expressão Tap. Além disso, a indução da Tap por estreptomicina apoia a importância desta proteína na multidroga-resistência de M. tuberculosis. O efeito da glicina no promotor da Tap sugere um papel fisiológico de detoxificação celular para essa bomba de efluxo. Em conclusão este estudo reforça a necessidade de se obter um
conhecimento mais aprofundado a respeito do operon da proteína Tap e sua regulação, de maneira a auxiliar no desenvolvimento de inibidores dessa bomba de efluxo e possivelmente de outros mecanismos de resistência induzida.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:123456789/1222 |
| Date | 28 August 2013 |
| Creators | Felix, Carolina Rodrigues |
| Contributors | CPF:35618612020, http://lattes.cnpq.br/4577337828511155, Dellagostin, Odir Antônio, Silva, Pedro Eduardo Almeida da |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFPel, BR, Biotecnologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0015 seconds