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Previous issue date: 2016-11-21 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Escherichia coli (EPEC) was frequent cause of many cases of diarrhea in Brazil and
around the world, and one of the main agents responsible for high mortality rates among
children aged 0-5 years. EPEC is known to cause histological damage to the microvilli of
enterocytes, characterized by the formation of a shaped support ultrastructure. One of the
factors responsible for pathogenicity is complex BFP (bundle forming pili). The presence of
genes BfpA promotes adhesion and consequently the injury of EPEC strains characterized
as typical. Differently, some EPEC strains lack EAF (EPECBfpA-) causing lesions shaped as
pedestal, but more slowly, called atypical EPEC. BfpA is known as immunogenic and
recently the incidence of atypical (EPECBfpA-) is increasing, it is believed that these bacteria
injury occurs through other means making it important to develop strategies for identifying.
In this study several predicted peptide sequences were synthesized, to produce polyclonal
antibodies and anti-EPEC -BfpA in BALB / c antibodies that are used to target specific
identification of typical and atypical EPEC. To achieve the objectives of bioinformatics
tools and prediction of protein epitopes immuneepitope B were used for antigenic regions
specific mapping for the EPEC two phenotypes. Synthetic peptides were purchased to
immunize Balb / C mice, so the antisera are evaluated for specificity EPEC. As results,
it was possible to construct and synthetize six linear BfpA peptides (P1-P6). P6 peptide was
selected as the product of this study due to its ability to induce the antibodies production
against this protein and this serum recognize the native protein in typical EPEC strains. We
believe that the functional characterization of these antibodies by developing new tools will
help in the diagnosis of these two specific strains of EPEC and will contribute to studies
involving these bacteria. / A Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) tem sido causa frequente de muitos
casos de diarreia no Brasil e no mundo, além de ser um dos principais agentes responsáveis
pelas taxas de mortalidade entre as crianças de 0 a 5 anos de idade. A EPEC causa uma
lesão histológica nas microvilosidades dos enterócitos caracterizada pela formação de uma
ultraestrutura em forma de pedestal. Um dos fatores de patogenicidade responsável é o
complexo BfpA (bundle forming pili). A BfpA promove a adesão das cepas de EPEC
denominadas como típicas. Diferentemente, algumas cepas de EPEC são desprovidas do
Fator de Aderência de Escherichia coli -EAF (EPECBfpA-) e tendem a provocar as lesões
típicas de pedestal com mais lentidão e por isso são denominadas EPEC atípicas. Como a
BfpA é uma proteína imunogênica e recentemente a incidência de EPECBfpA- atípicas vem
aumentando, acredita-se que a lesão por estas bactérias ocorra por outras vias tornando
importante o desenvolvimento de estratégias para sua identificação. Neste estudo várias
sequências antigenicamente preditas foram usadas para sintetizar peptídeos a fim de
produzir anticorpos policlonais anti-BfpA em camundongos BALB/c visando a
identificação específica da EPEC típica. Para alcançar os objetivos, inicialmente
ferramentas de bioinformática de proteínas e de predição de epítopos B foram utilizadas
para mapeamento de regiões antigênicas específicas para EPEC. Peptídeos sintéticos foram
adquiridos para a imunização de camundongos Balb/c, afim de que antissoros fossem
avaliados quanto a especificidade à EPEC. Como resultados foi possível a construção e
síntese de seis peptídeos lineares de BfpA (P1-P6). O peptídeo P6 foi selecionado como
produto deste estudo devido a habilidade de induzir a produção de anticorpos contra esta
proteína e este soro reconhecer a proteína nativa em cepas de EPEC típica. Acredita-se que
a caracterização funcional destes anticorpos permita o desenvolvimento de ferramentas para
o diagnóstico específico das duas linhagens de EPEC visando a contribuição para estudos
futuros sobre o controle do processo fisiopatológico no intestino.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/5940 |
| Date | 21 November 2016 |
| Creators | Silva, Andréia Ferreira da, 92-99330-4221 |
| Contributors | ppgbiotec@ufam.edu.br, Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi, Mariúba, Luis André Morais |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFAM, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/embargoedAccess |
| Relation | 32215883775770440, 600, 500, 1984485651082134923 |
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