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Adição de plasma seminal heterólogo como estratégia para aumentar a fertilidade do sêmen ovino congelado / Addition of heterologous seminal plasm as a strategy to inverse the frozen ovine semen fertility

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Previous issue date: 2009-01-19 / O uso de sêmen congelado é um pré-requisito para maximizar o ganho genético
oriundo da IA em ovinos. Muito embora a IA com sêmen fresco ou resfriado esteja
consolidada, com sêmen congelado os resultados são inconsistentes. O uso de plasma
seminal (PS) já foi demonstrado como eficaz na proteção e reversão de parte dos danos
celulares causados pela criopreservação. Entretanto, o pequeno volume do ejaculado e o
risco de transmissão de doenças espécie-específicas são limitações importantes nos
ovinos. Uma alternativa a ser considerada é o uso de PS heterólogo, que pela escassez de
informações disponíveis, justificam a execução deste estudo, cujos objetivos foram: (a)
determinar a capacidade do PS eqüino (PSE) e bovino (PSB) em preservar a viabilidade
do sêmen ovino descongelado, comparando-os com o PS ovino (PSO); (b) avaliar o perfil
eletroforético das proteínas presentes no PSO, PSE e PSB, e adicionalmente; c)
quantificar e comparar o nível de fragmentação do DNA de espermatozóides incubados
ou não com PSO, PSE ou PSB. Para tanto, três experimentos foram conduzidos, sendo:
Experimento 1: Sêmen descongelado diluído em meio sem PS (SPS) ou contendo 25%
de PSO, PSE ou PSB, com exposição por um período de 5 min ou 6 h. Avaliou-se a
motilidade, integridade de membrana plasmática e proporção de espermatozóides vivos.
No Experimento 2 avaliou-se a concentração protéica total encontrada no PSO, PSE e
PSB, bem como o perfil eletroforético das proteínas presentes, mediante SDS-PAGE. No
Experimento 3 foi validada uma técnica para a avaliação da integridade do DNA
espermático (Neutral Comet Assay - NCA), procedendo-se a avaliação de todos os
tratamentos testados nos experimentos anteriores, além dos tratamentos: sêmen
descongelado (SD), sêmen fresco (SF) e um controle positivo (CP). Adicionalmente foi
avaliado o efeito da técnica de seleção espermática swim up sobre os achados de
fragmentação de DNA pelo NCA. A análise estatística foi realizada com o pacote do
SAS ou do Minitab, com nível de significância de 5%. Como resultados, observou-se que
a exposição por 5 min. em PSO, PSE ou PSB teve efeito benéfico sobre os parâmetros de
viabilidade avaliados. A incubação por 6 h reduziu (P<0,05) a motilidade espermática
nos tratamentos PSE e PSO, em relação ao SPS e PSB. A integridade de membrana
plasmática não foi afetada pelo tratamento. A concentração protéica total no PSO, PSE e
PSB foi 16,8, 3,0 e 25,0 &#956;g/&#956;L, respectivamente. O PSO e PSB demonstraram padrões
eletroforéticos semelhantes, enquanto o PSE apresentou um perfil distinto. A menor
viii
fragmentação de DNA com 1 h de incubação foi obtida com o grupo SF, não havendo
diferença entre os demais grupos. Com 6 h de incubação, os grupos SPS (63%) e SD
(70%) demonstraram maior fragmentação que o tratamento SF (50%), não havendo
diferenças entre os tratamentos PSO (60%), PSE (52%) e PSB (55%). Não foi observado
efeito da técnica de seleção swim up na fragmentação do DNA, avaliada pelo NCA.
Conclui-se que o PS heterólogo pode ser utilizado em substituição ao PSO, mesmo
apresentando perfil protéico distinto. Entretanto, a viabilidade espermática foi
influenciada pelo tempo de incubação. Em adição, as modificações adotadas no método
Neutral Comet Assay possibilitaram sua validação para o sêmen ovino. Por final, o
sêmen ovino apresenta uma elevada taxa de fragmentação de DNA, que não difere entre
os espermatozóides selecionados ou não pelo método swim up

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.udesc.br #179.97.105.11:handle/804
Date19 January 2009
CreatorsMartins, Leonardo Tondello
ContributorsMezzalira, Alceu
PublisherUniversidade do Estado de Santa Catarina, Mestrado em Ciência Animal, UDESC, BR, Ciências Veterinárias
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguagePortuguese
Detected LanguagePortuguese
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis
Formatapplication/pdf
Sourcereponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UDESC, instname:Universidade do Estado de Santa Catarina, instacron:UDESC
Rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess

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