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Previous issue date: 2009-01-19 / O uso de sêmen congelado é um pré-requisito para maximizar o ganho genético
oriundo da IA em ovinos. Muito embora a IA com sêmen fresco ou resfriado esteja
consolidada, com sêmen congelado os resultados são inconsistentes. O uso de plasma
seminal (PS) já foi demonstrado como eficaz na proteção e reversão de parte dos danos
celulares causados pela criopreservação. Entretanto, o pequeno volume do ejaculado e o
risco de transmissão de doenças espécie-específicas são limitações importantes nos
ovinos. Uma alternativa a ser considerada é o uso de PS heterólogo, que pela escassez de
informações disponíveis, justificam a execução deste estudo, cujos objetivos foram: (a)
determinar a capacidade do PS eqüino (PSE) e bovino (PSB) em preservar a viabilidade
do sêmen ovino descongelado, comparando-os com o PS ovino (PSO); (b) avaliar o perfil
eletroforético das proteínas presentes no PSO, PSE e PSB, e adicionalmente; c)
quantificar e comparar o nível de fragmentação do DNA de espermatozóides incubados
ou não com PSO, PSE ou PSB. Para tanto, três experimentos foram conduzidos, sendo:
Experimento 1: Sêmen descongelado diluído em meio sem PS (SPS) ou contendo 25%
de PSO, PSE ou PSB, com exposição por um período de 5 min ou 6 h. Avaliou-se a
motilidade, integridade de membrana plasmática e proporção de espermatozóides vivos.
No Experimento 2 avaliou-se a concentração protéica total encontrada no PSO, PSE e
PSB, bem como o perfil eletroforético das proteínas presentes, mediante SDS-PAGE. No
Experimento 3 foi validada uma técnica para a avaliação da integridade do DNA
espermático (Neutral Comet Assay - NCA), procedendo-se a avaliação de todos os
tratamentos testados nos experimentos anteriores, além dos tratamentos: sêmen
descongelado (SD), sêmen fresco (SF) e um controle positivo (CP). Adicionalmente foi
avaliado o efeito da técnica de seleção espermática swim up sobre os achados de
fragmentação de DNA pelo NCA. A análise estatística foi realizada com o pacote do
SAS ou do Minitab, com nível de significância de 5%. Como resultados, observou-se que
a exposição por 5 min. em PSO, PSE ou PSB teve efeito benéfico sobre os parâmetros de
viabilidade avaliados. A incubação por 6 h reduziu (P<0,05) a motilidade espermática
nos tratamentos PSE e PSO, em relação ao SPS e PSB. A integridade de membrana
plasmática não foi afetada pelo tratamento. A concentração protéica total no PSO, PSE e
PSB foi 16,8, 3,0 e 25,0 μg/μL, respectivamente. O PSO e PSB demonstraram padrões
eletroforéticos semelhantes, enquanto o PSE apresentou um perfil distinto. A menor
viii
fragmentação de DNA com 1 h de incubação foi obtida com o grupo SF, não havendo
diferença entre os demais grupos. Com 6 h de incubação, os grupos SPS (63%) e SD
(70%) demonstraram maior fragmentação que o tratamento SF (50%), não havendo
diferenças entre os tratamentos PSO (60%), PSE (52%) e PSB (55%). Não foi observado
efeito da técnica de seleção swim up na fragmentação do DNA, avaliada pelo NCA.
Conclui-se que o PS heterólogo pode ser utilizado em substituição ao PSO, mesmo
apresentando perfil protéico distinto. Entretanto, a viabilidade espermática foi
influenciada pelo tempo de incubação. Em adição, as modificações adotadas no método
Neutral Comet Assay possibilitaram sua validação para o sêmen ovino. Por final, o
sêmen ovino apresenta uma elevada taxa de fragmentação de DNA, que não difere entre
os espermatozóides selecionados ou não pelo método swim up
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.udesc.br #179.97.105.11:handle/804 |
| Date | 19 January 2009 |
| Creators | Martins, Leonardo Tondello |
| Contributors | Mezzalira, Alceu |
| Publisher | Universidade do Estado de Santa Catarina, Mestrado em Ciência Animal, UDESC, BR, Ciências Veterinárias |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UDESC, instname:Universidade do Estado de Santa Catarina, instacron:UDESC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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