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Previous issue date: 2016-07-06 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Fungi genus Pestalotiopsis can be found as parasites or endophytes, being quite disseminated to
the various habitats. Bioprospecting of Pestalotiopsis spp. have demonstrated the potential of
this strains in obtaining bioactive compounds as anticancer or antimicrobial, that due the
diversity of secondary metabolites are capable of producing. At work we have expanded
knowledge about genomics, proteomics and metabolomics Pestalotiopsis strains isolated from
Amazonian environments. They were reactivated 33 Pestalotiopsis strains of LaBMicra
collection of the Federal University of Amazonas - UFAM. Were evaluated about their
morphological diversity (conidia structure), genetic (Its1 and Its2 / AFLP), protein (SDS-PAGE)
and they secondary metabolites were evaluated for chemical profile obtained by mass
spectrometry (APCI-MS ). Secondary metabolites were tested against tumor cells SKMEL-19,
CAL-27, ACP02 and against strain of C. albicans CFAM - 1342, associating the results with
yours metabolomic profile. The most promising strain was subjected to mutagenesis by UV
(UVC) light induction. The 33 strains of Pestalotiopsis spp. were isolated from nine plant genera
as Euterpe sp., Gustavia spp., Myrcia sp. Duguetia sp., Rollinia sp., Arrabidaea sp. Victoria sp.,
Pinus sp., and associated Basidiomycetes. The most representative species were P. mangiferae,
P. microspora and P. clavispora with eight, seven and six strain respectively. The extracts did
not showed promising results against any of the tumor cells and nine extracts showed activity
against C. Albicans. The chemical profile assessed over 60 days showed that the strain P.
microspora (P12 / AnspCg1.1.3a) isolated of Rollinia sp. initiates the stationary growth phase of
20 days of cultivation, and the cultivation time best for obtaining bioactive compounds is 30
days. The analyzes of the reduction of the carbon source, growth of mycelial mass and the pH of
the fortified protein profile results confirmed that the strain arrive the metabolic apex with 25
days.The production of mutant strains PX was efficient, but the strains did not show anticandida
activity in their extracts. The secreted protein profile was also modified proteins of 50 to 140
kDa being expressed with greater intensity. Through large-scale cultivation was possible positive
evaluation by bioautography and CCDP isolation subfractions which analyzed by 1H and 13C
NMR showed the presence of 3-phenyl-propionic acid molecule known for its ecological role in
protecting the host against plant pathogens. / Fungos do gênero Pestalotiopsis podem ser encontrados como parasitas ou endófitos, sendo
bastante disseminados aos diversos habitats. A bioprospecção de Pestalotiopsis spp. têm
demonstrado o potencial deste gênero na obtenção de compostos bioativos como
anticancerígenos e antimicrobianos, isso por conta da diversidade de metabólitos secundários
que são capazes de produzir. No trabalho ampliou-se o conhecimento a cerca da genômica,
proteômica e metabolômica de linhagens de Pestalotiopsis isolados de ambientes Amazônicos.
Foram reativadas 33 linhagens do gênero Pestalotiopsis da Coleção do LaBMicra da
Universidade Federal do Amazonas - UFAM. Foram avaliadas com relação a sua diversidade
morfológica (estrutura de conídios), genética (Its1 e Its2/AFLP), proteica (SDS-PAGE) e seus
metabólitos secundários foram avaliados através do perfil químico obtido por espectrometria de
massas (APCI-MS). Os metabólitos secundários foram ensaiados frente a células tumorais
SKMEL-19, CAL-27, ACP02 e frente a cepa de C. albicans CFAM – 1342, associando os
resultados ao perfil metabolômico. A linhagem mais promissora foi submetida a mutagênese por
indução de luz ultravioleta (UVC). As 33 linhagens de Pestalotiopsis spp. foram isoladas de
nove gêneros vegetais como Euterpe sp., Gustavia spp., Myrcia sp. Duguetia sp., Rollinia sp.,
Arrabidaea sp. Victoria sp., e Pinus sp., além de associadas a Basidiomycetes. As espécies mais
representativas foram P. mangiferae, P. microspora e P. clavispora, com oito, sete e seis
linhagens respectivamente. Os extratos das linhagens não apresentaram resultado promissor
contra nenhuma das células tumorais e nove extratos apresentaram atividade frente a C. albicans.
O perfil químico avaliado ao longo de 60 dias demonstrou que a linhagem P. microspora (P12/
AnspCg1.1.3a) isolada de Rollinia sp. chega a fase estacionária de crescimento com 20 dias de
cultivo, e que o melhor tempo de cultivo para a obtenção dos compostos bioativos é 30 dias. As
análises da redução da fonte de carbono, crescimento da massa micelial e pH do meio
fortaleceram os resultados do perfil proteico confirmando que a linhagem chega ao ápice
metabólico com 25 dias. A produção de linhagens PX mutantes foi eficiente, mas as linhagens
não apresentaram atividade anticandida em seus extratos. O perfil de proteínas secretadas
também foi modificado com proteínas de 50 a 140kDa sendo expressas com maior intensidade.
Através do cultivo em larga escala foi possível a avaliação positiva por bioautografia e por
CCDP o isolamento de subfrações que analisadas por RMN de 1H e 13C revelaram a presença do
ácido 3-fenil-propanóico, molécula conhecida por sua função ecológica na proteção da planta
hospedeira contra patógenos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/6065 |
| Date | 06 July 2016 |
| Creators | Banhos, Elissandro Fonseca dos, 93-99160-6499 |
| Contributors | ppgbiotec@ufam.edu.br, Souza, Afonso Duarte Leão de, Souza, Antonia Queiroz Lima de |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Amazônia Legal - BIONORTE, UFAM, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 1984485651082134923, 500 |
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