Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Curso de Ciências Farmacêuticas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2015. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2016-03-21T16:12:34Z No. of bitstreams: 1 2015_PedroGoesMesquita_Parcial.pdf: 1129403 bytes, checksum: a14387088014ab4785724b9f6134d718 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-03-22T14:35:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_PedroGoesMesquita_Parcial.pdf: 1129403 bytes, checksum: a14387088014ab4785724b9f6134d718 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T14:35:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_PedroGoesMesquita_Parcial.pdf: 1129403 bytes, checksum: a14387088014ab4785724b9f6134d718 (MD5) / O diabetes mellitus é uma desordem metabólica que acomete milhões de pessoas no Brasil e no mundo. As tiazolidinadionas melhoram a sensibilização à insulina e a homeostase da glicose mediada pela ativação de receptores ativados por proliferadores peroxissomais γ(PPARγ) em indivíduos com diabetes tipo 2. Entretanto, efeitos adversos graves, como perda da massa óssea, retenção de fluidos corporais, problemas no fígado, no coração e aumento no risco de câncer de bexiga estão associados ao seu uso. Apesar de não haver esclarecimento completo do mecanismo relacionado ao efeito adverso, em parte, ele é atribuído à ativação exagerada do receptor. Agonistas parciais de PPARγ são capazes de promover os efeitos positivos das tiazolidinadionas, mas com menor efeito adverso. Estudos prévios mostraram que extratos das folhas da Bauhinia variegata são capazes de ativar o PPARγ e que ligantes de PPAR podem interferir no estresse oxidativo relacionado a espécies reativas do oxigênio. Sabendo que fungos endofíticos são colonizadores dos tecidos de plantas e possuem um metabolismo particularmente ativo por causa dessa interação, levando à produção de produtos naturais com efeitos biológicos importantes e, muitas vezes similares aos da planta hospedeira, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial dos metabólitos de fungos endofíticos isolados das folhas de Bauhinia variegata como fonte de moléculas antioxidantes e agonistas de receptores nucleares PPAR α, β/δ e γ. Sete extratos de culturas dos fungos endofíticos das folhas de Bauhinia variegata foram avaliados. Todos apresentaram atividade antioxidante no ensaio do sequestro do radical superóxido e seis deles foram capazes de inibir a peroxidação lipídica. Um dos extratos apresentou atividade pan-agonista sobre os PPAR e outro mostrou atividade nas isoformas PPARα e PPARβδ. Os extratos não foram capazes de estimular a diferenciação de pré-adipócitos 3T3-L1. O estudo conjunto da atividade agonista a receptores nucleares e da atividade antioxidante caminha na mesma direção dos achados recentes sobre a relação PPAR/espécies reativas do oxigênio nos processos patológicos do diabetes. A melhor compreensão desta relação poderia auxiliar no entendimento do mecanismo de ação dos antioxidantes no tratamento de diabetes e suas complicações. Além disso, novos compostos com ambas as atividades, antioxidante e agonista de PPARγ, poderiam ser bastante úteis no desenvolvimento de novos medicamentos para tratamento do diabetes. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Diabetes mellitus is a metabolic disorder that affects millions of people in Brazil and worldwide. Tiazolidinediones (TZD) improve insulin sensitization and glucose homeostasis mediated by the activation of peroxisome proliferator activated receptors γ (PPARγ) in patients with type 2 diabetes. However, severe adverse effects such as loss of bone mass, retention of body fluids, liver and heart problems and increased risk of bladder cancer are associated with their use. Although there is no complete explanation of the mechanism related to TZD side effects, in part, it is attributed to excessive activation of the receptor. Partial PPARγ agonists are capable of promoting the beneficial effects of tiazolidinediones with less adverse effects. Previous studies have shown that extracts of Bauhinia variegata leaves are able to activate the PPARγ and that PPAR ligands can interfere with the oxidative stress related to reactive oxygen species. Knowing that endophytic fungi colonize plant tissues and have a particularly active metabolism caused by this interaction, which lead to the production of natural products with important biological effects, and usually similar to that of the colonized plant, the objective of this study was to evaluate the potential of the metabolites of endophytic fungi isolated from Bauhinia variegata leaves as source of antioxidant molecules and agonists of nuclear receptors PPAR αβδ and γ. Seven extracts produced by endophytic fungi from Bauhinia variegata leaves were evaluated; all of them showed antioxidant activity by scavenging superoxide radical and six of them were able to inhibit lipid peroxidation. One of extracts tested presented pan-agonist activity on PPAR and another one showed activity in PPARα and PPARβδ. The extracts were not able to stimulate the differentiation of 3T3-L1 pre-adipocytes cells. The complete study involving evaluation of agonism to nuclear receptors and antioxidant activity comply with the recent findings about the PPAR/reactive oxygen species relationship in pathological processes of diabetes. A better understanding of this relationship could help to comprehend the mechanism of action of antioxidants in the treatment of diabetes and its complications. In addition, novel compounds having both activities, antioxidant and PPARγ agonist, could be quite useful in the development of new drugs for diabetes treatment.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-06-13T17:40:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) merged (3).pdf: 2859898 bytes, checksum: 09007e1f478ead6b0273d0459b360222 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T17:40:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) merged (3).pdf: 2859898 bytes, checksum: 09007e1f478ead6b0273d0459b360222 (MD5) Previous issue date: 2015-02-11 / CAPES / A Organização Mundial da Saúde (OMS) estima que até 2030 sejam previstos 27 milhões de casos incidentes de câncer, 17 milhões de mortes por câncer e 75 milhões de pessoas vivas, anualmente, convivendo com esta doença. No Brasil, as estimativas para o ano de 2012, válidas também para o ano de 2013, apontam a ocorrência de aproximadamente 518.510 novos casos de câncer, reforçando a magnitude do problema do câncer no país. Apesar da inserção de novos fármacos na terapia contra o câncer, vários tumores sólidos ainda não dispõem de tratamento adequado. Assim, é necessária a busca de novas alternativas medicamentosas para melhorar a eficácia do tratamento de doenças neoplásicas avançadas. Uma das principais áreas estudadas atualmente no mundo é a pesquisa de novos medicamentos com propriedades antitumorais. Microorganismos endofíticos podem ser entendidos como aqueles que vivem no interior das plantas, habitando, suas partes aéreas, como folhas e caules sem causar aparentemente nenhum dano a seus hospedeiros e conseguem viver nos tecidos internos das plantas e dispõem de uma riqueza bioquímica ainda não muito bem explorada. Os metabólitos secundários são compostos de baixo peso molecular, produzidos por fungos endofíticos em resposta às condições ambientais. Esses compostos apresentam potencial aplicação como os antibióticos. O objetivo do presente estudo foi avaliar seis gêneros da micoteca/URM quanto à produção do taxol. Os gêneros foram cultivados em meio BD (Batata Dextrose) por 72 horas em temperatura ambiente seguida de filtração a vácuo para extração do DNA. As reações de PCR foram realizadas com iniciadores e condições específicas para a amplificação do gene ITS do rDNA. Os produtos do gene ITS rDNA amplificados foram purificados e sequenciados. Os dados obtidos pelo sequenciamento do gene ITS rDNA foram analisados e comparados, pelo programas BLAST. Após a confirmação foram realizadas fermentações, seguidas da extração do metabólito secundário com acetato de etila. Os extratos foram analisados em Cromatografia em Camada Delgada (CCD) que mostrou um resultado satisfatório quando correlacionada a técnica Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC). Dessa forma, se faz necessário uma continuidade desse estudo para otimização do processo de fermentação e extração do produto bioativo. / The World Health Organization estimates that by 2030 are provided 27 million incident cases of cancer, 17 million deaths from cancer and 75 million people alive each year living with this disease. In Brazil, the estimates for the year 2012, also valid for the year 2013 indicate the occurrence of approximately 518,510 new cases of cancer, reinforcing the magnitude of the cancer problem in the country. Despite the inclusion of new drugs in cancer therapy, several solid tumors still lack appropriate treatment. Thus, the search for new medicinal alternative is needed to improve the effectiveness of treatment of advanced malignancies. One of the main areas currently studied in the world is the search for new drugs with antitumor properties. Endophytic microorganisms can be understood as those who live within the plant, dwelling, its aerial parts such as leaves and stems without apparently causing any damage to their hosts and can live in the internal tissues of plants and have a biochemical wealth yet very well traveled. Secondary metabolites are low molecular weight compounds produced by endophytes in response to environmental conditions. These compounds have potential application as antibiotics. The aim of this study was to evaluate six genera of mycology collection / URM for the production of taxol. The genera were cultured in BD (Potato Dextrose) for 72 hours at room temperature followed by vacuum filtration for DNA extraction. PCR reactions were performed with specific primers and conditions for the gene amplification of the rDNA ITS. The STI gene amplified rDNA products were purified and sequenced. The data obtained by sequencing of the ITS rDNA were analyzed and compared by BLAST programs. After confirming fermentations were performed, followed by secondary metabolite extraction with ethyl acetate. The extracts were analyzed by Thin Layer Chromatography, which showed a satisfactory result when correlated Liquid Chromatography Technical High Efficiency. Thus, if a continuation of this study to optimize the process of fermentation and extraction of bioactive product is necessary.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-25T21:35:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Rejane Maria Ferreira da Silva.pdf: 2199357 bytes, checksum: e319199462586680a356da672d1d0799 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-28T18:18:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Rejane Maria Ferreira da Silva.pdf: 2199357 bytes, checksum: e319199462586680a356da672d1d0799 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-28T18:18:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Rejane Maria Ferreira da Silva.pdf: 2199357 bytes, checksum: e319199462586680a356da672d1d0799 (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / CNPq / Os fungos endofíticos são caracterizados por habitarem o interior (intra ou intercelularmente) dos tecidos vegetais, não causando aparentemente nenhum dano a seus hospedeiros. O sorgo (Sorghum bicolor (L.) Moench) é uma gramínea de origem africana, pertencente à família Poaceae. Encontra-se em quinto lugar entre os cereais mais plantados no mundo. Devido a importância dos fungos endofíticos em culturas agronômicas, este trabalho teve por objetivo determinar a diversidade de fungos endofíticos em folhas sadias de S. bicolor nos períodos de pré e pós-floração, em cultivos de Goiana e Serra Talhada, Pernambuco. No laboratório, as folhas foram lavadas com água corrente e sabão neutro, e com auxílio de um furador esterilizado foram feitos discos foliares (6 mm), posteriormente desinfestados em álcool 70% por 30 segundos, em hipoclorito de sódio (NaClO) a 2% por 3 minutos e realizadas duas lavagens com água destilada esterilizada. Os fragmentos foram transferidos para placa de Petri, em triplicata, contendo ágar malte acrescido de cloranfenicol (50 mg L⁻¹), para posterior identificação taxonômica utilizando literatura especializada para análise morfológica dos táxons. Para confirmação dos táxons, o DNA foi extraído, sendo amplificada e sequenciada a região ITS ("internal transcribed spacer") do rDNA. Foram analizados 1728 fragmentos de folhas. Foram isolados 476 espécimes de fungos endofíticos, distribuídos em 40 morfotipos/filotipos. Cochliobolus hawaiiensis, Colletotrichum falcatum e Epicoccum sorghi foram as espécies mais frequentes. Os táxons identificados são pertencentes ao filo Ascomycota (classes Eurotiomycetes, Dothidiomycetes, Sordariomycetes) e subfilo Mucoromycotina (ordem Mucorales). Acremonium borodinense, Arthrinium sp., Cochliobolus hawaiiensis, Engyodontium album, Epicoccum sorghi, Hypoxylon griseobrunneum, Phyllosticta capitalensis, Mucor irregularis, Mucor indicus, Mucor sp., Paraphaeosphaeria sp., Periconia macrospinosa, Purpureocillium lilacinum e Talaromyces apiculatus são citadas pela primeira vez como endofíticos de sorgo. / The endophytic fungi are characterized by inhabiting the interior (intra or intercelularly) of plant tissues, apparently not causing any damage to their hosts. Sorghum (Sorghum bicolor (L.) Moench) is a grass of African origin belonging to the Poaceae family. It lies in fifth place among the most planted grain in the world. Due to the importance of endophytic fungi in agronomic crops, this study aimed to determine the diversity of endophytic fungi in healthy leaves of S. bicolor in periods of pre and post-flowering, collected in Goiana and Serra Talhada, Pernambuco. In the laboratory, the leaves were washed with water and soap, and with the aid of a sterile punch were made leaf discs (6 mm), then disinfected in 70% alcohol for 30 seconds and sodium hypochlorite (NaOCl) 2% for 3 minutes. Two washes with sterile distilled water were performed after disinfection. The fragments were transferred to a petri dish, in triplicate, containing malt agar plus chloramphenicol (50 mg L⁻¹) for further taxonomic identification using specialized literature for morphological analysis of the taxa. To confirmation of the taxa, the DNA was extracted and amplified and sequencing the ITS region (“internal transcribed spacer”) of the rDNA. From 1728 leaf fragments analyzed, 476 specimens of endophytic fungi were isolated including 40 morphotypes/phylotypes. Cochliobolus hawaiiensis, Colletotrichum falcatum and Epicoccum sorghi were the most frequent species. The identified species pertain to the Eurotiomycetes, Dothidiomycetes, Sordariomycetes and Mucorales. Acremonium borodinense, Arthrinium sp., Cochliobolus hawaiiensis, Engyodontium album, Epicoccum sorghi, Hypoxylon griseobrunneum, Phyllosticta capitalensis, Mucor irregularis, Mucor indicus, Mucor sp., Paraphaeosphaeria sp., Periconia macrospinosa, Purpureocillium lilacinum and Talaromyces apiculatus, are cited for the first time as endophyte to sorghum.

Submitted by Eduardo Barros de Almeida Silva (eduardo.philippe@ufpe.br) on 2015-04-17T14:45:27Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Gustavo da Silva.pdf: 2208057 bytes, checksum: c820059808bed300dcbbb54ebff0550f (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T14:45:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Gustavo da Silva.pdf: 2208057 bytes, checksum: c820059808bed300dcbbb54ebff0550f (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / FACEPE / O interesse por pesquisas relacionadas aos endofíticos e às suas propriedades biotecnológicas aumenta, à medida que surge a necessidade pela busca de novos metabólitos bioativos, produzidos por essas espécies, e que possam combater micro-organismos multirresistentes. Micro-organismos endofíticos foram isolados de folhas sadias de Schinus terebinthifolius Raddi (Aroeira-Vermelha) e avaliados quanto à atividade antimicrobiana, frente a micro-organismos patogênicos, através de um ensaio primário com blocos de gelose, fermentação líquida e testes realizados com seus extratos. Os extratos foram analisados através de prospecção química e bioautografia em camada delgada. Obteve-se 237 isolados fúngicos, 67 bacterianos e 13 de actinobactérias. Dos quarenta fungos e 13 actinobactérias testados, 8 (20%) e 13 (100%) apresentaram atividade inibitória, respectivamente. Foi realizada fermentação líquida com o fungo (Mycelium stereo F-61) e a actinobactéria (S. kunmingensis Act-3) os quais obtiveram melhores halos de inibição. As frações etéreas (pH 7,0 – 48 h) provenientes do M. stereo F-61, inibiram S. aureus (20 mm), E. coli (23 mm) e S. aureus resistente à meticilina (MRSA) (23 mm). As frações de acetato de etila (pH 7,0 – 48 h) oriundas da S. kunmingensis (NBRC 14463), inibiram S. aureus (29 mm) e S. aureus (MRSA) (20 mm). Esses extratos apresentaram CMI para a S. kunmingensis Act-3 frente à S. aureus (62 μg mL−1) e S. aureus (MRSA) (125 μg mL−1), e para M. stereo F-61 contra S. aureus (125 μg mL−1), S. aureus (MRSA) (500 μg mL−1) e E. coli (500 μg mL−1). A prospecção química dos extratos do M. stereo F-61 detectou açúcares redutores e compostos fenólicos no extrato metanólico, e de triterpenos, esteroides, mono/sesquiterpenos e compostos fenólicos no extrato etéreo. A bioautografia constatou que os princípios ativos produzidos pela S. kunmingensis Act-3 e pelo M. stereo F-61 não são semelhantes aos da planta. Conclui-se que os isolados produzem metabólitos secundários bioativos com ação antimicrobiana, e apresentam potencial para a descoberta de nova substância bioativa de interesse biotecnológico.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:06:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo532_1.pdf: 5130503 bytes, checksum: e33c8d155e5e443a6bfd70fd16a7cbcd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Dentre as variedades de algodoeiro transgênico, o Bt (=Bacillus thuringiensis) oferece resistência aos principais lepidópteros pragas do algodoeiro por expressar a proteína Cry1Ac (=crystal protéico). Tendo em vista que a produção dessa proteína pelo vegetal geneticamente modificado pode influenciar a capacidade da planta em alocar fungos endofíticos, o objetivo do presente estudo foi investigar as possíveis alterações na composição de fungos endofíticos associados ao algodoeiro transgênico (Bt) em comparação ao não-transgênico (não-Bt). Desse modo, coletas foram realizadas nos estádios de desenvolvimento da planta. Em cada coleta foram selecionadas amostras de folhas, caules, raízes, flores e sementes de algodoeiro Bt e não-Bt, cultivados simultaneamente. Foram isolados 23 taxa de fungos endofíticos pertencentes aos grupos Zygomycota, Ascomycota, Coelomycetes, Hyphomycetes e Blastomycetes. E 17 gêneros foram encontrados: Acremonium, Cladosporium, Colletotrichum, Curvularia, Fusarium, Glomerella, Guignardia, Lecanicillium, igrospora, Pestalotiopsis, Phoma, Phomopsis, Rhizopus, Rhodotorula, Talaromyces, Tritirachium e Xylaria. As espécies mais frequentes de fungos de acordo com o órgão vegetal foram Phomopsis archeri em folhas e caules, Phoma destructiva em raízes, igrospora sphaerica em flores e Curvularia lunata var. aeria em sementes. A abundância e diversidade de fungos endofíticos associados ao algodoeiro Bt e ao não-Bt aumentam com o envelhecimento da planta, porém não houve diferença significativa entre a composição de fungos endofíticos associados aos dois tipos de algodoeiro, indicando que a expressão da proteína Cry1Ac não afeta a capacidade do algodoeiro em alocar os fungos endofíticos e que os efeitos detectados relacionados à composição da comunidade fúngica estão associados à idade e órgão da planta. A ocorrência de fungos endofíticos em sementes de algodoeiro sugere que há transmissão vertical desses microrganismos entre as plantas de uma geração para a outra. Dos fungos endofíticos obtidos, quarenta isolados foram avaliados quanto à produção qualitativa das enzimas hidrolíticas extracelulares lipase, protease e amilase. E o melhor resultado foi apresentado por isolados de Cladosporium cladosporioides obtidos de raiz de algodoeiro Bt e do não-Bt, que apresentaram um índice enzimático alto para duas das três enzimas testadas, sendo um microrganismo promissor a ser usado em diferentes setores da indústria biotecnológica

Orientador: Ângela Regina Araújo. / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca:Lourdes Campaner dos Santos / Banca:Jairo Kennup Bastos / Banca:Luce Maria Brandão Torres / Resumo: Os fungos, diferente dos vegetais são heterotróficos, mais especificamente quimiorganotróficos, por suas características específicas pertencem a um reino separado. Alguns dos fungos através de sua evolução se especializaram em invadir os espaços intercelulares das plantas passando a sobreviver dentro dos seus hospedeiros, não provocando nenhuma patologia. Estes microrganismos são denominados de fungos endofíticos. A disputa por alimentos entre os fungos no interior das espécies vegetais, gerou a necessidade dos fungos produzirem metabolitos secundários com atividades contra outros microrganismos, podendo assim demarcar seu território. Todo este processo deve acontecer de forma a não causar patologias na planta que é a fonte de seu alimento, em alguns casos essas relações de mutualismo e comensalismo se aprimoraram sendo muito comum alguns vegetais possuirem fungos endofíticos protegendo contra pragas insetos e patógenos. Este trabalho descreve o isolamento e a purificação dos fungos endofíticos associados às folhas, caules, raízes e sementes da espécie vegetal Michela champaca. Foram isolados 8 fungos, sendo 3 dos caules, 4 das folhas, 1 das raízes, nenhum fungo foi isolado das sementes. Os extratos brutos produzidos por estes fungos em caldo de dextrose e batata foram avaliados quimicamente (CLAE-DAD e RMN1H) e submetidos à bioensaios para avaliação da potencialidade anticancerígena, antifúngica e anticolinesterásica. Todos os extratos apresentaram atividade contra os fungos fitopatogênicos Cladosporium cladosporioides e Cladosporium sphaerospermum e 40% apresentaram atividade frente às linhagens mutantes de Saccharomyces cerevisiae. Após esta triagem, os fungos endofíticos Mc-8R (ainda não identificado) e Colletotrichum gloeosporioides (Mc-7F) foram selecionados para estudo químico/biológico. / Abstract: Some fungal species, through their evolution, have specialized in invading plants and surviving inside their hosts causing no warm them. These microorganisms have been called endophytic which in the invasion process, produce chemical substances that inhibit competitors to invade their neighborhood and thus survive in harmony with the host. This work seeks to evaluate the chemical diversity of substances from endophytic fungi associated to Michelia champaca L. that present biological activity by isolating and identification of their secondary metabolites. This work resulted in the isolation of eight fungi species and selection of 2 strains which presented strong antifungal activity against Cladosporium cladosporioides and C. sphaerospermum, both of them pathogenic fungus; and a weak antitumor activity against mutant strains of Saccharomyces cerevisiae. The first one was codified as Mc-8R and chromatographic fractionation of its EtOAc extract allowed the identification of the Pirenocines A (1), E (2) and B (3) and the Pirenochaetic acids, C (4), A (5) and B (6), and in addition to the novel (7) and (8). Ergosterol (9), was found in the hexanic extract obtained from growing Mc-8R in rice, and the Ergosterol peroxide (10), which was isolated from the hexanic extract in corn. The other selected fungi species was identified as Colletotrichum gloeosporioides. The fractioning of its EtOAc extract led to the isolation of the known substances as Uracil (11), cyclo-(S*-Pro-S*-Tyr) (12), cyclo-(S*-Pro-S*-Val) (13), 2-Aminophenyl acetic acid (2-APA), (14), p-Hydroxyphenylacetic acid (15), 4-Hydroxybenzamide (16) and (2-Hydroxy-phenyl)- acetic acid (17), in addition to the novel compounds (18) and (19). 2-Hexylidene-3-methylsuccinic acid (20) was also identified as major compound from the fungus Mc-C3, (Xylaria sp.). / Doutor

Resumo: A área de biocatálise está em franco desenvolvimento e fungos associados a espécies vegetais dos biomas brasileiros são biocatalisadores em potencial, praticamente inexplorados. Nesse contexto, o presente trabalho descreve a avaliação do potencial biocatalítico de 7 fungos endófitos isolados de espécies vegetais do Cerrado. Foi avaliada a capacidade dos micro-organismos Nigrospora sphaerica, Schizophyllum commune, Phomopsis sp., Tricoderma viridae, Aspergillus versicolor, Xylaria sp. e Phomopsis stipata biotransformarem ou biodegradarem os substratos ácido gálico e cassina. O estudo de tolerância dos micro-organismos aos substratos permitiu selecionar as concentrações nas quais o ácido gálico (1,0 g L-1) e a cassina (0,5 g L-1) foram adicionados ao meio reacional na etapa de biotransformação/biodegradação. Todos os micro-organismos estudados se mostraram capazes de biotransformar o substrato ácido gálico. Os 26 produtos biotransformados são mais apolares que o composto de partida e foram encontrados na fase aquosa ou no micélio microbiano. Em relação à cassina, os endófitos Schizophyllum commune, Tricoderma viridae e Xylaria sp. não a metabolizaram, mesmo após 14 dias de incubação.Os endófitos Nigrospora sphaerica e Aspergillus versicolor a biodegradaram, enquanto que Phomopsis stipata e Phomopsis sp. a biotransformaram em 6 e 3 novos compostos, respectivamente. Os produtos de biotransformação do ácido gálico e da cassina terão suas estruturas determinadas em trabalhos futuros, e a partir desses dados poderemos inferir as reações que os fungos são capazes de realizar, e consequentemente sugerir as atividades enzimáticas presentes nos fungos endófitos estudados / Abstract: The area of biocatalysis is developing fast and fungi associated with plant species of Brazilian biomes are potential biocatalysts, virtually unexplored. In this context, this work describes the evaluation of biocatalytic potential of seven fungal endophytes isolated from species of the Cerrado. We evaluated the ability of the micro-organisms Nigrospora sphaerica, Schizophyllum commune, Phomopsis sp., Tricoderma viridae, Aspergillus versicolor, Xylaria sp. and Phomopsis stipata to biotransform or biodegrade the substrates gallic acid and cassine. The study of microorganisms tolerance to the substrate allowed to select the concentrations in which the gallic acid (1.0 g L-1) and cassine (0.5 g L-1) were added to the reaction medium in step biotransformation/ biodegradation. All microorganisms studied are quite capable of biotransform substrate gallic acid. The 26 biotransformed products are less polar than the starting compound and were found in the aqueous phase or microbial mycelium. In relation to the cassine, the endophytes Schizophyllum commune, Tricoderma viridae and Xylaria sp. didn't metabolize it, even after 14 days of incubation. Endophytes Nigrospora sphaerica and Aspergillus versicolor biodegraded the cassine, while Phomopsis stipata and Phomopsis sp. biotransformed this substrat in six and three new compounds, respectively. The biotransformation products of gallic acid and cassine will have their structures determined in future studies, allowing to infer which biotransformations occurred, and therefore suggest which the enzyme activities are found in the fungal endophyte studied / Orientador: Angela Regina Araujo / Coorientador: Lucimar Pinheiro Rosseto / Banca: Daniela Alonso Bocchini Martins / Banca: Edson Rodrigues Filho / Mestre

Submitted by NAIANI TARTARINE (naiani_tartarine@hotmail.com) on 2018-08-08T16:35:25Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Naiani Tartarine. Versão Final. 08-08-2018.pdf: 1927524 bytes, checksum: 255d76b50d4bdc679889756ec1ed3f76 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Carolina Gonçalves Bet null (abet@iq.unesp.br) on 2018-08-09T17:51:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 tartarine_n_me_araiq_int.pdf: 1924939 bytes, checksum: 1ba7b3053894e906ae5c9f93a64cd9ba (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-09T17:51:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tartarine_n_me_araiq_int.pdf: 1924939 bytes, checksum: 1ba7b3053894e906ae5c9f93a64cd9ba (MD5) Previous issue date: 2018-07-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Celulases microbianas têm sido empregadas na sacarificação de materiais lignocelulósicos para a obtenção de glicose, visando a produção de etanol celulósico. Entretanto, o custo dessas enzimas encarece o processo, e por isso a produção das mesmas a partir de fungos filamentosos cultivados em materiais lignocelulósicos, substratos de baixo custo, amplamente disponíveis e indutores da síntese enzimática, torna-se uma boa opção. Neste trabalho, com o objetivo de melhorar a produção de celulases através de metodologias de planejamento de experimentos, foram utilizados dois fungos endofíticos, cultivados por fermentação submersa (FSbm), usando como substratos o farelo de soja e a palha de cana de açúcar pré-tratada hidrotermicamente, cedida pela empresa GranBio, em cultivos isolados e co-cultivos, agitados. As atividades máximas obtidas nos extratos enzimáticos produzidos por planejamento experimental foram de 3,77 U/mL e 3,66 U/mL de endoglucanase, e 18,8 U/mL e 17,5 U/mL de β-glicosidase, no co-cultivo dos fungos Botryosphaeria sp. AM01 e Saccharicola sp. EJC04, e no cultivo isolado de Botryosphaeria sp. AM01, respectivamente. As condições ótimas de atividade das enzimas endoglucanase e β-glicosidase do melhor extrato foram pH 5,5 e 60 ºC. Estas enzimas foram estáveis quando incubadas por 24 horas em pH 5,0 e 5,5, e menos de 20% da atividade de ambas foi perdida entre 35 e 55 ºC. Os ensaios de inibição por glicose mostraram que a β-glicosidase tem sua atividade reduzida proporcionalmente ao fornecimento deste açúcar, porém, mesmo com a máxima quantidade de glicose fornecida (12 mmol/L), a atividade relativa mostrou-se mediana (64 %). Em relação à influência do etanol, a presença de 5 e 10% deste álcool aumentou em 4 e 5 %, respectivamente, a atividade enzimática de β-glicosidase, ocorrendo inibição em concentrações superiores. Em relação à sacarificação das palhas de cana, as maiores concentrações de glicose foram obtidas quando utilizaram-se a palha submetida a pré-tratamento hidrotérmico ácido seguido de alcalino (3,29 mg/mL) e a palha pré-tratada hidrotermicamente cedida pela empresa GranBio (2,66 mg/mL). / Microbial cellulases have been used in the saccharification of lignocellulosic materials to obtain glucose, aiming to produce cellulosic ethanol. However, the cost of these enzymes makes the process expensive, so their production from filamentous fungi grown in lignocellulosic materials, low-cost and widely available substrates and inducers of enzymatic synthesis, is a good option. In order to improve cellulase production through experiment planning methodologies, two endophytic fungi, were cultivated by submerged fermentation (FSbm). Soybean meal and hydrothermally pretreated sugarcane straw, provided by GranBio, were used as substrate, in agitated isolated cultures and co-cultivations. The maximal activities obtained in the enzymatic extracts produced by the experimental design were 3.77 U/mL and 3.66 U/mL endoglucanase and 18.8 U/mL and 17.5 U/mL β-glycosidase in the co-cultivation of the fungi Botryosphaeria sp. AM01 and Saccharicola sp. EJC04, and in the isolated cultivation of Botryosphaeria sp. AM01, respectively.. The optimal activity conditions of the endoglucanase and β-glucosidase enzymes from the best selected extract were pH 5.5 and 60 ° C. These enzymes were stable when incubated for 24 hours at pH 5.0 and 5.5, and less than 20% of the activity of both of them was lost at 35-55 °C. The glucose-inhibition assays showed that β-glucosidase activity was reduced proportionally to the supply of this sugar, but even with the maximum amount of glucose supply (12 mmol/L), the relative activity was shown to be median (64 %). Regarding the influence of ethanol, the presence of 5 and 10% of this alcohol increased in 4 and 5%, respectively, the enzymatic activity of β-glucosidase, occurring inhibition in higher concentrations. Regarding the saccharification of sugarcane straw, the highest glucose concentrations were obtained with the straws that were submitted to the acid hydrothermal treatment followed by the alkaline treatment (3.29 mg/mL) and the hydrothermally pretreated straw provided by the company GranBio (2.66 mg/mL).

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Aline Mequita (alinealmeida@bce.unb.br) on 2016-11-21T16:28:26Z No. of bitstreams: 1 2016_GabrielaCorezziWerneck.pdf: 1385523 bytes, checksum: c2833d3a8449c2a1c2ac26e1daebbd63 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-06T18:37:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_GabrielaCorezziWerneck.pdf: 1385523 bytes, checksum: c2833d3a8449c2a1c2ac26e1daebbd63 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-06T18:37:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_GabrielaCorezziWerneck.pdf: 1385523 bytes, checksum: c2833d3a8449c2a1c2ac26e1daebbd63 (MD5) / Proteases são enzimas, que catalisam a hidrolise das ligações peptídicas. Estas enzimas são aplicadas em diversas indústrias como a alimentícia, farmacêutica, cosmética, de couro e de detergente. São produzidas por animais, plantas e microrganismos. Entre seus produtores encontram-se os fungos endofíticos, que são microrganismos que vivem no interior de plantas de forma simbiótica. Sabendo disso, o objetivo principal deste trabalho foi isolar fungos endofíticos de plantas do cerrado, avalia-los quanto á produção de proteases extracelulares, visando aplicação industrial. Foram isolados 58 fungos de 13 espécies de plantas endêmicas do cerrado. Primeiramente, foi realizada uma triagem para avaliar quais fungos eram produtores de protease, 36 fungos demonstraram halo indicando produção de protease em meio de cultura ágar-leite. Foi realizado ensaio enzimático utilizando azocaseína 0,5% como substrato para avaliar quantitativamente a produção de proteases. Os produtores que demonstraram maior atividade de protease foram os fungos endofíticos codificados como BR, OH03, PT02, PEQ03 e KC01. O fungo BR, apresentou 41 UI/mL de atividade proteolítica, pH ótimo 7,0 e temperatura ótima de 60°C e foi escolhido para dar continuidade ao trabalho. Visando a otimização da produção de protease foram testados meios com diferentes fontes de nitrogênio e carbono, a maior produção de proteases ocorreu no meio contendo peptona, extrato de levedura e glicose. A curva de crescimento mostrou que o melhor dia de produção da enzima foi o 9° dia. A protease foi parcialmente purificada utilizando cromatografia de troca iônica. A fração parcialmente purificada foi caracterizada com atividade ótima em pH 7,0 e 60°C e manteve 100% desta atividade a 60°C por 1 hora. A enzima foi testada como removedor de manchas para a indústria de detergentes melhorando a remoção de manchas quando adicionada a um detergente comercial e demonstrou ser compatível com marcas de detergente para roupas comerciais. ___________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Proteases are enzymes which catalyze the hydrolysis of peptides bonds. These enzymes are applied in various industries such as food, pharmaceutical, cosmetics, leather and detergent. They are produced by animals, plants and microorganisms. Among its producers are the endophytic fungi, which are microorganisms that live inside plants symbiotically. Thus, the aim of this study was to isolate endophytic fungi of the Cerrado biome plants and evaluate the production of extracellular proteases for an industrial application. It was isolated 58 endophytic fungi from 13 different species of endemic plants. First, a screening was performed to evaluate fungi protease producing. 36 fungi has shown halo production using milk agar culture. Enzyme assay was performed using azocasein 0.5% as substrate to evaluate quantitatively the production of proteases. The best producers were endophytes encoded as BR, OH03, PT02, PEQ03 and KC01. Since then BR fungus stood out among them. BR showed 41 IU / mL of proteolytic activity, optimum pH 7.0 and optimum temperature of 60 °C and was chosen. To optimize protease production the medium were tested with different carbon and nitrogen sources. The best production of proteases occurred in a medium containing peptone, yeast extract and glucose. The best day of the enzyme production, based on growth curve curve, was the 9th day. The protease was partially purified using ion exchange chromatography. The partially purified fraction was characterized and showed highest activity at pH 7.0, 60 °C and maintained 100% stability at 60 °C for 1 hour. The enzyme was tested as stain remover detergent industry to improve the spot removal. When added to a commercial detergent, the enzyme demonstrated to be compatible with commercial brands of detergent clothes.

Resumo: No trabalho foi abordado o estudo de extratos do fungo Phomopsis stipata cultivado em diferentes meios de cultura na implementação da metodologia in silico utilizando cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas e cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas de alta resolução conjugados com a base de dados do dicionário de produtos naturais (http://dnp.chemnetbase.com). Foi realizada a comparação da diversidade na produção metabólica do fungo endofítico quando cultivado em diferentes meios de cultura comerciais e em cereal (milho), através do perfil cromatográfico, assim como avaliação das atividades antioxidante e propriedades de inibição da polimerização do heme. Nos extratos diclorometânicos foram identificadas oito substâncias. No extrato diclorometânico do fungo endofítico, crescido em milho, cinco substâncias foram detectadas, sendo elas: 1- derivado -lactônico; 2- ácido n-hexadecanóico; 3- ácido 16-octadecanóico; 4- di-hexanoato de 2-etilhexila e 5- hexadecanoato de iso-propilodiol. E, para o extrato diclorometânico de P. stipata, crescido em meio batata dextrose, três substâncias foram detectadas, dentre elas: 6- ciclohexen-2-ol- 3,5,5-trimetil-ona; 7- hexahidropirrolol [1,2-a] pirazina-1,4-diona-3-benzil e 8- hexahidropirrolol [1,2-a] pirazina-1,4-diona-3-isometil. O emprego de CLAE-DAD-EM e espectrometria de massas tandem possibilitou a identificação, diretamente a partir dos extratos brutos do fungo, de seis substâncias que já foram relatadas para outras espécies do gênero Phomopsis e duas substâncias já antes identificadas na espécie Phomopsis stipata, totalizando oito substâncias detectadas. Para o extrato acetato de etila, crescido em extrato de malte, no modo estático, três substâncias foram detectadas, sendo elas: 10- phomopsidina; 11- phomopsilactona e 12- phomosina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work show the study of extracts of the fungus Phomopsis stipata grown in different culture broth in the implementation of in silico methods using gas chromatography coupled to mass spectrometry and high performance liquid chromatography coupled to mass spectrometer for high resolution, combined with the database dictionary of natural products (http://dnp.chemnetbase.com). A comparison of diversity in the metabolic production of endophytic fungus when grown in different culture broth and cereal (corn) by the chromatographic profile was made, as well as assessment of activities of antioxidant properties and inhibition of heme polymerization. In dichloromethane extracts eight substances were identified. In dichloromethane extract of the endophytic fungus, grown in corn, five substances were detected, which were: 1- -lactone derivative; 2- n-hexadecanoic acid; 3- 16- octadecenoic acid; 4- hexanedioic acid, bis(2-ethylhexyl) ester and 5- hexadecanoic acid, 2-hydroxy-1-(hydroxymetil)ethyl ester, And for the dichloromethane extract of P. stipata, grown on potato dextrose broth, three substances were detected, among them:... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Ian Castro-Gamboa / Coorientador: Ângela Regina Araújo / Banca: Miriam Sannomiya / Banca: Luce Maria Brandão Torres / Mestre