Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-11-06T19:43:59Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Albérico Real do Espírito Santo Filho.pdf: 1868427 bytes, checksum: dc46833dccb7787924921cd0a9aa4bb3 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2019-01-25T14:39:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Albérico Real do Espírito Santo Filho.pdf: 1868427 bytes, checksum: dc46833dccb7787924921cd0a9aa4bb3 (MD5) / Made available in DSpace on 2019-01-25T14:39:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Albérico Real do Espírito Santo Filho.pdf: 1868427 bytes, checksum: dc46833dccb7787924921cd0a9aa4bb3 (MD5) Previous issue date: 2015-02-10 / CNPq / FACEPE / CAPES / Os antibióticos e antifúngicos estão incluídos entre os fármacos mais indiscriminadamente utilizados, contribuindo para o crescimento de resistência bacteriana e fúngica, o que provoca uma diminuição da ação antimicrobiana. Esta resistência estimula a pesquisa de novos compostos que apresentem efeitos antimicrobianos, sejam eles compostos naturais obtidos de plantas, de outros organismos ou compostos sintéticos obtidos através de modificações especificas de moléculas quimicamente conhecidas, tornando-as biologicamente mais ativas, como, por exemplo, as imidas cíclicas. Por esta razão, o objetivo deste estudo foi sintetizar e avaliar a atividade antimicrobiana de novos derivados de ftalimidas ligadas a 1,2,3-triazóis. Os compostos foram sintetizados através da reação entre N-2-(azidaetil) ftalimida com cadeia alifática n=2 e alcino aromático. Essa reação foi processada na presença de iodeto de cobre (CuI), trietilamina, dimetilformamida (DMF) à temperatura de 25⁰C, sob energia de ultrassom, baseada na click chemistry. O screening antimicrobiano foi realizado através do teste de difusão em Agar, utilizando bactérias (Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella enteritidis) da Coleção de Culturas de Microrganismos do Departamento de Antibióticos/UFPE, os fungos leveduriformes foram do gênero Candida (C. krusei, C. albicans, C. pelliculosa, C. glabrata e C. parapsilosis) os filamentosos (Aspergillus flavus, A. fumigatus, A. niger, Fusarium lateritium, F. solani, F. oxysporum, F. verticillioides, Metarhizium anisopliae, Colletotrichum gloeosporioides, Microsporum gypseum, M. canis, Trichophyton rubrum, T. tonsurans) da Micoteca do Departamento de Micologia/UFPE. Aos discos de papel foram adicionados 50 μL da nova ftalamida (0,6 mg/disco), e em seguida foram colocados em placas de Petri previamente inoculadas com cada microrganismo teste, em meio Agar Nutriente para bactérias a 37⁰C e Agar Sabouraud para fungos a 30⁰C. O experimento foi realizado em duplicata. Os resultados foram avaliados através do diâmetro do halo (mm) de inibição e estão representados como média aritmética. A análise quantitativa foi determinada através da CMI em meio Sabouraud, a anfotericina B foi utilizada como droga padrão. A CMF foi determinada após o 6º dia, As microplacas foram submetidas ao leitor de Elisa com comprimento de onda entre 492 nm e 630 nm, em seguida coradas com Resazurina. Os compostos não foram ativos para as bactérias, bem como para as espécies de C. glabrata, A. niger, F. oxysporum, F. solani. Os maiores halos de inibição foram obtidos nos fungos filamentosos tratados com as novas ftalimidas 1a e 2a, com destaque para ftalimida 2a que mostrou os halos mais expressivos (33–65 mm), inibindo 14 dos 18 fungos testados. A CMI da nova ftalimida 2a variou entre 5 – 20 μg/mL. A nova ftalimida 2a demonstrou ter potente atividade antifúngica podendo servir como protótipo para novas drogas. / Antibiotics and antifungals are included among the most used drugs indiscriminately. This fact contributing to the growth of bacterial or fungal resistance, which causes a decrease in antimicrobial action. This resistance encourages the search for new compounds having antimicrobial effects, like that natural compounds obtained from plants, other organisms or synthetic compounds obtained by chemical modifications of known specific molecules, making them more biologically active, for example, cyclic imides. For this reason, the aim of this study was to synthesize and evaluate the antimicrobial activity of new derivatives of phthalimides connected to 1,2,3- triazoles. Compounds were synthesized by the reaction of N-2- (azidaetil) phthalimide with n=2 aliphatic chain and aromatic alkyne. This reaction was worked in the presence of copper iodide (CuI), triethylamine, dimethylformamide (DMF) the temperature of 25 °C, under ultrasonic energy, based on click chemistry. The antimicrobial screening was performed using the agar diffusion test using bacteria (Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa and Salmonella enteritidis) of Microorganisms Culture Collection of the Department of Antibiotics / UFPE, the yeasts were Candida genus (C. krusei, C. albicans, C. pelliculosa, C. glabrata and C. parapsilosis) and filamentous (Aspergillus flavus, A. fumigatus, A. niger, Fusarium lateritium, F. solani, F. oxysporum, F. verticillioides, Metarhizium anisopliae, Colletotrichum gloeosporioides, Microsporum gypseum, M . canis, Trichophyton rubrum, T. tonsurans) the mycology department/UFPE. The paper discs were added 50 μL of the new phthalimide (0.6 mg/disc), then were placed on inoculated Petri dishes each test microorganism in Nutrient Agar for bacteria to 37 ⁰C and Sabouraud agar medium for fungi 30 ⁰C. The experiment was performed in duplicate. The results were evaluated through the inhibition zone diameter and are represented as the arithmetic mean. Quantitative analysis was determined through the MIC in Sabouraud broth, amphotericin B was used as the standard drug. The CMF was determined after the 6º day. The microplates were subjected to ELISA reader at a wavelength between 492 nm and 630 nm then stained with Resazurin. The compounds were not active for bacterias, as well as C. glabrata, A. niger, F. oxysporum, F. solani. More was observed inhibition zones in three of the five selected yeasts. However the best inhibition zones were obtained in filamentous fungi with the phthalimides 1a e 2a. Where the new phthalimide 2a showed the most significant halos (33 – 65 mm ), inhibiting 14 of the 18 tested fungi. MIC The new phthalimide 2a ranged from 5-20 μg/mL. The new phthalimide 2a shown to have potent antifungal activity may serve as a prototype for new drugs.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. Texto liberado parcialmente pelo autor. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-05-04T12:54:21Z No. of bitstreams: 1 2016_RaquelDall’AgnolMartarello_Parcial.pdf: 1017333 bytes, checksum: 90ff4a8255483fd191ac9be3648c66f7 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2016-05-04T12:59:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_RaquelDall’AgnolMartarello_Parcial.pdf: 1017333 bytes, checksum: 90ff4a8255483fd191ac9be3648c66f7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-04T12:59:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_RaquelDall’AgnolMartarello_Parcial.pdf: 1017333 bytes, checksum: 90ff4a8255483fd191ac9be3648c66f7 (MD5) / A intolerância à lactose é caracterizada pela desordem na absorção do carboidrato lactose, que acomete milhares de pessoas em todo o mundo e está associada à deficiência na produção ou ausência da enzima β-galactosidase intestinal. Dentro deste contexto, a hidrólise enzimática deste dissacarídeo por β-galactosidase desempenha papel importante no processamento de produtos lácteos com baixo teor de lactose para o consumo por indivíduos intolerantes. A literatura descreve que, os microrganismos, como fungos filamentosos, são capazes de produzir enzimas de interesse industrial, como por exemplo β-galctosidases. Desta forma, o objetivo deste trabalho, foi avaliar a produção em meio líquido de β-galactosidase extracelular por fungos filamentosos isolados do solo do cerrado brasileiro, utilizando resíduos de soja como fonte de carbono. Inicialmente foi realizada uma triagem com 25 linhagens de fungos filamentosos quanto ao potencial de produção de β-galactosidase. Após a seleção do Aspergillus foetidus, como o melhor fungo produtor, a produção enzimática foi otimizada variando o meio de cultivo e em seguida, realizou-se um planejamento experimental com análise de superfície resposta com as variáveis independentes pH, temperatura e agitação para avaliar a influência destes parâmetros físico-químicos na produção da enzima. A melhor atividade de β-galactosidase (26,4 U/mL) foi encontrada no sistema contendo casca de soja 2% (p/v) em pH inicial 7,0 a 28°C com 120 rpm. A curva de indução indicou o 7° dia de cultivo como o período de melhor atividade. A β-galactosidase foi parcialmente purificada utilizando cromatografia de gel filtração e troca iônica. A fração mais pura da enzima foi então, caracterizada visando sua aplicação industrial alimentícia e farmacêutica sendo sua atividade máxima a 50°C e pH 3,0. A enzima hidrolisou 63% da lactose presente no leite (Molico®), e quando testada sua estabilidade em condições de simulação gástrica manteve-se ativa por 2 horas a 37°C. Estes resultados apontam para a parcial purificação de uma β-galactosidase ácida e estável de Aspergillus foetidus com potencial aplicação industrial a partir de resíduo de baixo custo. / Lactose intolerance is characterized by a disorder in absorption of the carbohydrate lactose, which affects thousands of people worldwide and is associated with a deficiency or absence of intestinal β-galactosidase enzyme. In this context, the enzymatic hydrolysis of this disaccharide by β-galactosidase plays an important role in the processing of dairy products with low lactose content for consumption by intolerant individuals. The literature describes that microorganisms such as filamentous fungi can produce enzymes of industrial interest, such as β-galactosidases. Thus the objective of this study was to evaluate the production of extracellular β-galactosidase by filamentous fungi isolated from the soil of the Brazilian savanna in liquid medium using soybean residue as a carbon source. Initially a screening of 25 filamentous fungi strains grown in soybean residue medium was performed assessing β-galactosidase production potential. After selecting Aspergillus foetidus as the best producer, enzyme production was optimized by varying the culture medium followed by an experimental design with response surface analysis with the independent variables pH, temperature and stirring to assess the influence of these physico-chemical parameters in enzyme production. The best β-galactosidase activity (26.4 U/mL) was found in the system containing soybean residues 2% (w/v) at initial pH 7.0 at 28°C with 120 rpm. The induction curve indicated the 7th culture day as the period of highest activity. β-galactosidase was half purified using gel filtration and ion exchange chromatography. The purified enzyme was then characterized aiming its food and pharmaceutical industrial uses with maximal activity at 50°C and pH 3.0. The enzyme hydrolyzed 63% of the lactose present in milk (Molico®), and when tested its stability in gastric simulated conditions it remained active for 2 hours at 37°C. These results demonstrate the half purification of an acidic and stable β-galactosidase from Aspergillus foetidus with potential industrial application from low-cost residue.

Submitted by Felipe Lapenda (felipe.lapenda@ufpe.br) on 2015-03-18T13:59:41Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO JULIA IDALICE DO NASCIMENTO.pdf: 954193 bytes, checksum: a394ee36778f183ec2daea2711b10d95 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-18T13:59:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO JULIA IDALICE DO NASCIMENTO.pdf: 954193 bytes, checksum: a394ee36778f183ec2daea2711b10d95 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / Características inerentes à goiaba favorece o ataque de fungos fitopatogênicos reduzindo sua vida pós-colheita. O uso de substâncias naturais protetoras é crescente, destacando-se a quitosana. Com o objetivo de verificar a atividade antifúngica da quitosana na extensão da vida de prateleira de goiaba minimamente processada, testou-se os fungos: Colletotrichum gloeosporiodes. Foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM), Concentração Fungicida Mínima (CFM), a inibição do crescimento micelial radial e alterações na morfogênese induzidas pela quitosana. Paralelamente, foram determinados os teores de sólidos solúveis totais, acidez titulável, pH, vitamina C, açúcares totais, cor, perda de massa fresca e realizada análise sensorial. Microbiologicamente, foi ensaiada a contagem de bolores e leveduras, Salmonella e Coliformes. Todas as cepas demonstraram sensibilidade a quitosana apresentando CIM de 5 mg/mL e CFM de 10 mg/mL. Colletrotrichum gloeosporioides apresentou inibição do crescimento micelial radial de 87% após 72 horas frente a 5,0 mg/mL do polímero. Com relação à vida de prateleira, as maiores diferenças nos parâmetros físico-químicos relacionaram-se com a temperatura de armazenamento, em concordância com os ensaios da contagem de bolores e leveduras, nos quais houve um retardo no crescimento fúngico visível até o sexto dia, enquanto apenas três dias nos frutos controle. Sensorialmente, observaram-se médias semelhantes independentes do tratamento, exceto nos últimos dias de armazenamento. Os resultados obtidos demonstraram o potencial fungicida da quitosana, a sua aceitação como cobertura comestível e o aumento de vida de prateleira de goiaba minimamente processada recoberta com o polímero.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-10-03T22:29:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Eduardo Ricarte de Moura.pdf: 157785 bytes, checksum: f1a7a356cedc446f5b3c9a0897aa7e8f (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-14T15:40:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Eduardo Ricarte de Moura.pdf: 157785 bytes, checksum: f1a7a356cedc446f5b3c9a0897aa7e8f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-14T15:40:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Eduardo Ricarte de Moura.pdf: 157785 bytes, checksum: f1a7a356cedc446f5b3c9a0897aa7e8f (MD5) Previous issue date: 2007-02-26 / CNPq / A caatinga é uma das maiores e mais distinta região brasileira que durante centenas de anos foi negligenciada e vem sofrendo acentuado processo de desertificação. A desertificação acarreta mudanças tanto do solo quanto nas interações no solo, como a decomposição. No sistema de decomposição, os fungos apresentam grande importância porque participam ativamente nos processos de biodeterioração e biodegradação. Este trabalho tem como objetivo ampliar o conhecimento sobre a diversidade de fungos filamentosos isolados do solo de áreas de caatinga no semiárido brasileiro. No município de Buíque Reserva do Vale do Catimbau, foram coletadas cinco amostras de solo no período de estiagem e no período chuvoso a 20 cm de profundidade no ano de 2006. Para o isolamento dos fungos, foi utilizado o método de diluição sucessiva, onde 25 g de cada amostra do solo foi suspensa em 225ml de água destilada esterilizada. Desta suspensão, 10ml foi adicionado a 990ml de água destilada esterilizada onde 1ml dessa diluição seriada em placas de petri em triplicata, contendo meio ágar Sabouraud e Cloranfenicol. As placas permaneceram à temperatura ambiente e o crescimento dos fungos foi acompanhado por 72h. Análises estatísticas foram utilizadas para determinar abundância, frequência e diversidade das espécies e para verificar se houve diferença significativa entre os pontos do período de estiagem e chuvoso. Um total de 46 espécies foram identificadas pertencentes aos gêneros Absidia (03), Aspergillus (09), Chaetomium (01), Curvularia (02), Fusarium (05), Mucor (01), Neocosmospora (01), Penicillium (16), Rhizopus (02), Syncephalastrum (01), Thielavia (01), Torula (01) e Trichoderma (03). Espécies de Aspergillus e Penicillium foram dominantes no solo. Aspergillus fumigatus foi à espécie mais abundante e mais frequente tanto no período de estiagem quanto no período chuvoso. Comparando os períodos de estiagem com período chuvoso a maior diversidade se concentra no período de estiagem. / The caatinga is the biggest and different brazilian region during century year it suffers intensive desertification process. The desertification cause changes in the soil and interactions on soil both, as decomposition. In the cycle of decomposition, a fungi play role important in process of biodeterioration and biodegradation. This work aims to broaden the knowledge about the diversity of filamentous fungi isolated from the soil of caatinga areas in the Brazilian semiarid. In the area of Buíque Park Vale of Catimbau, soil samples were collected in five points a 20 cm depth during dry season and wet season in the year 2006. For to isolated of the filamentous fungi, was used serial dilution echnique and were inoculated in Petri dishes containing Sabouraud Ágar medium with Cloranfenicol (100 mg/ml). The Petri dishes stayed to the ambient temperature and the growth of the fungi was monitored by 72 hours. Statistical analyzes were used to determine abundance, frequency and diversity of the species and to verify if there was a significant difference between the periods of the dry season and rainy season. A total of 46 species was identified belonging to the genus Absidia (03), Aspergillus (09), Chaetomium (01), Curvularia (02), Fusarium (05), Mucor (01), Neocosmospora (01), Penicillium (16), Rhizopus (02), Syncephalastrum (01), Thielavia (01), Torula (01) e Trichoderma (03). Species of Aspergillus and Penicillium were dominant in the soil. Aspergillus fumigatus was the most abundant and most frequent species both in the dry season and in the rainy season. Comparing the periods of drought with rainy season, the greatest diversity is concentrated during the dry season.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-03T21:24:02Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Minelli Albuquerque Sousa.pdf: 1685422 bytes, checksum: aa0b6a25cf3fdcb5be14a26639ecfd22 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-17T22:19:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Minelli Albuquerque Sousa.pdf: 1685422 bytes, checksum: aa0b6a25cf3fdcb5be14a26639ecfd22 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-17T22:19:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Minelli Albuquerque Sousa.pdf: 1685422 bytes, checksum: aa0b6a25cf3fdcb5be14a26639ecfd22 (MD5) Previous issue date: 2011-12-20 / CAPES / Materiais queratinosos são insolúveis e resistentes à degradação por enzimas proteolíticas comuns, tornando-se importante o estudo de microrganismos produtores de queratinases para ser usado na indústria biotecnológica. O objetivo deste estudo foi selecionar fungos isolados do solo armazenados na Micoteca URM, para ser empregado na síntese de queratinases extracelular, caracterizar as cepas quanto a capacidade queratinolítica, efeito de diferentes substratos, da composição do meio e das condições de cultivo na produção de queratinase em cultivo submerso, otimizara aprodução, caracterizar e purificar a enzima. Para a determinação da capacidade de utilizar substratos queratinosos, 50 cepas fúngicas foram utilizadas. Elas foram cultivadas em fermentação submersa em meio contendo sais e penas durante 10 dias a 30 °C em agitador orbital a 120 rpm. Para avaliar a capacidade queratinolítica e o efeito de diferentes substratos na produção da queratinase foram utilizadas as seguintes cepas: Aspergillus sulphureus URM 5029, A. avenaceus URM5051, A. sclerotiorum URM5586 e Trichoderma aureoviride URM5574. Com a linhagem que apresentou a melhor produção e o melhor substrato, foi realizado estudos do efeito da composição do meio, condições de cultivo na produção da queratinase, otimização da produção, caracterização e purificação da enzima. Aspergillus sulphureus, Trichoderma aureoviride, Aspergillus avenaceus e A. sclerotiorum mostraram os melhores resultados com 7,35 U /ml, 7,2 U/ml, 6,7 U/ml e 6,05 U/ml de atividade queratinolítica, respectivamente. As espécies testadas se destacaram na colonização dos diferentes substratos queratinosos e o melhor substrato para a produção de queratinase foi a pena de frango. A produção de queratinase por A. sulphureus foi incrementada nas seguintes condições: 2 g/50 ml de pena de frango, 0,1 g/50 ml de NaNo₃, 0,001 g/50 ml de CaCl₂, pH 7,8, 35ºC, 160 rpm e 10⁶ esporos/ml em cultivo líquido submerso em 10 dias de incubação. A partir desses resultados foi realizado um planejamento fatorial completo 2⁴, para otimizar a produção da queartinase, e as melhores condições de produção foram: pH 8,0, 36 °C, 120 rpm, 2,5% (p/v) de penas de frango em 10 dias, com a máxima atividade de 10,06 U/ml, mostrando um aumento de 1,44 vezes. A queratinase de A. sulphureus apresentou melhor atividade em pH 10,0 e 35 ºC e é pouco inibida na presença de íons metais (Co²⁺, Mg²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Mn²⁺, Ca²⁺) e PMSF e fortemente inibida por EDTA, sugerindo ser uma metaloprotease. As melhores condições para purificação da queratinase de Aspergillus sulphureus, após análise estatística, foram: massa molecular do PEG, 8000; concentração do PEG, 20% e concentração de citrato 15%, apresentando aumento de pureza e recuperação queratinolítica de 25,04 e 184,9%, respectivamente. Com base nos resultados, concluímos que a preservação, sob óleo mineral é satisfatório para manter a viabilidade e a taxonomia das culturas por longos períodos de tempo e os microorganismos do solo podem ser uma interessante fonte de fungos produtores de queratinases. Além disso a capacidade da queratinase de A. sulphureus ser estável em uma ampla faixa de pH (6,5–9,0) e temperatura (25–60 °C) sugere o uso desta cepa em processos biotecnológicos industriais. / Keratinous materials are insoluble and resistant to degradation by common proteolytic enzymes, making it important to study keratinases producing microorganisms for use in the biotechnology industry. The aim of this study was to select fungi isolated from soil stored in the URM Culture Collection, to be employed in the synthesis of extracellular keratinases, characterize the strains and the ability queratinolítica, effect of different substrates, the medium composition and cultivation conditions in the production of keratinase in submerged culture, aprodução optimize, characterize and purify the enzyme. To determine the ability to use keratinous substrates, 50 fungal strains were used. They were grown in submerged fermentation in medium containing salts and penalties for 10 days at 30 ° C on an orbital shaker at 120 rpm. To assess the ability queratinolítica and the effect of different substrates on keratinase production we used the following strains: Aspergillus sulphureus URM 5029, A. avenaceus URM5051, A. sclerotiorum URM5586 and Trichoderma aureoviride URM5574. With a lineage that had the best production and best substrate, was carried out studies of the effect of medium composition, cultivation conditions on keratinase production, production optimization, characterization and purification of the enzyme. Aspergillus sulphureus, Trichoderma aureoviride, Aspergillus avenaceus and A. sclerotiorum showed the best results with 7.35 U / ml, 7.2 U / ml, 6.7 U / ml and 6.05 U / ml keratinolytic activity, respectively. The species tested stood out in the colonization of different keratinous substrates and the best substrate for the production of keratinase was the poultry feathers. Keratinase production by A. sulphureus was increased in the following conditions: 2 g/50 ml of poultry feathers, 0.1 g/50 ml of NaNO3, CaCl2 0.001 g/50 ml, pH 7.8, 35 ° C, 160 rpm and 106 spore/ml in submerged in liquid culture 10 days of incubation. From these results we carried out a full 2⁴ factorial design to optimize the production of queartinase, and the best production conditions were: pH 8.0, 36 ° C, 120 rpm, 2.5% (w/v) feather chicken in 10 days, with maximum activity of 10.06 U/ml, showing an increase of 1.44 times. The keratinase of A. sulphureus showed better activity at pH 10.0 and 35 ° C and is slightly inhibited in the presence of metal ions (Co²⁺, Mg²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Mn²⁺, Ca²⁺) and PMSF and strongly inhibited by EDTA, suggesting that a metalloprotease. The best conditions for purification of keratinase from Aspergillus sulphureus, after statistical analysis were: molecular weight of PEG 8000, PEG concentration, 20% and 15% concentration of citrate, an increase of purity and keratinolytic recovery of 25.04 and 184.9%, respectively. Based on the results, we conclude that the preservation under mineral oil is satisfactory to maintain the viability and taxonomy of cultures for long periods of time and soil microorganisms may be an interesting source of keratinases producing fungi. Furthermore the ability of keratinase of A. sulphureus be stable over a wide pH range (6.5 to 9.0) and temperature (25-60 ° C) suggests the use of this strain in industrial biotechnology processes.

Foram realizados seis experimentos in vitro com o objetivo de avaliar a eficiência de diversos microrganismos em solubilizar uma fluorapatita proveniente de Catalão, Goiás. Também foram avaliados os efeitos de doses de fluorapatita, do tempo de cultivo e da solubilização parcial da fluorapatita com ácido sulfúrico sobre a solubilização biológica do fosfato de rocha. O estudo foi realizado à temperatura ambiente utilizando-se uma solução de glicose com nutrientes minerais ou vinhaça esterilizada e não-esterilizada como meios de cultura. Seis culturas de fungos filamentosos foram selecionadas por terem apresentado elevado poder de solubilização em meio contendo glicose e nutrientes. Destas, duas culturas de Aspergillus niger foram mais eficientes em solubilizar a fluorapatita em todas as condições de cultivo estudadas. Nos cultivos com prazos superiores há 21 dias ocorreram os maiores teores de fósforo solúvel. Aspergillus niger apresentou maior solubilização em baixas doses, e Penicillium sp em doses elevadas. Correlações entre pH e fósforo solubilizado dependeram dos meios de cultivo empregados. Não houve mudança na composição mineralógica da fluorapatita devido ao ataque fúngico, embora Aspergillus niger tenha solubilizado uma quantidade de fósforo equivalente à encontrada em fluorapatita 25% solubilizada por H2SO4 / Six experiments were carried out in vitro in order to evaliuate the effectiveness of several microrganisms in solubilizing a fluorapatite proceeding from Catalão, State of Goiás, Brazil. It was also evaluated the effects of rates of applied fluorapatita, time of cultivation, and previous partial solubilization on the biological solubilization of the rock phosphate. The study was conducted at ambient temperature using a glucose plus nutrients solution, as well as a sterilized and non-sterilized sugar cane vinasse as culture medium. Six filamentous fungi were selected as the most effective phosphate solubilizers when the culture medium was glucose plus nutrients solution. Among these, two cultures of Aspergillus niger were the most effective under any of the studied culture conditions. The highest levels of soluble phosphate were observed when the cultivation period was longer than 21 days. Aspergillus niger showed the highest solubilization rates at low levels of fluorapatite, whereas Penicillium sp was most effective at the higher levels. The composition of the culture media influenced the phosphorus solubilization by fungi, so that the correlation between pH and soluble phosphate varied depending on the medium used. No changes in the mineral composition of the fluorapatite due to fungal activity was observed, although Aspergillus niger had solubilization an amount of phosphate equivalent to that found in the fluorapatite 25% solubilized by sulfuric acid

Foram realizados seis experimentos in vitro com o objetivo de avaliar a eficiência de diversos microrganismos em solubilizar uma fluorapatita proveniente de Catalão, Goiás. Também foram avaliados os efeitos de doses de fluorapatita, do tempo de cultivo e da solubilização parcial da fluorapatita com ácido sulfúrico sobre a solubilização biológica do fosfato de rocha. O estudo foi realizado à temperatura ambiente utilizando-se uma solução de glicose com nutrientes minerais ou vinhaça esterilizada e não-esterilizada como meios de cultura. Seis culturas de fungos filamentosos foram selecionadas por terem apresentado elevado poder de solubilização em meio contendo glicose e nutrientes. Destas, duas culturas de Aspergillus niger foram mais eficientes em solubilizar a fluorapatita em todas as condições de cultivo estudadas. Nos cultivos com prazos superiores há 21 dias ocorreram os maiores teores de fósforo solúvel. Aspergillus niger apresentou maior solubilização em baixas doses, e Penicillium sp em doses elevadas. Correlações entre pH e fósforo solubilizado dependeram dos meios de cultivo empregados. Não houve mudança na composição mineralógica da fluorapatita devido ao ataque fúngico, embora Aspergillus niger tenha solubilizado uma quantidade de fósforo equivalente à encontrada em fluorapatita 25% solubilizada por H2SO4 / Six experiments were carried out in vitro in order to evaliuate the effectiveness of several microrganisms in solubilizing a fluorapatite proceeding from Catalão, State of Goiás, Brazil. It was also evaluated the effects of rates of applied fluorapatita, time of cultivation, and previous partial solubilization on the biological solubilization of the rock phosphate. The study was conducted at ambient temperature using a glucose plus nutrients solution, as well as a sterilized and non-sterilized sugar cane vinasse as culture medium. Six filamentous fungi were selected as the most effective phosphate solubilizers when the culture medium was glucose plus nutrients solution. Among these, two cultures of Aspergillus niger were the most effective under any of the studied culture conditions. The highest levels of soluble phosphate were observed when the cultivation period was longer than 21 days. Aspergillus niger showed the highest solubilization rates at low levels of fluorapatite, whereas Penicillium sp was most effective at the higher levels. The composition of the culture media influenced the phosphorus solubilization by fungi, so that the correlation between pH and soluble phosphate varied depending on the medium used. No changes in the mineral composition of the fluorapatite due to fungal activity was observed, although Aspergillus niger had solubilization an amount of phosphate equivalent to that found in the fluorapatite 25% solubilized by sulfuric acid

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-05-04T13:32:53Z No. of bitstreams: 1 2016_LuanaLimadaCunha_Parcial.pdf: 1000341 bytes, checksum: 949ad3195fafda051472c5ae2102e68d (MD5) / Rejected by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br), reason: ok on 2016-05-04T13:34:32Z (GMT) / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-05-04T13:37:54Z No. of bitstreams: 1 2016_LuanaLimadaCunha_Parcial.pdf: 1000341 bytes, checksum: 949ad3195fafda051472c5ae2102e68d (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-05-15T13:39:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_LuanaLimadaCunha_Parcial.pdf: 1000341 bytes, checksum: 949ad3195fafda051472c5ae2102e68d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-15T13:39:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_LuanaLimadaCunha_Parcial.pdf: 1000341 bytes, checksum: 949ad3195fafda051472c5ae2102e68d (MD5) / A casca de soja é um resíduo agroindustrial com elevado teor de holocelulose, sendo uma fonte de carbono economicamente viável para microrganismos produzirem enzimas de xilanases de aplicação industrial. Entre esses microrganismos estão os fungos filamentosos, eficientes produtores de xilanases, enzimas que apresentam diversas aplicações biotecnológicas, incluindo branqueamento do papel, aditivos em rações animais, produção de sucos, pães, entre outras. No presente estudo, uma xilanase (Xyl) do fungo Aspergillus foetidus crescido por 7 dias em casca de soja foi purificada e caracterizada visando o potencial biotecnológico da Xyl e o aproveitamento do resíduo. A curva de indução enzimática do fungo indicou alta atividade de xilanase a partir do segundo dia, mantendo-se constante ao longo de 20 dias. A otimização das condições de cultivo, utilizando a metodologia de superfície resposta, levou a produção máxima de xilanase de 13,98 U/mL. Uma xilanase foi purificada com massa molecular estimada de 14,19 kDa. A Xyl teve sua maior atividade a 50°C e pH 5,0. A meia-vida da Xyl a 30°C e a 50°C foi de 8 dias 16 horas e 7h 36min, respectivamente. A enzima foi ativada por Mg+,Ca2+,Zn2+,K+ e Na+ e inibida por Mn2+, Co2+, Fe2+ e SDS. Os valores de Km e Vmáx encontrados a 50°C foram 26,32 mg/mL e 68,45 U/mL, respectivamente. Os valores dos parâmetros termodinâmicos estimados para a reação da Xyl com o substrato foram ΔG = -17,56 kJmol-1 ΔH = -29,94 kJmol-1, ΔS = -31,47 Jmol-1K-1 e Ea = 33,87 kJmol-1. A hidrólise da xilana por Xyl liberou xilose, xilobiose (maior quantidade) e xilotriose indicando um mecanismo de ação do tipo “exo”. A influência do pH e temperatura sobre as estruturas secundárias e terciárias da Xyl foram analisados por espectroscopia de fluorescência e dicroísmo circular. Os resultados mostraram que as perturbações de pH e temperatura afetam a estabilidade da Xyl, mas não sua estrutura secundária. Os resultados encontrados no trabalho sugerem que a Xyl pertença à família GH11. / Soybean hulls are an agro-industrial residue high in holocelulose which is a source of carbon with economic viability used by microorganisms to produce xylanolytic enzymes with application to industries. The filamentous fungi are an effective microorganism producer of xylanase, enzymes that with many biotechnological uses including paper bleaching, animal feed additives, production of juices, bread, among others. In this study, a xylanase (Xyl) produced by Aspergillus foetidus grown on soybean hulls for 7 days was purified and characterized aiming the biotechnological potential of Xyl and residues utilization. The enzyme induction curve of the fungus indicated high xylanolytic activity from the second day and it remained constant throughout 20 days. The optimization of culture conditions using the response surface methodology led to a maximum xylanase production of 13.98 U/mL. A xylanase was purified with an estimated molecular weight of 14.19 kDa. The enzyme had its highest activity at 50°C and pH 5.0. The Xyl half-life at 30°C and 50°C was 8 days and 6 hours and 7h36min, respectively. The enzyme was activated by Mg+,Ca2+,Zn2+,K+ e Na+ e inhibited by Mn2+, Co2+, Fe2+ e SDS. The enzyme gave a Michaelis-Menten constant (Km) 26.32 mg/mL and maximum reaction (Vmax) 68.45 U/mL. The thermodynamic parameters for the hydrolysis of birch wood xylan were estimated at ΔG = -17.56 kJmol-1 ΔH = -29.94 kJmol-1, ΔS = -31.47 Jmol-1K-1 and Ea = 33,87 kJmol-1. The hydrolysis of xylan by Xyl produced xylose, xylobiose (in a larger amount) and xylotriose indicating an action mechanism of “exo” mode. The influence of pH and temperature on the secondary structure of Xyl were analyzed by fluorescence spectroscopy and circular dichroism. The results showed that pH and temperature disturbances affect only Xyl stability. The results of the current work suggest that Xyl may be classified as GH11 family.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-13T19:26:42Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 744359 bytes, checksum: 87ca72fc10ae980db171625c92bdef8d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-13T19:26:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 744359 bytes, checksum: 87ca72fc10ae980db171625c92bdef8d (MD5) Previous issue date: 2003-04-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Avaliou-se a produção de ocratoxina A por fungos filamentosos isolados de grãos de café e por fungos produtores de pectinases. Cinqüenta e seis fungos filamentosos foram isolados dos grãos de café, compreendendo grande variedade de gêneros, dentre os quais o Penicillium foi predominante. Dentre os isolados obtidos, apenas um, identificado como Aspergillus ochraceus, foi capaz de produzir ocratoxina A. Aspergillus ochraceus foi, então, cultivado nos meios de cultura Czapek Dox modificado, extrato de levedura e meio de coco, a 25oC, por 120 horas, com agitação e sem agitação. Constatou-se que a produção de ocratoxina A ocorreu quando o isolado A. ochraceus foi cultivado em caldo Czapek Dox modificado e em caldo extrato de levedura, sem agitação. A ocratoxina A não foi detectada nos cultivos sob agitação. A toxina foi identificada por cromatografia de camada delgada e confirmada pela cromatografia líquida de alta eficiência. A ocratoxina A não foi detectada nos sobrenadantes das culturas dos fungos pectinolíticos Aspergillus niger, Penicillium cultivados expansum, nos meios Penicillium minerais griseoroseum tamponados e Penicillium e italicum, não-tamponados, suplementados com pectina cítrica como única fonte de carbono, a 25oC, por 120 horas, com agitação. As atividades das enzimas pectinolíticas foram determinadas nessas condições de cultivo e variaram de 25,51 a 61,31μmol mL -1 min -1 , para poligalacturonase e 9,79 a 34,5 nmol mL -1 min -1 , para pectina liase. / In this work, the production of ochratoxin A by filamentous fungi isolated from coffee beans and by pectinolytic fungi was evaluated. Fifty-six isolates were obtained from coffee beans, representing a wide variety of fungal genera within which Penicillium was the predominant one. Among all isolates, only one, identified as Aspergillus ochraceus, was able to produce ochratoxin A. This fungus was then cultivated in modified Czapek Dox, yeast extract broth, and grated coconut medium, at 25°C for 120 hours, with or without shaking. When grown in modified Czapek medium and yeast extract broth, without shaking, A. ochraceus produced ochratoxin A in detectable levels by thin layer chromatography and confirmed by high performance liquid chromatography. Ochratoxin A was not detected in the supernatant of the cultures of the pectinolytic fungi Aspergillus niger, Penicillium expansum, Penicillium griseoroseum, and Penicillium itallicum cultivated in buffered and unbuffered mineral media, supplemented with citric pectin as the sole carbon source, at 25°C for 120 hours. The activities of pectinolytic enzymes were determined under these cultivation conditions and varied from 9.79 to 34.5 nmol mL -1 min -1 , for pectin lyase, and from 25.51 to 61.31 μmol mL -1 min -1 , for polygalacturonase.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química / Made available in DSpace on 2012-10-21T16:48:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 210529.pdf: 923738 bytes, checksum: e93ab97333eb07fb2380a63792a2a4ca (MD5) / Os esporos de fungos filamentosos termo-resistentes não só resistem às temperaturas de pasteurização de sucos e derivados de frutas, como são ativados por tratamento térmico germinando e provocando a deterioração destes produtos. Este trabalho tem como objetivo o estudo da resistência térmica de Byssochlamys nivea e Talaromyces flavus em suco de maçã. Duas temperaturas de incubação foram utilizadas (20 e 30ºC), possibilitando o estudo da influência deste parâmetro na resistência térmica destes fungos. Os esporos foram submetidos a diferentes tratamentos térmicos para avaliação da resistência térmica em tubo TDT Thermal Death Time, usando como meio suco de maçã a 12º Brix com pH = 3,2, como meio de aquecimento. Os resultados obtidos mostraram, para ambos os fungos, uma resistência térmica maior, quando estes foram produzidos a temperaturas maiores de incubação (30ºC). Entre os dois fungos filamentosos estudados, o Byssochlamys nivea se mostra o mais resistente com um comportamento não linear da curva de