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Previous issue date: 2015-01-27 / O objetivo geral deste estudo foi investigar variações genômicas e
transcriptômicas do receptor de hormônio luteinizante (LHR) e seu papel nos
processos de dominância folicular e resposta à superovulação em bovinos. Foram
realizados três experimentos, sendo que em todos se utilizou cDNA sintetizado a
partir do RNA total extraído de células da granulosa (CG) folicular. Para a
caracterização do transcrito do LHR, CG foram recuperadas de folículos dominantes
de vacas das raças Gir (n=16) e Holandês (n=16). Após a PCR e o sequenciamento,
os dados foram analisados para a presença de polimorfismos, frequência alélica,
conteúdo de informação polimórfica (PIC) e Equilíbrio de Hardy-Weinberg (HWE).
Vinte e um polimorfismos de base única (SNPs) foram identificados, sendo 17 em
Gir e 14 em Holandês. A classificação dos SNPs de acordo com os valores de PIC
identificou 12 como altamente informativos em Gir e cinco em Holandês. Em relação
a HWE, oito SNPs não estavam em equilíbrio em Gir e 10 em Holandês. Duas
isoformas derivadas de splicing alternativo também foram identificadas, uma no éxon
1 e outra no éxon 10. Conclui-se que o LHR em bovinos leiteiros apresenta uma alta
frequência de polimorfismos e múltiplas isoformas. Para avaliar o papel das
isoformas do LHR nas CG durante a divergência folicular, a emergência da onda
folicular foi sincronizada em novilhas Gir (n=10) e Holandês (n=10) e os folículos
foram aspirados individualmente em diâmetros correspondentes aos períodos de
pré-divergência, divergência, e pós-divergência. A expressão relativa das isoformas
de LHR foi determinada por PCR em Tempo Real e os resultados foram
relacionados com as concentrações intrafoliculares de estradiol (E2if). Em ambas as
raças, houve um aumento progressivo na concentração de E2if ao longo do
desenvolvimento folicular. O E2if foi maior em Holandês quando comparado com Gir
antes, durante, e depois da divergência; mas foi similar em folículos de mesmo
diâmetro nas duas raças. Observou-se um pico de expressão de LHR total após o
início da divergência folicular. A expressão das isoformas de LHR foi ou baixa
(Holandês) ou sub-regulada (Gir) durante este mesmo período. Os resultados
sugerem que a divergência precoce do folículo dominante em raças de Bos indicus
podem estar relacionados à maior sensibilidade ao feedback negativo do estradiol.
Além disso, mudanças sequenciais na expressão das isoformas de LHR podem
regular a função do LHR durante da divergência folicular em bovinos. A avaliação do
comportamento das isoformas de LHR durante a indução exógena do crescimento
folicular foi realizada em novilhas Gir caracterizadas com boa (n=5) ou má (n=5)
resposta à superovulação. Em ambos os grupos, foram coletadas CG de folículos (8
mm) cujo crescimento ocorreu sem (Controle) ou com estimulação por FSH (SOV).
No grupo de boa resposta, não houve diferença na expressão de LHR total entre os
tratamentos Controle e SOV. No grupo de má resposta, a expressão de LHR total foi
menor em SOV comparado com Controle, mas não houve diferença na expressão
das isoformas. Conclui-se que o LHR é diferencialmente expresso em folículos
dominantes de novilhas caracterizadas com boa ou má resposta a superovulação. / The aim of this study was to evaluate genomic and transcriptomic variations at
the luteinizing hormone receptor (LHR) and its role at the follicular dominance
establishment and superovulation outcome in bovine. Three experiments were
performed, and for all evaluations cDNA synthesized from total RNA extracted from
follicular granulosa cells (GC) were used. To characterize the LHR transcript, GC
were recovered from dominant follicles from Gir (n=16) and Holstein (n=16) cows.
After PCR and sequencing, data were analized to identify polymorphisms, allelic
frequency, polymorphic information content (PIC) and Hardy-Weinberg Equilibrium
(HWE). Twenty one single nucleotide polymorphism (SNP) were identified, being 17
in Gir and 14 in Holstein. The classification of SNP according to PIC values identified
12 as highly informative in Gir and five in Holstein. Considering HWE, eight SNP
were not in equilibrium in Gir and 10 in Holstein. Two isoforms were also identified,
one in exon 1 and other in exon 10. We concluded that LHR in dairy cattle shows a
high frequency of polymorphism and multiple isoforms. To evaluate the LHR isoforms
role in GC during follicular divergence, the follicular wave emergence was
synchronized in Gir (n=10) and Holstein (n=10) heifers and follicles were individually
aspirated at the corresponding sizes of pre-, divergence, and post-. The relative
expression of LHR isoforms was determined by real time PCR and results were
correlated to the intrafollicular estradiol (E2if) concentrations. In both breeds, there
was a progressive increase in E2if concentration during follicular development. The
E2if in Holstein was higher when compared to Gir before, during, and after
divergence; but was similar in follicles of same size in both breeds. We observed a
peak for the total LHR expression after the beginning of the follicular divergence. The
expression of LHR isoforms was low (Holstein) or under-regulated (Gir) during this
same period. The results suggest that the early follicular divergence of the dominat
follicle in Bos indicus breeds can be related to a higher sensitivity to the estradiol
negative feedback. Besides, sequential changes in LHR isoforms expression can act
regulating the LHR function during folicullar divergence in bovine. The evaluation of
LHR isoforms behavior during the exogenous induction of follcilualr development was
performed in Gir heifer previously characterized as good (n=5) or poor (n=5)
responders to superovulation. In both groups, GC were collected from follicles (8
mm) which growth occurred without (Control) or with FSH stimulation (SOV). In good
responders group, there was no difference in the LHR expression between the
Control and SOV treatments. In the poor responders group, the total LHR expression
was lower in SOV when compared to Control, but there was no difference in the
expression of the isoforms. We concluded that LHR is differentially expressed in
dominant follicles from heifers characterized as good or poor responders to
superovulation.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:hermes.cpd.ufjf.br:ufjf/102 |
| Date | 27 January 2015 |
| Creators | Viana, Sabine Wohlres |
| Contributors | Machado, Marco Antonio, Viana, João Henrique Moreira, Camargo, Luiz Sérgio de Almeida, Dode, Margot Alves Nunes, Guimaraes, Simone Eliza Facioni |
| Publisher | Universidade Federal de Juiz de Fora, Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologia, UFJF, Brasil, ICB – Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFJF, instname:Universidade Federal de Juiz de Fora, instacron:UFJF |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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