Le métabolisme de phase II est assuré par les UDP-glucuronosyltransférases (UGT), qui sont des enzymes régulant l'inactivation de nombreux médicaments et molécules endogènes. Cette voie métabolique est caractérisée par une variabilité interindividuelle significative, tant au niveau de l’expression génique qu’au niveau de l’activité de glucuronidation. La mesure des capacités de glucuronidation et la compréhension des mécanismes participant à cette variabilité dans les tissus humains sont un enjeu important. Cependant, le manque de spécificité des substrats des UGT, la grande similarité des séquences protéiques et le manque de corrélation entre l’expression en ARNm et en protéine, rend la mesure de la voie de glucuronidation difficile et complexe. En réponse à ces problèmes, des techniques de quantification des UGT par spectrométrie de masse ont été récemment développées. Il est alors possible de déterminer si les profils d’expression protéique des UGT ainsi obtenus par ces quantifications permettent de prédire le potentiel de glucuronidation dans les tissus humains. En plus d’une grande variabilité interindividuelle, mes travaux montrent que les profils d’expression protéique des UGT des tissus hépatiques et rénaux sont corrélés avec les activités de glucuronidation de quatre enzymes UGT pour lesquelles des substrats spécifiques sont connus. Par ailleurs, nous avons également démontré que la capacité de glucuronidation des tissus rénaux est fortement diminuée dans les tumeurs comparativement aux tissus normaux. Bien que de nombreux mécanismes de régulation des UGT aient été décrits, une fraction significative de la variabilité d’expression des ARNm, des protéines et de l’activité des UGT demeure inexpliquée et peut impliquer des mécanismes épigénétiques, tels que la régulation par microARN. Ainsi, nous avons identifié quatre microARN (miR-331, miR-376c, miR-409, et miR-494) comme des régulateurs potentiels des UGT2B15/2B17. Parmi ces microARN, nous avons mis en évidence l’implication de miR-376c dans la régulation de ces deux UGT, et déterminé que ces microARN pourraient influencer la biodisponibilité de la dihydrotestostérone (DHT) dans les cellules de cancer de la prostate in vitro et dans les tumeurs prostatiques de patients. / Phase II metabolism is conveyed by UDP-glucuronosyltransferases (UGT), which are enzymes regulating the inactivation of many drugs and endogenous molecules. This metabolic pathway is characterized by a significant interindividual variability at the level of gene expression and activity. The measurement of glucuronidation capacity and understanding of the mechanisms involved in this variability in human tissues are an important issue. However, the lack of substrate specificity for most UGT enzymes, the high similarity of their protein sequences and the lack of correlation between mRNA and protein expression complexifies accurate measurements of glucuronidation capacities in human tissues. To circumvent these issues, UGT quantification techniques by mass spectrometry have been recently developed. This allow us to determine whether expression patterns of UGT proteins, thus obtained by these quantifications, predict the potential of glucuronidation in human tissues. The results of our studies show a wide interindividual variability, but that the protein expression profiles of four UGT in liver and kidney tissues correlate with glucuronidation activities of their respective probe substrates. Furthermore, we also demonstrated that the glucuronidation capacity in tumor kidney tissues is greatly diminished relative to normal kidney tissues. Although many UGT regulatory mechanisms have been described, a significant part of their variability in mRNA, protein expression and activity remains unexplained and may involve epigenetic mechanisms, such as a regulation by microRNAs. Thus, we identified four microRNAs (miR-331, miR-376c, miR-409 and miR-494) as potential regulators of UGT2B15 / 2B17. Among these microRNAs, we have demonstrated the involvement of miR-376c in the regulation of UGT2B15 / 2B17, and determined that microRNAs could thus influence the bioavailability of dihydrotestosterone (DHT) in prostate cancer cells in vitro and prostatic tumors in vivo.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LAVAL/oai:corpus.ulaval.ca:20.500.11794/26556 |
| Date | 23 April 2018 |
| Creators | Margaillan, Guillaume |
| Contributors | Guillemette, Chantal |
| Source Sets | Université Laval |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | thèse de doctorat, COAR1_1::Texte::Thèse::Thèse de doctorat |
| Format | 1 ressource en ligne (xx, 174 pages), application/pdf |
| Rights | http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
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