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Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O vírus do herpes simples é uma importante causa de morbidade, especialmente em pacientes imunossuprimidos. O vírus herpes simplex tipo 1 (HSV-1) é um patógeno humano pertencente à família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae. O HSV-1 infecta a mucosa oral e provoca a maioria das formas de herpes não genital, embora também possa infectar a mucosa genital em humanos. Os objetivos deste estudo foram otimizar a reação de PCR em tempo real para auxiliar o diagnóstico, detecção e quantificação do HSV-1 em pacientes imunodeprimidos; e avaliar o uso do RNA de interferencia (siRNA) para inibir a replicação do vírus HSV-1 in vitro, como uma alternativa para terapia antiviral. Para o diagnóstico do HSV-1 foram analisadas 27 amostras de pacientes; amostras de saliva e raspado da lesão (swab) de 6 pacientes com lesões caracteristicas da infecção pelo HSV-1 e 21 amostras de pacientes infectados com o HSV-1 e HIV (vírus da imunodeficiência humana). Para o estudo do silenciamento do HSV-1, três seqüências específicas de siRNA foram avaliadas ( seqüência 1, 2 e 3) como uma estratégia contra o gene UL 39 do HSV-1. Este gene é uma subunidade da ribonucleotídeo redutase, que tem a função de catalisar o passo limitante na síntese do deoxiribonucleotídeos necessários para a síntese de DNA. Nos pacientes infectados com o HSV-1, todas as amostras foram positivas na detecção do HSV-DNA por PCR em tempo real e em70% destas amostras foi possível o isolamento viral. Entre os pacientes infectados com HIV , 90,48% foram positivas para anti-HSV e a co-infecção HIV/HSV foi detectada em 100% das amostras estudadas por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que o PCR em tempo real foi eficiente na detecção e quantificação do HSV-1 em diferentes tipos de amostras, e os níveis de carga viral variaram entre 100-104. Foi demostrado que a melhor concentração de siRNA utilizada para inibir o gene UL 39 do HSV-1 foi estabelecido em 10µM através da curva dose-dependentes com as três seqüências inibindo a replicação viral, no entanto a seqüência 1 foi capaz de inibir até 99% da replicação da cepa KOS e da amostra de isolado viral de um paciente infectado com HSV-1. Os resultados demostraram que o PCR em tempo real fornece resultados rápidos, com excelente sensibilidade e especificidade, e isso é especialmente importante para o diagnóstico em pacientes imunodeprimidos. As sequências de siRNA analisadas foram eficazes na inibição da replicação do HSV- 1 in vitro, porém outras investigações sobre os possíveis efeitos beneficos do siRNA in vivo são necessários / The herpes simplex virus is a major cause of morbidity, especially in immunocompromised patients. The herpes simplex virus type 1 (HSV-1) is a human pathogen belonging to the family Herpesviridae, subfamily Alphaherpesvirinae. HSV-1 infects the oral mucosa and causes most forms of non-genital herpes , although it can infect the genital mucosa in humans. The objectives of this study were to optimize the real time PCR for the diagnosis, detection and quantification of HSV-1 in immunocompromised patients and to evaluate the use of RNA interference (siRNA) to inhibit HSV-1 in vitro replication, as an alternative to antiviral therapy. For the diagnosis of HSV-1 were analyzed 27 patient samples; the saliva samples and swab of 6 patients with lesions characteristic of HSV-1 infection and 21 samples from patients infected with HSV-1 and HIV (human immunodeficiency virus). To study the HSV-1 silencing, three RNA especifc sequences were evaluated (sequence 1, 2 and 3) as a strategy against UL 39 gene of HSV-1. This gene is a subunit of ribonucleotide reductase, which functions catalyze the limiting step in the deoxiribonucleotídeos synthesis required for DNA synthesis. In patients HSV-1 infected, all samples were positive by real time PCR, and 70% of these samples were possible by virus isolation. In HIV infected patients, 90.48% were positive for anti-HSV, and co-infection by HIV / HSV was detected in 100% of the samples studied by real time PCR. The results showed that real-time PCR was able to detect and quantify HSV-1 in different types of samples, and viral load levels ranged from 100 to 104. The results of siRNA demonstrated the best concentration used to inhibit UL 39 gene was established by 10µM using and it was dose dependent and the three sequences inhibited of viral replication, but the sequence 1 was able to inhibit up to 99% of replication of the KOS strain and the viral isolate from a patient infected with HSV-1. The results show that the real-time PCR provides rapid results, with excellent sensitivity and specificity, and this is especially important for diagnosis in immunocompromised patients. The siRNA sequences analyzed were effective in inhibiting HSV-1 replication in vitro, however further investigations on the possible beneficial effects of siRNA in vivo are needed
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/5538 |
| Date | January 2011 |
| Creators | Silva, Amanda Perse da |
| Contributors | Santos, Flávia Barreto dos, Almeida, Adilson José de, Pereira, Tiago Campos, Paula, Vanessa Salete de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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