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Previous issue date: 2007-02-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The apple is a temperate clime fruit with larger dispersion, consumption and the more
marketed all over the world as fresh fruit. The apple production has been committed by the
incidence of diseases, in which Apple Leaf Spot (ALS), whose causal agent is the
Colletotrichum spp. Nowadays this disease is one of the largest concerns of the producers and
researchers. The origin of this disease in apple tree plants is not still well known. Studies
based on the phylogeny allow to relate evolutionarily the organisms and characterize possible
divergence mechanisms origin. This will contribute in disease control and prevention of new
races sprout. The objective of this work was to study the variation of the ITSs rDNA among
apple tree pathogenic isolates of Colletotrichum spp. from apple, citrus and feijoa. All isolates
were first cultivated on PDA, for one week at 24oC. In the PCR amplification of the rDNA
was used initiators ITS1 and ITS4. The amplified fragment was digested with restriction
enzymes (Rsa I, Alu I, Hinf I, Hpa II, Hha I, Xho I, Acc I, Eco RI and Taq I). The revelation
was in 2% agarose gel. It was obtained a great variation with products of the cleaved PCR
products, from 90 to 500 pb. The amplified fragment was purified (QIAquick Gel Extraction
Kit 250 - Unisciense of Brazil) and the fragment (ITS of the rDNA) was sequenced for all
isolates. The sequences were aligned with the ClustalW software and the phylogenetic tree
was constructed in the Mega 3.1 software. The products obtained in the PCR amplification of
the rDNA region (ITS1-5,8S-ITS2), with the initiators pair ITS1 and ITS4 revealed a
fragment with approximately 600 pb, for all the isolated analyzed. Through the analysis for
the ARDRA was possible to separate isolates groups in haplotypes, which was efficient for
the correlation between haplotypes and hosts, containing in a same haplotypes of the same
host. It was possible to group the isolates of Colletotrichum in species, using the phylogenetic
tree, independent of his host. All of the obtained sequences presented more than 93% of
similarity, fact that reinforces the hypothesis that the Colletotrichum spp., causal agent of
ALS, is nearly related with citrus and feijoa Colletotrichum / A maçã é a fruta de clima temperado de maior dispersão, consumo e a mais
comercializada como fruta fresca em todo o mundo. A produção de maçã no Brasil tem sido
comprometida pela incidência de várias doenças, das quais a Mancha Foliar da Gala (MFG),
cujo agente causal são espécies de Colletotrichum spp., tem sido, atualmente, uma das
maiores preocupações dos produtores e pesquisadores. A origem desta doença em macieira
ainda não está bem esclarecida e a utilização de estudos baseados na filogenia permitem
relacionar os organismos evolutivamente, caracterizando possíveis mecanismos de
divergência evolutiva e a origem do patógeno, contribuindo na adoção de medidas de controle
e prevenção quanto ao surgimento de novas raças. O presente trabalho objetivou estudar a
variação do DNA ribossomal, (rDNA) entre isolados de Colletotrichum spp. patogênicos em
macieira, em citros e goiaba serrana. Todos os isolados foram cultivados em meio BDA, por
uma semana a 24oC. A amplificação do rDNA foi realizada utilizando-se iniciadores ITS1 e
ITS4, seguida pela digestão da região ITS (espaçador interno transcrito) com enzimas de
restrição (Rsa I, Alu I, Hinf I, Hpa II, Hha I, Xho I, Acc I, Eco RI e Taq I). Os produtos
obtidos na amplificação da região ITS1-5,8S-ITS2 do rDNA revelaram um fragmento de
aproximadamente 600 pares de bases (pb), para todos os isolados analisados. Todos os
fragmentos amplificados foram clivados, obtendo uma grande variação, a qual foi de 90 a 500
pb. Utilizando a técnica de ARDRA (Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis) foi
possível separar e agrupar os isolados em haplótipos, a qual foi eficiente para a correlação
entre haplótipo e hospedeiros, agrupando em um mesmo haplótipo isolados do mesmo
hospedeiro. O fragmento amplificado foi purificado com kit QIAquick Gel Extraction Kit 250
(Qiagen, Hilden, Germany) e as amostras foram seqüenciadas na região ITS do rDNA de todos
os isolados. As seqüências foram alinhadas no software ClustalW e a árvore filogenética foi
construída no software Mega 3.1. Com o seqüenciamento de DNA foi possível inferir sobre a
possível espécie de fungo que pertence o segmento de DNA analisado. A região ITS do rDNA
mostrou-se muito eficaz para estudos de filogenia. A partir da árvore filogenética foi possível
agrupar os isolados de Colletotrichum por espécies, independente do seu hospedeiro. Todas as
seqüências obtidas apresentaram valores superiores a 93% de similaridade, fato esse, que
reforça que o Colletotrichum spp., causador da MFG, possui relações de parentesco com o
isolados de Colletotrichum spp. isolados de citros e de goiaba serrana
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.udesc.br #179.97.105.11:handle/1071 |
| Date | 26 February 2007 |
| Creators | Ribeiro, Diorvania Cardoso |
| Contributors | Guidolin, Altamir Frederico |
| Publisher | Universidade do Estado de Santa Catarina, Mestrado em Produção Vegetal, UDESC, BR, Produção Vegetal |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UDESC, instname:Universidade do Estado de Santa Catarina, instacron:UDESC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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