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Previous issue date: 2015-02-27 / CAPEs / A alta prevalência de esquistossomose crônica em gestantes, bem como em mulheres em idade fértil, tem sido amplamente relatada. Esta condição materna é capaz de alterar a resposta imune do descendente em longo prazo. O presente estudo teve o objetivo de avaliar o efeito in vitro do leite materno de mães infectadas pelo Schistosoma mansoni em esplenócitos e caracterizar os peptídeos encontrados nesse leite. Para isso, camundongos fêmeas infectadas ou não, tiveram seu leite coletado no 12º dia após o parto. Os esplenócitos jovens (15 dias) e maduros (6 semanas) foram cultivados com o Leite de Mães Infectadas (LMI) e com Leite de Mães Não Infectadas (LMNI) na presença de estimulador policlonal. Além disso, foram utilizados controles experimentais: Células pulsadas na ausência (BASAL) e apenas com estimulador policlonal (MITÓGENO) e células cultivadas com LMNI adicionado de antígenos solúveis dos ovos do S.mansoni (LMNI+SEA). Posteriormente, os ensaios de citometria de fluxo foram realizados para dupla marcação: Linfócitos T (CD3+ ou CD4+) marcados com CD28, CD154, CTLA4, IL-10 ou FoxP3. Além disso, foram analisadas a expressão de CD80, CD86 e CD40 na superfície de Macrófagos (CD14) e Linfócitos B (CD45R), e ainda a expressão de IL-10 por esse último. Para a análise dos peptídeos presentes no leite materno, um gel unidimensional foi confeccionado e as bandas obtidas no LMI, LMNI+SEA e LMNI foram processados para análise por espectometria de massa. Além disso, foram realizadas análises de antígenos parasitários: SEA e SWAP (antígeno solúvel do verme adulto). Esplenócitos jovens pulsados apenas com o mitógeno apresentaram maior frequência de células CD3+CD28+ e CD45R+IL10+. A adição de LMNI manteve aumento CD3+CD28+ e levou a menor frequência de Tregs, com aumento na expressão de células CD45R+CD40+. Ao ser introduzido o SEA (LMNI+SEA) foi identificada uma menor frequência de células CD3+CD28+ e aumento na expressão de IL-10. O LMI proporcionou menor frequência de linfócitos CTLA4+ e FoxP3+, porém com produção de IL-10 e maior frequência de CD45R+/CD80+. Para os esplenócitos maduros, o LMNI e LMI levaram à menor frequência de células CD3+/CD28+ e maior CD3+/CTLA4+, respectivamente, com aumento sustentado de Treg. Contudo, o LMI diminui a presença de células B IL-10+. A adição do SEA ao LMNI manteve a diminuição de células CD3+CD28+, mas aumentou a frequência de células CD3+/CD154+. O leite de mães esquistossomóticas apresentou peptídeos relacionados à presença do S. mansoni e com variabilidade de função. Destacamos a natureza imunomodulatória dos peptídios aqui identificados (Interleucina 17F, Glutationa s Transferase) que podem atuar na imunidade, seja para antígenos do parasita ou heterólogos, no descendente previamente amamentado. Estes achados enfatizam o caráter dicotômico do leite materno: estimulador em células jovens e tolerogênico em células maduras. Esses achados são relevantes em áreas endêmicas para esquistossomose e reiteram a importância da identificação e caracterização de antígenos parasitários, bem como, uma avaliação do seu papel na interação parasito-hospedeiro no incio da vida. / The high prevalence of chronic schistosomiasis in pregnant women and women of childbearing age has been widely reported. Breastfeeding by mothers with schistosomiasis is capable of altering the long term immune response of offspring. The aim of this study was to undertake an in vitro analysis of the effect of breast milk of mothers with schistosomiasis on young and mature splenocytes and characterize the proteomics in this milk. The milk of female mice infected with Schistosoma mansoni and non-infected female mice was collected on the 12th day postpartum. Young (15 days) and mature (6 weeks) splenocytes were cultivated (24hs) with mitogen (CONTROL), added to the Milk of Infected Mothers (MIM), Milk of Non-Infected Mothers (MNIM) or Milk of Non-Infected Mothers with the addition of soluble egg antigens of parasites (MNIM+SEA), as well as those without in vitro stimulus (BASAL). Double cell labeling was performed for flow cytometry: T Lymphocytes (CD3+ or CD4+) marked with CD28, CD154, CTLA4, IL-10 or FoxP3; Macrophages (CD14) and B Lymphocytes (CD45R) marked with CD80, CD86 or CD40 on the surface and the expression of IL-10 by CD45R+ cells. For analysis of proteomics a one-dimensional gel was made and the bands obtained from MIM, MNIM, MNIM + SEA, were processed for analysis by mass spectrometry. Additionally, the parasite antigens SEA and SWAP (soluble adult worm antigen preparation) were included in the analysis. Young splenocytes pulsed only with mitogen had the greatest CD3+CD28+ and CD45R+IL10+ cell frequency. The addition of MNIM maintained an increase of CD3+CD28+ and produced the lowest frequency of Tregs, with an increase in the expression of CD45R+CD40+ cells. The introduction of SEA (MNIM+SEA) resulted in reduced CD3+CD28+ cell frequency and increased IL-10 expression. MIM resulted in reduced CTLA4+ and FoxP3+ lymphocyte frequency, although there was some IL-10 production and greater CD45R+/CD80+ frequency. MNIM and MIM resulted in the lowest frequency of CD3+/CD28+ and CD3+/CTLA4+ cell frequency, respectively, for mature splenocytes, with a sustained increase of Treg. However, MIM reduced the presence of B IL-10+ cells. The addition of SEA to MNIM maintained a reduction in CD3+CD28+ cells, but increased the frequency of CD3+/CD154+ cells. The breast milk of mothers with schistosomiasis presented peptides related to the presence of S. mansoni and variability of function. The immunomodulatory nature of the peptides identified in the present study (Interleukin 17F, Glutathione-S-Transferase) should be noted, as these can act in the immune process of breastfed offspring, whether for parasite antigens or heterologous antigens. These findings emphasized the dichotomous character of breast milk, which functions as a stimulator in young cells and is tolerogenic in mature cells, yet is capable of improving LB activation. These findings are relevant for areas in which schistosomiasis is endemic and emphasize the importance of the identification and characterization of parasite antigens and the evaluation of their role in parasite-host interaction in the early stages of life, in order to obtain a better understanding of immunoregulatory events.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/16506 |
| Date | 27 February 2015 |
| Creators | Sales, Iana Rafaela Fernandes |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/8056939101932406, Souza, Valdênia Maria Oliveira de |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Medicina Tropical, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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