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Previous issue date: 2014-08-01 / CAPES / O vírus do dengue (DENV) pertence ao gênero Flavivirus, família Flaviviridae, possuindo RNA genômico de fita simples e apresentando quatro sorotipos antigenicamente relacionados (DENV 1-4). A identificação precoce dos casos de dengue é de vital importância para a tomada de decisões e implementação de medidas de maneira oportuna. No entanto, os métodos de eleição para o diagnóstico das infecções pelos DENV (ensaios imunoenzimáticos de captura de anticorpos das classes IgM e IgG) apesar de possibilitarem a análise rápida e reprodutível, apresentam a limitação da não detecção da enfermidade em sua fase inicial. Tendo por finalidade suplantar essa dificuldade, a obtenção de insumos que possam ser empregados em fluoroimunoensaios de detecção da proteína viral solúvel NS1, apresenta acentuada relevância. Pontos quânticos (PQs) fluorescentes de CdTe foram preparados em água com os estabilizantes, cisteamina (CTM) e ácido mercaptosuccínico (MSA). Os PQs obtidos exibiram elevada fluorescência e estabilidade coloidal, realizando-se a caracterização óptica (emissão/excitação/absorção) e estrutural (DRX/MET). Anticorpos monoclonais anti-NS1 DENV (Mab-anti NS1) específicos para os quatro sorotipos do DENV foram acoplados covalentemente aos PQs, via agentes de acoplamento. Microplacas negras de poliestireno foram previamente sensibilizadas com a proteína viral NS1 nativa, e os bioconjugados obtidos (PQs-Mab anti-NS1) foram utilizados em fluoroimunoensaios de detecção da proteína viral. Os bioconjugados de CdTe/MSA-anti-NS1 DENV para os quatro sorotipos apresentaram resultados promissores nos ensaios de detecção da proteína viral NS1, destacando-se o bioconjugado constituído pelo anticorpo monoclonal anti-NS1 DENV-2. Os bioconjugados foram empregados em ensaios de marcação de células fixadas e não fixadas clone C6/36 infectadas com DENV2, obtendo-se resultados satisfatórios para as células não fixadas. / The dengue virus (DENV) belongs to the Flavivirus gender, Flaviviridae family possessing a single-stranded RNA genome and 4 antigenic related serotypes (DENV1 – 4). The early dengue diagnosis is vital for the efficient medical intervention. The existing diagnostic methods for the DENV infections (immunoenzymatic antibody capture based methods of the IgM and IgG classes) although precise and fast still present limitations related to the diagnosis at early stages of the patology. Aiming the development of new diagnostic products for the immunodetection of the NS1 soluble viral protein is still of great importance. Fluorescent CdTe quantum dots (QDs) were prepared in aqueous medium applying mercaptosuccinic acid (MSA) and cysteamine (CTM) as stabilizing agents and used to produce an immunodiagnostic tool for the DENV detection. The QDs showed high fluorescent yield and great colloidal stability and were characterized by X-ray diffractometry, Electronic transmission microscopy, zeta potential and spectroscopic measurements. Monoclonal anti-NS1 DENV (Mab-anti NS1) antibodies specific for the 4 serotypes were covalently attached to the QDs via coupling agents. Black polystyrene microplates were sensibilized with the viral NS1 native protein and the (QDs-Mab anti-NS1) bioconjugates were applied in immunoassays aiming the detection of the viral protein. The CdTe/MSA-anti-NS1 DENV bioconjugates applied for the four serotypes showed promising results in the detection assays of the viral NS1 protein, being the most efficient the bioconjugate that used the monoclonal anti-NS1 DENV-2. The bioconjugates were used in the staining of fixed and live cells of the clone C6/36 infected with DENV2. The results were satisfactory for the live cells.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/24362 |
| Date | 01 August 2014 |
| Creators | BRASIL JÚNIOR, Aluízio Gonçalves |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/2234463053019457, SANTOS, Beate Saegesser, FONTES, Adriana |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Ciencias Farmaceuticas, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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