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Previous issue date: 2016-03-11 / O desenvolvimento de métodos de preparo de amostras é de suma importância para a
análise química. Ao longo dos anos, cada vez mais os cientistas buscam técnicas para
aprimorar metodologias e ferramentas matemáticas para a validação dos métodos
desenvolvidos. No presente trabalho foram desenvolvidos dois diferentes métodos de
preparo de amostras: um para a análise de corantes artificiais em iogurtes e posterior análise
por HPLC-PAD e outro método utilizando a técnica de CE-UV/Vis para separar e fracionar
amostras padrões de misturas de proteínas, seguido de um método para digestão destas e
análise por LC-ESI-MS para posterior mapeamento dos peptídeos. O primeiro trabalho foi
realizado para determinar a concentração de corantes artificiais em iogurtes e bebidas
lácteas que são alimentos produzidos a partir da fermentação do leite sendo um alimento
importante e indispensável a dieta de adultos e crianças. Para tanto foi desenvolvido um
método de extração e determinação de corantes artificiais em iogurtes e bebidas lácteas por
HPLC-PAD. O método foi devidamente validado e as amostras comerciais analisadas
estavam de acordo com a legislação. Já o segundo trabalho visa o estudo da proteômica
através do mapeamento de peptídeos. A eletroforese capilar (CE) por ser uma técnica de
separação muito eficiente para a análise de proteínas e peptídeos foi utilizada na etapa
inicial de preparo da amostra. A separação inicial foi seguida do fracionamento da amostra
que é uma etapa muito importante e que a CE pode proporcionar, minimizando a
complexidade da amostra. Posteriormente foi desenvolvido um método para a digestão das
proteínas contidas em cada fração e o mapeamento dos peptídeos foi realizado com auxílio
do LC-ESI-MS. Os resultados obtidos são animadores, visto que foi possível digerir as
proteínas com quimotripsina em até duas horas. O que é um tempo curto se comparado a
trabalhos da literatura que necessitaram de 12 a 24 horas para digestão de proteínas quando
utilizadas enzimas livres em solução. / The development of sample preparation methods is of paramount importance for analytical
chemistry. Over the years, more and more scientists are seeking techniques to improve
methodologies and mathematical tools for the validation of the methods they have
developed. In this study two different methods of sample preparation were developed: one
for analysis of artificial colorants in yogurts and subsequent analysis by HPLC-PAD; and
another method using the CE-UV/Vis technique to separate and fractionate standard
samples of protein mixtures, followed by a digestion method for these and analysis by LCESI-MS
for subsequent peptides mapping. The first study was conducted to determine the
concentration of artificial colorant in yoghurts and milk drinks, foods produced from the
fermentation of milk that are an important and indispensable part of the food diet for adults
and children. To this end, a method was developed for the extraction and determination of
artificial colorant in HPLC-PAD yoghurts and milk drinks. The method was validated and
commercial samples were analyzed according to the legislation. The second work is aimed
at the study of proteomics by peptide mapping. Capillary electrophoresis (CE) as an
effective separation technique was used in the initial stage of sample preparation for the
anaysis of proteins and peptides. The initial separation was followed by fractionation of the
sample which is a very important step enabled by CE, thus minimizing sample complexity.
Then, a method was developed to digest the proteins contained in each fraction and the
mapping of the peptides was carried out with the aid of LC-ESI-MS. The results obtained
are encouraging, since the study showed that it was possible to digest proteins with free
chymotrypsin within two hours. This is a short time compared to that found in the
published papers requiring 12 to 24 hours for protein digestion when free enzymes in
solution are used.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/20257 |
| Date | 11 March 2016 |
| Creators | BENTO, Waleska de Araújo Siqueira |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/1519722333222743, PAIM, Ana Paula Silveira |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Quimica, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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