Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Most of the free radicals generated in the body is derived from oxygen and are associated with the development of many diseases. Medicinal plants are a natural resource in the treatment prevention of diseases and have been used for the first healthcare. These properties of the plants are related to the presence of phenolic compounds which possess several pharmacological and antioxidant properties. The high performance liquid chromatography has been used to identify and quantify these compounds in plants. Therefore, this study developed and validated an HPLC - PAD method using gold as working electrode to characterize 12 phenolic compounds in herbal extracts from Amazon. The extracts from Connarus perrotettii var angustifolius, Mansoa alliacea, Cecropia palmata, Cecropia obtusa, Bauhinia variegata and Bauhinia alboflava showed the presence of at least one of the antioxidants compounds under study. Furthermore, the species showed in vitro antioxidant activity against reactive oxygen species. The acetate fraction of the species M. alliacea showed the highest in vitro antioxidant activity (70.85 ± 4.06%) against the superoxide radical. Front of the peroxyl radical, the species C. palmata was responsible for the hidhest antioxidant activity (95.33 ± 0.95%) and against hydroxyl radical species C. obtusa showed the highest scavenging activity (98.19 ± 5.93). The study of the in vitro antioxidant activity of these species coupled with chemical characterization of their extracts comprises an important key to potential in vivo studies. Moreover, the compounds identified and quantified in these species extracts have pharmacological properties and may be linked to popular use of these medicinal plants / A maioria dos radicais livres gerados no organismo é derivada do oxigênio e estão associados ao desenvolvimento de diversas doenças. As plantas medicinais são um recurso terapêutico natural na prevenção de patologias e têm sido utilizadas a milênios pela humanidade nos primeiros cuidados com a saúde. Muitas dessas propriedades das plantas estão relacionadas com a presença de compostos fenólicos os quais possuem diversas propriedades farmacológicas e antioxidantes. A cromatografia líquida de alta eficiência tem sido utilizada na identificação e quantificação desses compostos em plantas. Dessa forma, o presente trabalho desenvolveu e validou um método de HPLC PAD utilizando eletrodo de ouro como eletrodo de trabalho para a caracterização de 12 compostos fenólicos em extratos de plantas medicinais da Amazônia. Os extratos das espécies Connarus perrotettii var angustifolius, Mansoa alliacea, Cecropia palmata, Cecropia obtusa, Bauhinia variegata e Bauhinia alboflava demonstraram a presença de pelo menos um dos compostos antioxidantes em estudo. Além disso, as espécies apresentaram atividade antioxidante in vitro frente à espécies reativas de oxigênio. A fração acetato da espécie M. alliacea demonstrou a maior atividade antioxidante in vitro (70,85 ± 4,06 %) frente ao radical superóxido. Frente ao radical peroxil, a espécie C. palmata foi responsável pela maior atividade antioxidante (95,33 ± 0,95 %) e frente ao radical hidroxil a espécie C. obtusa demonstrou a maior atividade sequestradora (98,19 ± 5,93). O estudo da atividade antioxidante in vitro dessas espécies aliada a caracterização química dos seus extratos compreende uma importante chave para possíveis estudos in vivo. Ademais, os compostos identificados e quantificados nos extratos dessas espécies apresentam propriedades farmacológicas comprovadas e podem estar associados ao uso popular dessas plantas medicinais.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-08-04T13:34:48Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE - Waleska de Araújo Siqueira Bento - Versão final.pdf: 3392903 bytes, checksum: 633a749c72e4eb3f1d0e4f6b0f0c0b83 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-04T13:34:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE - Waleska de Araújo Siqueira Bento - Versão final.pdf: 3392903 bytes, checksum: 633a749c72e4eb3f1d0e4f6b0f0c0b83 (MD5) Previous issue date: 2016-03-11 / O desenvolvimento de métodos de preparo de amostras é de suma importância para a análise química. Ao longo dos anos, cada vez mais os cientistas buscam técnicas para aprimorar metodologias e ferramentas matemáticas para a validação dos métodos desenvolvidos. No presente trabalho foram desenvolvidos dois diferentes métodos de preparo de amostras: um para a análise de corantes artificiais em iogurtes e posterior análise por HPLC-PAD e outro método utilizando a técnica de CE-UV/Vis para separar e fracionar amostras padrões de misturas de proteínas, seguido de um método para digestão destas e análise por LC-ESI-MS para posterior mapeamento dos peptídeos. O primeiro trabalho foi realizado para determinar a concentração de corantes artificiais em iogurtes e bebidas lácteas que são alimentos produzidos a partir da fermentação do leite sendo um alimento importante e indispensável a dieta de adultos e crianças. Para tanto foi desenvolvido um método de extração e determinação de corantes artificiais em iogurtes e bebidas lácteas por HPLC-PAD. O método foi devidamente validado e as amostras comerciais analisadas estavam de acordo com a legislação. Já o segundo trabalho visa o estudo da proteômica através do mapeamento de peptídeos. A eletroforese capilar (CE) por ser uma técnica de separação muito eficiente para a análise de proteínas e peptídeos foi utilizada na etapa inicial de preparo da amostra. A separação inicial foi seguida do fracionamento da amostra que é uma etapa muito importante e que a CE pode proporcionar, minimizando a complexidade da amostra. Posteriormente foi desenvolvido um método para a digestão das proteínas contidas em cada fração e o mapeamento dos peptídeos foi realizado com auxílio do LC-ESI-MS. Os resultados obtidos são animadores, visto que foi possível digerir as proteínas com quimotripsina em até duas horas. O que é um tempo curto se comparado a trabalhos da literatura que necessitaram de 12 a 24 horas para digestão de proteínas quando utilizadas enzimas livres em solução. / The development of sample preparation methods is of paramount importance for analytical chemistry. Over the years, more and more scientists are seeking techniques to improve methodologies and mathematical tools for the validation of the methods they have developed. In this study two different methods of sample preparation were developed: one for analysis of artificial colorants in yogurts and subsequent analysis by HPLC-PAD; and another method using the CE-UV/Vis technique to separate and fractionate standard samples of protein mixtures, followed by a digestion method for these and analysis by LCESI-MS for subsequent peptides mapping. The first study was conducted to determine the concentration of artificial colorant in yoghurts and milk drinks, foods produced from the fermentation of milk that are an important and indispensable part of the food diet for adults and children. To this end, a method was developed for the extraction and determination of artificial colorant in HPLC-PAD yoghurts and milk drinks. The method was validated and commercial samples were analyzed according to the legislation. The second work is aimed at the study of proteomics by peptide mapping. Capillary electrophoresis (CE) as an effective separation technique was used in the initial stage of sample preparation for the anaysis of proteins and peptides. The initial separation was followed by fractionation of the sample which is a very important step enabled by CE, thus minimizing sample complexity. Then, a method was developed to digest the proteins contained in each fraction and the mapping of the peptides was carried out with the aid of LC-ESI-MS. The results obtained are encouraging, since the study showed that it was possible to digest proteins with free chymotrypsin within two hours. This is a short time compared to that found in the published papers requiring 12 to 24 hours for protein digestion when free enzymes in solution are used.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Propolis is a resinous material collected by bees from different parts of plants. Both its composition as its biological properties are dependent on factors such as climate, soil, vegetation and species of collecting bees. Propolis has great potential for therapeutic use due to its chemical composition and pharmacological properties. Herein it was determined the contents of phenolic compounds, antioxidant capacity and chemical composition (assessed by HPLC-PAD) of twelve green propolis samples from beekeepers and sixteen commercial propolis extracs from different regions of Southeast Brazil. The antioxidant abilities of the extracts were qualitatively determined through the total phenolic contents using the Folin?Ciocalteau method. Total flavonoids were assessed by the method of complexation with aluminium chloride. The quantitative antioxidant activiti of propolis extracts were determined both by trapping the organic radicals DPPH and ABTS.+ as well by the iron reduction method (FRAP). High pressure liquid chromatography allowed the identification and quantification of chlorogenic acid, caffeic acid, ferulic acid, para-coumaric acid, rosmarinic acid, vanillin, hesperidin, naringenin, pinobanksin, kaempferol, 4-hydroxy-3,5-diprenyl cinnamic acid (Artepillin-C), kampheride and pinostrobin. Artepillin C, a well known chemical marker of propolis, was present in all propolis extracts analyzed. We highlight that the presence of rosmarinic acid in propolis samples from Rio de Janeiro was reported for the first time in this work. The discrimination between green propolis in natura and commercial green propolis extracts was performed using PCA (Principal Component Analysis) statistical method. The antioxidant capacity in vivo of propolis extracts were evaluated using Saccharomyces cerevisiae as biological system model, assessing important parameters as stress tolerance and lipid peroxidation rate. The antifungal activity of ethanol extracts of propolis in natura were tested against the phytopathogenic fungus Fusarium oxysporium. / A pr?polis ? um material resinoso coletado pelas abelhas de diferentes partes das plantas, sua composi??o e as suas propriedades biol?gicas dependem do clima, solo, vegeta??o e da esp?cie da abelha. A pr?polis tem grande potencial de aplica??o terap?utica, devido ? sua composi??o e propriedades farmacol?gicas. Nesse trabalho foi determinado o teor de subst?ncias fen?licas, a capacidade antioxidante e composi??o qu?mica por CLAE-DAD de doze amostras de pr?polis verde, adquiridas de apicultores, e dezesseis extratos de pr?polis comerciais, provenientes de diferentes regi?es do Sudeste do Brasil. A capacidade antioxidante dos extratos foi avaliada qualitativamente atrav?s do teor de fen?licos totais, pelo m?todo de Folin?Ciocalteau, e flavonoides pelo m?todo de complexa??o com cloreto de alum?nio. A quantifica??o do potencial antioxidante foi realizada pela captura dos radicais org?nicos DPPH e ABTS.+, al?m do m?todo de redu??o do ?on f?rrico (FRAP). An?lises por cromatografia l?quida de alta efici?ncia permitiram a identifica??o e quantifica??o de ?cido clorog?nico, ?cido cafeico, ?cido fer?lico, ?cido para-cum?rico, ?cido rosmar?nico, ?cido 3,5-diprenil-4-hidroxicin?mico (Artepillin C), vanilina, hesperidina, naringenina, pinobanksina, canferol, canferide e pinostrobina. Em todos os extratos de pr?polis analisados foi identificado o Artepillin C, marcador qu?mico para pr?polis verde. Destacamos que neste trabalho foi reportada pela primeira vez a presen?a de ?cido rosmar?nico em pr?polis do Rio de Janeiro. M?todos quimiom?tricos de an?lise explorat?ria, utilizando ?nalise por Componentes Principais foram utilizados para discriminar extratos de pr?polis verde in natura daqueles extratos comerciais. O potencial antioxidante in vivo dos extratos etan?licos de pr?polis foram avaliados utilizando cepas controles de Saccharomyces cerevisiae como modelo de sistema biol?gico e foram avaliados toler?ncia ao estresse e proxida??o lip?dica. A atividade antif?ngica dos extratos etan?licos de pr?polis in natura foram avaliados, e inibiram o crescimento in vitro do fungo fitopat?geno Fusarium oxysporum.