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Previous issue date: 2016-12-12 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The cancer encompasses a huge range of different types, requiring several therapeutic approaches for control and/or remission. An approach that has been considered quite promising is the inhibition of the formation of the MDM2/p53 complex. The formation of this complex hinders the triggering of the apoptotic process. The example of the Nutlins, inhibitors of this complex, have stood out as promising prototype drugs and are already in the clinical phase of investigation. The compound LQFM030 originated from the molecular simplification of Nutlin-1, which has already demonstrated antitumor activity against the Ehrlich Ascites Tumor model. In this work, we investigated the cytotoxic effect of compound LQFM030 against the K562 leukemic line, as well as some mechanisms of cytotoxicity. In the evaluation of cytotoxicity using the trypan blue exclusion method, we obtained an IC 50 value of 0.56 mM, similar to results obtained previously. For the other mechanics assays, IC25 (0.283 mM) of compound LQFM030 and 0.01 mM of compound Nutlin-3a were used for treatment for 24 hours. The compound Nutlin-3a was used as the standard for comparison. Morphological analyzes of K562 cells after treatment with compound LQFM030 suggest core fragmentation and chromatin condensation, indicating apoptosis triggered cell death, which was confirmed by flow cytometric analyzes. In cell cycle investigation, LQFM030 treated K562 cells demonstrated increased sub-G1 phase, phosphatidylserine exposure, decreased membrane potential, increased expression of TNF-R1 and caspase -3/7 caspase -9; However, there was a decrease in caspase -8. In turn, the treatment of leukemic cells with Nutlin-3a did not promote changes in the cell cycle, exposure of phosphatidylserine corroborating with data from the literature. In conclusion the studied compound, LQFM030, presented important biological activity with the capacity to induce death in leukemic cells by apoptotic mechanisms and interaction with MDM2 and MDX. The compound presented mechanisms in some aspects similarities to Nutlin-3a, but also showed different mechanisms evidencing its versatility in its biological performance. The discovery of new agents with multiple mechanisms is of great importance to increase the therapeutic armamentarium of cancer in a complementary way and, in addition, it can enhance the effectiveness of the treatment. / O câncer engloba uma variedade enorme de tipos diferentes, sendo necessárias diversas abordagens terapêuticas para controle e/ou remissão. Uma abordagem considerada bastante promissora é a inibição da formação do complexo MDM2/p53. A formação deste complexo dificulta o desencadeamento do processo apoptótico. Já se encontra em fase clínica de investigação um exemplo promissor inibidor deste complexo, os Nutlins. O composto LQFM030 foi originado a partir da simplificação molecular do Nutlin-1, o qual já demonstrou atividade antitumoral contra o modelo do Tumor Ascitico de Ehrlich. Neste trabalho, investigamos mecanismos de citotoxicidade do composto LQFM030 na linhagem leucêmica K562. Na avaliação da citotoxicidade utilizando o método de exclusão do azul de tripano, obtivemos um valor de IC50 de 0,56 mM, similar a resultados obtidos anteriormente. Para os demais ensaios mecanisticos, foi utilizado o IC25 (0,283 mM) do composto LQFM030 e 0,01 mM do composto Nutlin-3a, para tratamento por 24 horas. O composto Nutlin-3a foi utilizado como padrão de comparação. As análises morfológicas das células K562 após o tratamento com o composto LQFM030 demonstrou fragmentação do núcleo e a condensação da cromatina, indicando morte celular desencadeada por apoptose, onde juntamente com citometria de fluxo indicam um processo de morte celular. Na investigação do ciclo celular, as células K562 tratadas com LQFM030 demonstraram um aumento da fase sub-G1, exposição da fosfatidilserina, diminuição do potencial de membrana mitocondrial, aumento da expressão de TNF-R1, caspases -3/7 e caspase -9; contudo, houve diminuição da caspase -8. Por sua vez, o tratamento das células leucêmicas com o Nutlin-3a não promoveu alterações no ciclo celular, exposição de fosfatidilserina corroborando com dados da literatura. Em conclusão o composto estudado, LQFM030, apresentou atividade biológica importante com capacidade de induzir morte em células leucêmica por mecanismos apoptoticos e interação com MDM2 e MDMX. O composto apresentou mecanismos em alguns aspectos semelhanças ao Nutlin-3a, porém também mostrou mecanismos distintos evidenciando a sua versatilidade em sua atuação biológica. A descoberta de novos agentes com múltiplos mecanismos é de grande importância para aumentar o arsenal terapêutico de combate ao câncer de forma complementar e, podendo ainda potencializar eficácia do tratamento.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/8746 |
| Date | 12 December 2016 |
| Creators | Ribeiro, Higor de Oliveira |
| Contributors | Valadares, Marize Campos, Cortez, Alane Pereira, Valadares, Marize Campos, Leite, Paulo Emílio Corrêia, Nascimento, Thaís Leite, Oliveira, Gisele Augusto Rodrigues de |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas (FF), UFG, Brasil, Faculdade Farmácia - FF (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 824936988196152412, 600, 600, 600, 600, 6010281161524209375, -742516873750689813, -961409807440757778 |
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