Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-07-30T13:03:21Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Higor de Oliveira Ribeiro - 2018.pdf: 2288061 bytes, checksum: f75a8ba35bba846fdef29be7d37b6794 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-07-30T14:01:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Higor de Oliveira Ribeiro - 2018.pdf: 2288061 bytes, checksum: f75a8ba35bba846fdef29be7d37b6794 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-30T14:01:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Higor de Oliveira Ribeiro - 2018.pdf: 2288061 bytes, checksum: f75a8ba35bba846fdef29be7d37b6794 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-12-12 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The cancer encompasses a huge range of different types, requiring several therapeutic approaches for control and/or remission. An approach that has been considered quite promising is the inhibition of the formation of the MDM2/p53 complex. The formation of this complex hinders the triggering of the apoptotic process. The example of the Nutlins, inhibitors of this complex, have stood out as promising prototype drugs and are already in the clinical phase of investigation. The compound LQFM030 originated from the molecular simplification of Nutlin-1, which has already demonstrated antitumor activity against the Ehrlich Ascites Tumor model. In this work, we investigated the cytotoxic effect of compound LQFM030 against the K562 leukemic line, as well as some mechanisms of cytotoxicity. In the evaluation of cytotoxicity using the trypan blue exclusion method, we obtained an IC 50 value of 0.56 mM, similar to results obtained previously. For the other mechanics assays, IC25 (0.283 mM) of compound LQFM030 and 0.01 mM of compound Nutlin-3a were used for treatment for 24 hours. The compound Nutlin-3a was used as the standard for comparison. Morphological analyzes of K562 cells after treatment with compound LQFM030 suggest core fragmentation and chromatin condensation, indicating apoptosis triggered cell death, which was confirmed by flow cytometric analyzes. In cell cycle investigation, LQFM030 treated K562 cells demonstrated increased sub-G1 phase, phosphatidylserine exposure, decreased membrane potential, increased expression of TNF-R1 and caspase -3/7 caspase -9; However, there was a decrease in caspase -8. In turn, the treatment of leukemic cells with Nutlin-3a did not promote changes in the cell cycle, exposure of phosphatidylserine corroborating with data from the literature. In conclusion the studied compound, LQFM030, presented important biological activity with the capacity to induce death in leukemic cells by apoptotic mechanisms and interaction with MDM2 and MDX. The compound presented mechanisms in some aspects similarities to Nutlin-3a, but also showed different mechanisms evidencing its versatility in its biological performance. The discovery of new agents with multiple mechanisms is of great importance to increase the therapeutic armamentarium of cancer in a complementary way and, in addition, it can enhance the effectiveness of the treatment. / O câncer engloba uma variedade enorme de tipos diferentes, sendo necessárias diversas abordagens terapêuticas para controle e/ou remissão. Uma abordagem considerada bastante promissora é a inibição da formação do complexo MDM2/p53. A formação deste complexo dificulta o desencadeamento do processo apoptótico. Já se encontra em fase clínica de investigação um exemplo promissor inibidor deste complexo, os Nutlins. O composto LQFM030 foi originado a partir da simplificação molecular do Nutlin-1, o qual já demonstrou atividade antitumoral contra o modelo do Tumor Ascitico de Ehrlich. Neste trabalho, investigamos mecanismos de citotoxicidade do composto LQFM030 na linhagem leucêmica K562. Na avaliação da citotoxicidade utilizando o método de exclusão do azul de tripano, obtivemos um valor de IC50 de 0,56 mM, similar a resultados obtidos anteriormente. Para os demais ensaios mecanisticos, foi utilizado o IC25 (0,283 mM) do composto LQFM030 e 0,01 mM do composto Nutlin-3a, para tratamento por 24 horas. O composto Nutlin-3a foi utilizado como padrão de comparação. As análises morfológicas das células K562 após o tratamento com o composto LQFM030 demonstrou fragmentação do núcleo e a condensação da cromatina, indicando morte celular desencadeada por apoptose, onde juntamente com citometria de fluxo indicam um processo de morte celular. Na investigação do ciclo celular, as células K562 tratadas com LQFM030 demonstraram um aumento da fase sub-G1, exposição da fosfatidilserina, diminuição do potencial de membrana mitocondrial, aumento da expressão de TNF-R1, caspases -3/7 e caspase -9; contudo, houve diminuição da caspase -8. Por sua vez, o tratamento das células leucêmicas com o Nutlin-3a não promoveu alterações no ciclo celular, exposição de fosfatidilserina corroborando com dados da literatura. Em conclusão o composto estudado, LQFM030, apresentou atividade biológica importante com capacidade de induzir morte em células leucêmica por mecanismos apoptoticos e interação com MDM2 e MDMX. O composto apresentou mecanismos em alguns aspectos semelhanças ao Nutlin-3a, porém também mostrou mecanismos distintos evidenciando a sua versatilidade em sua atuação biológica. A descoberta de novos agentes com múltiplos mecanismos é de grande importância para aumentar o arsenal terapêutico de combate ao câncer de forma complementar e, podendo ainda potencializar eficácia do tratamento.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-10-29T14:34:23Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Iury Valentim Jorge Zoghaib - 2013.pdf: 1607539 bytes, checksum: d92b3313edee2773935cb667be5b908d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-10-30T10:48:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Iury Valentim Jorge Zoghaib - 2013.pdf: 1607539 bytes, checksum: d92b3313edee2773935cb667be5b908d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-30T10:48:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Iury Valentim Jorge Zoghaib - 2013.pdf: 1607539 bytes, checksum: d92b3313edee2773935cb667be5b908d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-10-18 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The LQFM030 was obtained by molecular simplification of nutlins (inhibitors of p53-MDM2 interaction) and, having demonstrated excellent antineoplastic activity in vitro (cytotoxicity against K-562 cell line with IC50 = 23 M) and in vivo against Ehrlich ascitic tumor with increased survival in treated animals developed the pharmacokinetic study of p.o. in rats. It was used for LC-MS/MS analytical method (Applied Biosystems MDS Sciex API 3200) previously validated together. O LQFM030 was administered to 3 rats (mean weight 186g) in predetermined dose of 100 mg/kg by gavage. After administration, samples were collected from 1.0 mL of blood by cannulation of the left jugular vein with heparinized syringe, the intervals 0-8 h. The blood samples were identified and centrifuged to obtain plasma which was frozen at -20°C until analysis. The kinetic parameters were calculated in the software WinNonlin 5.0 (Pharsight™). Results (mean ± SD) half-life (t1/2) 3.61 ± 0.68 h, total clearance (CLT) 36.49 ± 2.23 mL/min/kg, volume of distribution (Vd) 11,40 ± 1.58 L/kg. The LQFM030 had low value of t1/2, Vd high and high value of CLT. These values allow us to understand that the prototype study demonstrated a good safety profile of tissue distribution and/or has been extensively eliminated. When compared with the kinetic parameters obtained in other studies, it was observed difference in results is justified by the high interspecies variability, mainly in basal metabolic rate and body weight, once the route of administration, orally and intraperitoneally, are kinetically similar. / O LQFM030 foi obtido por simplificação molecular dos nutlins (inibidores da interação MDM2-p53) e, tendo demonstrado excelente atividade antineoplásica in vitro (citotoxicidade contra a linhagem celular K-562 com IC50 = 23 M) e in vivo contra tumor ascítico de Ehrlich, com aumento de sobrevida em animais tratados, desenvolveu-se o estudo do perfil farmacocinético, p.o., em ratos. Empregou-se método analítico em LC-MS/MS (Applied Biosystems MDS Sciex API 3200) previamente validado em colaboração. O LQFM030 foi administrado a 3 ratos (peso médio de 186g), em dose preestabelecida de 100 mg/kg, por gavagem. Após a administração, foram coletadas amostras de 1,0 mL de sangue, por canulação da veia jugular esquerda, com seringa heparinizada, nos intervalos de tempo de 0 a 8 h. As amostras sanguíneas foram identificadas e centrifugadas para obtenção do plasma, que foi congelado a -20ºC até o momento da análise. Os parâmetros cinéticos foram calculados no software Winnonlin 5.0 (Pharsight™). Resultados (média ± DP): meia-vida (t1/2) 3,61 ± 0,68 h; clearance total (CLT) 36,49 ± 2,23 mL/min/kg; volume de distribuição (Vd) 11,40 ± 1,58 L/kg. O LQFM030 apresentou baixo valor de t1/2, elevado Vd e elevado valor de CLT. Estes valores permitem entender que o protótipo estudado demonstrou um bom perfil de distribuição tecidual e/ou foi extensivamente eliminado. Quando comparados com parâmetros cinéticos obtidos em outros estudos, observou-se diferença nos resultados, justificada pela elevada variabilidade interespécies, principalmente na taxa de metabolismo basal e peso corporal, uma vez que as vias de administração, oral e intraperitoneal, são cineticamente semelhantes.

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2016-11-17T16:34:28Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sandro Antônio Gomes - 2014.pdf: 4737361 bytes, checksum: f0e85ab14dec862e8af685d9be88c2db (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-11-21T20:36:03Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sandro Antônio Gomes - 2014.pdf: 4737361 bytes, checksum: f0e85ab14dec862e8af685d9be88c2db (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-21T20:36:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sandro Antônio Gomes - 2014.pdf: 4737361 bytes, checksum: f0e85ab14dec862e8af685d9be88c2db (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-11-05 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / A rapid, sensitive and selective liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC/MS-MS) bioanalytical method was developed and validated to quantify LQFM018 and LQFM030 prototypes obtained by molecular simplification nutlins (inhibitors of MDM2-p53 interaction) in mouse, rat and human plasma. The prototypes and the internal standard domperidone were extracted from the plasma samples by liquid-liquid extraction using methyl tert-butyl ether. The chromatographic analysis was performed using ACE ® C18 analytical column (5µm 100 x 4.6 mm) for a total time of 4 minutes. In MRM method transitions (m/z) were used: 349.138/191.10, 319.162/191.20 and 426.032/175.20 Daltons to LQFM018; LQFM030 and internal standard, respectively. The mobile phase consists of methanol-2 mM ammonium acetate containing 0.025% formic acid. The calibration curve was linear over the concentration range examined 10- 15000 ng/mL with r> 0.99 and the limit of quantitation of 10 ng/mL for both prototypes. For LQFM018, intra-assay precision was 0.8 to 7.3% and accuracy from 96.8 to 105.8%. And inter-assay to the precision was 2.3 and 6.6% and accuracy was 99.3 to 104.3%. The average recovery was 65.0% and the matrix effect between -11.2 to 2.1%. To LQFM030, intra-assay precision was 0.6 to 5.5% and accuracy from 95.5 to 111.3%. Inter-assay precision was 1.8 to 6.7%, and accuracy was 99.0 to 107.0%. The average recovery was 74.1% and the matrix effect from -7.9 to 1.5%. Recovery for internal standard was 61.3%. The prototypes were considered stable in the biological matrix and the solution proposed tests. Thus, the analytical method was developed and validated is capable to quantify traces of concentration in plasma. / Uma técnica bioanalítica rápida, sensível e seletiva que utiliza cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas em sequência foi desenvolvida e validada para quantificar os protótipos LQFM018 e LQFM030 obtidos por simplificação molecular de nutlins (inibidores da interação MDM2-p53) em plasma de camundongo, rato e humano. Os protótipos e o padrão interno (PI) domperidona foram extraídos das amostras de plasma por meio de extração líquido-líquido utilizando éter metil-tercbutílico. A análise cromatográfica foi executada utilizando-se coluna analítica ACE® C18 (5 µm, 100 x 4,6 mm) num tempo total de 4 minutos. Na técnica MRM foram utilizadas as transições (m/z) 349,138/191,10; 319,162/191,20; 426,032/175,20 Daltons para LQFM018; LQFM030 e padrão interno, respectivamente. A fase móvel consistiu-se da mistura de metanol e acetato de amônio 2 mM contendo 0,025% de ácido fórmico. A curva de calibração foi linear em toda a faixa de concentração analisada 10-15000 ng/mL com r > 0,99 e o limite de quantificação de 10 ng/mL para ambos os protótipos. Para o LQFM018, a precisão intraensaio, foi de 0,8 a 7,3% e exatidão de 96,8 a 107,6% e a precisão interensaio foi de 2,3 a 6,6% e a exatidão foi de 99,3 a 104,3%. A recuperação média foi 65,0% e o efeito matriz entre -11,2 a 2,1%. Para LQFM030, a precisão intraensaio foi de 0,6 a 5,5% e exatidão de 95,5 a 111,3%. A precisão interensaio foi de 1,8 a 6,7% e exatidão foi de 99,0 a 107,0%. A recuperação média foi 74,1% e o efeito matriz entre -7,9 a 1,5%. A recuperação para o padrão interno foi 61,3%. Os protótipos se mostraram estáveis na matriz biológica e em solução nos ensaios propostos. Sendo assim, a técnica bioanalítica desenvolvida e validada é capaz de quantificar traços de concentrações dos protótipos LQFM018 e LQFM030 em plasma.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-01-11T17:21:26Z No. of bitstreams: 2 Tese - Flávio Silva de Carvalho - 2015.pdf: 7229360 bytes, checksum: c61e47d7d8698a2f433f115ce5265cb2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-12T10:00:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Flávio Silva de Carvalho - 2015.pdf: 7229360 bytes, checksum: c61e47d7d8698a2f433f115ce5265cb2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-12T10:00:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Flávio Silva de Carvalho - 2015.pdf: 7229360 bytes, checksum: c61e47d7d8698a2f433f115ce5265cb2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-03-10 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Neoplasmas have been a major cause of death worldwide, with that the search for new candidates for prototypes of more effective anti-tumor drugs, safe and with fewer side effects when compared to those already available already in therapy, it is essential and fundamental importance. With this research goal, we developed the design, synthesis and pharmacological evaluation in order to obtain new candidate of heterocyclic antitumor drugs prototypes (46a-46Q, 48a-48s, 51a-51m, 50m-50a, 53b, 54b, 56b and 58b) and vectorized micronutrient (60) and nanostructures (63) drawn from LQFM 030 (37) prototypes, in that it (37) was obtained by simplifying molecular strategy nutlin from compound (34) . The route chosen to obtain the heterocyclic compounds (46Q-46a, 48a-48s, 51a-51m, 50m, 50a, 53b, 54b, 56b and 58b) resulted in yields ranging from 32-77%, where all synthesized compounds were elucidated through the use of Nuclear Magnetic Resonance dimensional and two-dimensional (NMR) and Infrared (IR). Two methodologies have been developed (A and B) for the synthesis of intermediate pyrazole compounds and formylated acid, wherein the first method was conventional and the second was by heating with microwaves, which have obtained gain in time and / or increasing the yield of these synthetic steps when comparing with the conventional method (A). The synthesized compounds were tested for cytotoxicity assays by MTT method on the cell line K562 leukemic ie, and B16F10 melanoma ie, where the cytotoxic profile was evaluated using the IC50 = 70 uM for K562 cells and IC 50 = 64, 7 uM to line B16F10, both using an exposure time of 48 hours. K562 cells for six compounds LQFM ie 88, 108, 165, 166, 168 and 169 showed higher cytotoxic profile when compared to the prototype LQFM030 compound (37). Regarding the B16F10 line, six other compounds LQFM ie 126, 127, 165, 166 and 169 showed a better cytotoxic profile when compared to the prototype compound LQFM030. Given the results, we can conclude that the planning strategy employed to obtain the study compounds was validated, and against the cytotoxic research profile of 46a-46Q, 48a-48s, 51a- 51m, 50m-50a, 53b, 54b , 56b and 58b, and have a perspective vectorization and nanostructuring of the best compounds evaluated for each type of cell line K562 and B16F10 ie, aiming at optimizing the antitumor activity / As neoplasias têm sido uma das principais causas de morte no mundo, com isso a busca de novos candidatos a protótipos de fármacos antitumorais mais efetivos, seguros e que apresentem menos efeitos colaterais, quando já comparados aos já disponíveis na terapêutica, é imprescindível e de fundamental importância. Com esse objetivo de pesquisa, foi desenvolvido o planejamento, síntese e avaliação farmacológica visando a obtenção de novos candidatos a protótipos de fármacos antitumorais heterocíclicos (46a-46q, 48a-48s, 51a-51m, 50a-50m, 53b, 54b, 56b e 58b), e vetorizados com micronutrientes (60) e nanoestruturados (63), desenhados a partir dos protótipos LQFM 030 (37), em que este (37) foi obtido por meio de estratégia de simplificação molecular a partir do composto Nutlin (34). A rota eleita para a obtenção dos compostos heterocíclicos (46a- 46q, 48a-48s, 51a-51m, 50a-50m, 53b, 54b, 56b e 58b) resultou em rendimentos que variaram entre 32-77 %, onde todos os compostos sintetizados foram elucidados através do emprego de Ressonância Magnética Nuclear Unidimensionais e Bidimensionais (RMN) e Infravermelho (IV). Foram desenvolvidas duas metodologias (A e B), para a síntese dos compostos intermediários pirazola, formilado e ácido, em que a primeira metodologia foi a convencional e a segunda foi por meio de aquecimento com micro-ondas, onde obtivemos ganho em tempo e/ou aumento no rendimento dessas etapas sintéticas ao serem comparadas com a metodologia convencional (A). Os compostos sintetizados foram submetidos aos ensaios de citotoxicidade pelo método MTT, sobre a linhagem celular K562 i.e. leucêmica, e B16F10 i.e. melanoma, onde o perfil citotóxico foi avaliado utilizando-se do IC50= 70 µM para a linhagem K562 e IC50=64,7 µM para a linhagem B16F10, ambos utilizando um tempo de exposição de 48h. Para a linhagem K562, seis compostos i.e. LQFM 88, 108, 165, 166, 168 e 169 apresentaram melhor perfil citotóxico, quando comparado ao composto protótipo LQFM030 (37). Com relação à linhagem B16F10, outros seis compostos i.e. LQFM 126, 127, 165, 166 e 169 demonstraram um melhor perfil citotóxico ao serem comparados ao composto protótipo LQFM030. Diante dos resultados obtidos, podemos concluir que a estratégia de planejamento empregada para a obtenção dos compostos de estudo foi validada, e face ao perfil de investigação citotóxico dos 46a-46q, 48a-48s, 51a-51m, 50a-50m, 53b, 54b, 56b e 58b, e têm-se como perspectiva a vetorização e nanoestruturação dos melhores compostos avaliados para cada tipo de linhagem celular i.e. K562 e B16F10, visando à otimização da atividade antitumoral