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Previous issue date: 2015-03-11 / CNPQ / A iniciação da síntese protéica em eucariotos depende da ação dos chamados fatores de iniciação da tradução ou eIFs. Dentre esses, destacam-se dois complexos: eIF4F, formado pelos eIF4A, eIF4E e eIF4G; e eIF3, que em mamíferos compreende 13 subunidades (eIF3a até eIF3m). Suas ações permitem o reconhecimento dos mRNAs, via eIF4E, e o recrutamento do ribosomo, mediado pelo eIF3 que por sua vez interage com o eIF4F. Em espécies de Leishmania seis homólogos de eIF4E foram identificados (EIF4E1 a 6) que parecem divergir funcionalmente enquanto o complexo eIF3 ainda é pouco caracterizado. Este trabalho buscou avaliar a presença, composição e função do eIF3 em Leishmania. Um total de 11 subunidades do complexo foram confirmadas a partir de ensaios de imunoprecipitação (IP) e espectrometria de massa utilizando soro direcionado a subunidade EIF3E. Visando uma melhor caracterização, seis dessas subunidades tiveram seus genes clonados e foram expressas em L. infantum, fusionadas ao peptídeo HA. Quatro destas proteínas heterólogas foram utilizados em novas IPs, com soro anti-HA, onde se avaliou sua capacidade de copurificar com o EIF3E. Todas mostraram essa interação, confirmando sua presença em complexos eIF3 íntegros. Homólogos de eIF4E de L. infantum também foram expressos fusionados a HA e utilizados em IPs semelhantes. Dois destes, EIF4E2 e EIF4E3, mostraram uma associação, direta ou indireta, com a subunidade EIF3E do complexo eIF3, indicando um papel relevante na tradução. / The initiation of protein synthesis in eukaryotes depends on the action of the translation initiation factors or eIFs. Among these, two major complexes are: eIF4F, formed by eIF4A, eIF4E and eIF4G; and eIF3, which comprises 13 subunits in mammals (eIF3a to eIF3m). Their actions allow the recognition of mRNAs via eIF4E, and the recruitment of the ribosome, mediated by eIF3 which interacts with eIF4F. In Leishmania species, six eIF4E homologues have been identified (EIF4E1 to 6) that seem to differ functionally, and the eIF3 complex is not well characterized. This study aimed to evaluate the presence, composition and function of eIF3 in Leishmania. A total of 11 subunits from the complex were confirmed through immunoprecipitation assays (IP) and mass spectrometry using serum directed to the EIF3E subunit. For a better characterization, six of these subunits had their genes cloned and expressed in L. infantum, fusioned to a HA peptide. Four of the resulting heterologous proteins have been used in new IPs with anti-HA serum, which were evaluated for their ability to copurify with EIF3E. All showed this interaction, confirming their presence in intact eIF3 complexes. L. infantum eIF4E homologues were also expressed fusioned to HA and used in similar IPs. Two of these, EIF4E2 and EIF4E3 showed an association, direct or indirect, with the EIF3E subunit of eIF3 complex, indicating a relevant role during translation initiation.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/16832 |
| Date | 11 March 2015 |
| Creators | ASSIS, Ludmila Arruda de |
| Contributors | MELO NETO, Osvaldo Pompilio de, LIMA, Tamara De Carli da Costa |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Genetica, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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