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Previous issue date: 2010 / Fiocruz / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Introdução: A imunidade mediada por células tem um papel importante na resposta imune do hospedeiro à
Leishmania. Em pacientes com leishmaniose cutânea, a presença de células ativadas tem sido correlacionada
positivamente com o tamanho das lesões. Já a atividade citolítica de células T CD8 + vem sendo associada ao
dano tecidual e à gravidade da forma mucosa. No entanto, não se sabe o perfil fenotípico induzido nas células de
indivíduos clinicamente curados quando estes reencontram os antígenos de Leishmania. Objetivo: Identificar
perfis imunológicos associados à cura clínica na leishmaniose cutânea, com foco na análise das características
fenotípicas e funcionais de linfócitos T específicos para a Leishmania. Materiais e Métodos: Foram estudados
26 indivíduos curados de leishmaniose cutânea (LCC) divididos em dois grupos de acordo com o tempo de cura:
(i) menor que 2 anos (<2 anos, n=13) e (ii) 2 a 5 anos (2-5 anos, n=13). Como grupo controle, foram utilizados
12 indivíduos sadios (IS) sem histórico prévio de leishmaniose. As células mononucleares do sangue periférico
foram analisadas ex vivo e após cultivo in vitro na presença de antígenos de Leishmania (Ag-Lb). Foi analisada a
expressão de moléculas de superfície relacionadas ao fenótipo dos linfócitos (CD3, CD4 e CD8), ao fenótipo
funcional dos linfócitos de memória central (TMC) ou de memória efetora (TME) - (CCR7 e CD45RO), à ativação
(CD69 e CD25), à citotoxicidade (C1.7) e à migração linfocitária (CLA). Essas moléculas foram avaliadas
dentro da subpopulação de células T CD4+ e T CD8+. Resultados: A média da razão TCD4+/TCD8+ nos
pacientes LCC foi similar nas células ex vivo e nas células estimuladas por Ag-Lb. Nos LCC, houve um aumento
significativo do percentual de células CD25+ e CD69+ em T CD4+ e em T CD8+ após o estímulo com Ag-Lb.
Houve uma correlação negativa entre o tempo de cura e o percentual de células T ativadas pelo antígeno (CD25 +
e CD69+). Nos pacientes LCC, o percentual de linfócitos TME em CD4+ e CD8+ aumentou após o estímulo com
Ag-Lb, quando comparado com as células ex vivo. Já o percentual de células TMC não se modificou. O percentual
de células C1.7+ dentro de T CD8+ e de células CLA+ em T CD4+ e T CD8+ foi similar na análise de células ex
vivo e após estímulo com Ag-Lb, em pacientes LCC. Nos IS, não foi observado aumento do percentual de
células T para nenhuma das moléculas avaliadas, quando comparadas às células ex vivo e estimuladas com Ag-
Lb. Conclusão: À medida que aumenta o tempo de cura clínica, há uma redução de moléculas associadas à
ativação tanto em linfócitos T CD4+ quanto em T CD8+. Esses indivíduos apresentam um aumento de células de
ME que poderiam participar no controle dos parasitos caso ocorra uma reinfecção. Além disso, as células
expandidas não apresentaram moléculas de superfície relacionadas à citotoxicidade ou migração para a pele.
Considerando que os pacientes curados possuem um padrão de resposta imunoprotetor, tal padrão pode ser
considerado um parâmetro importante para a seleção de antígenos candidatos para uma vacina. / Introduction: The cell-mediated immunity plays an important role in the immune response of the host to
Leishmania. In cutaneous leishmaniasis patients, the presence of activated cells has been positively correlated
with lesion size. The cytolytic activity of T CD8+ cells has been associated with tissue damage and the severity
of mucosal form. However, the phenotypic profile induced in cells of clinical cured individuals, when they are
exposed to Leishmania antigens again, is not known. Objective: Identify imunological profiles associated with
clinical cure in cutaneous leishmaniasis, with emphasis on phenotypical and functional characteristics of
Leishmania-specific T cells. Materials and Methods: In the study, 26 individuals cured from cutaneous
leishmaniasis (CCL) were divided in two groups according to the time of cure: (i) less than 2 years (<2 years,
n=13) and (ii) from 2 to 5 years (2-5 years, n=13). As the control group, 12 healthy subjects (HS) without
previous history of leishmaniasis were used. Peripheral blood mononuclear cells were evaluated ex vivo and after
in vitro culture in the presence of Leishmania antigens (Lb-Ag). It was analysed the expression of surface
molecules related with lymphocytes phenotype (CD3, CD4 and CD8), functional phenotype of central memory
(TCM) or effector memory lymphocytes (TEM) - (CCR7 and CD45RO), activation (CD69 and CD25), citotoxicity
(C1.7) and lymphocyte migration (CLA). These molecules were evaluated within subpopulations of CD4 + and
CD8+ T cells. Results: The mean ratio T CD4+/T CD8+ in CCL patients was similar in ex vivo cells and in Lb-Ag
stimulated cells. In CCL, there was a significant increase in the percentual of CD25 + and CD69+ in CD4+ and in
CD8+ T cells after Lb-Ag stimulus. There was a negative correlation between the time of cure and the percentual
of T cells activated by the antigen (CD25+ and CD69+). In CCL patients, the percentual of TEM lymphocytes in
CD4+ and in CD8+ increased after Lb-Ag stimulus, when compared to ex vivo cells. The percentual of TMC cells
has not altered. The percentual of C1.7+ cells within CD8+ T cells and CLA+ in CD4+ and in CD8+ T cells was
similar to the analysis of ex vivo cells and after Lb-Ag stimulus, in CCL patients. In the HS, it was not observed
an increase in the percentual of T cells in any of the molecules analised, when comparing ex vivo to Lb-Ag
stimulated cells. Conclusions: As the time of cure increases, there is a decrease of molecules related to
activation in both CD4+ and CD8+ T cells. These individuals present an increase in EM cells that could take part
in the parasite control in case of reinfection. Moreover, expanded cells have not presented surface molecules
related to citotoxicity or migration to skin. Considering that cured patients have a imunoprotective response
profile, such profile should be considered as an important parameter for selection of antigen candidates for the
development of a vaccine.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/5618 |
| Date | January 2010 |
| Creators | Carvalho, Regina Pereira |
| Contributors | Pinto, Luzia Maria de Oliveira, Pinheiro, Roberta Olmo, Gollob, Kenneth John, Santos, Álvaro Luiz Bertho dos, Cruz, Alda Maria da |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | Regina Pereira Carvalho, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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