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Previous issue date: 2012 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O objetivo do experimento foi testar a eficácia de diferentes diluidores, a base de Ringer-Lactato, Leite Desnatado, TRIS (hidroxi-methil-amino-methan) e Lactose/TRIS,
na criopreservação de sêmen bubalino. Foram utilizados três machos bubalinos da raça
Murrah em plena atividade sexual. O sêmen foi colhido por vagina artificial totalizando
71 ejaculados. Após a colheita, cada amostra foi submetida às análises qualitativas e
quantitativas do sêmen. Os ejaculados foram fracionados e diluídos nos quatro
diluidores. O sêmen diluído foi envasado em palhetas de 0,25ml e submetidos a um
tempo de equilíbrio de até quatro horas a 5ºC, com posterior congelação em nitrogênio
líquido. As amostras identificadas foram descongeladas em banho maria à temperatura
de 40°C por 30 segundos e seqüencialmente avaliadas quanto a motilidade, vigor, lesão
de acrossoma, e percentual de patologias espermáticas. As amostras também foram
submetidas ao teste de termo-resistência, permanecendo incubadas à temperatura de
40°C durante 30 segundos, 3-5 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas e 3 horas, onde
foram avaliadas quanto a motilidade e o vigor espermático. As características físicoquímicas,
após análise do sêmen in natura, encontraram-se dentro dos valores
preconizados para a espécie bubalina e satisfatórios para o processo de congelação.
Após descongelação do sêmen, observou redução numérica estatística (p<0,05) na
motilidade espermática, sendo que no sêmen in natura se observou 86,67±6,17%
reduzindo para 70±6,92% em TRIS, 67,4±8,01% em Ringer/lactato, 67,09±9,03% em
Lactose/TRIS e 59,7±9,05% em leite desnatado e ao comparar entre os quatro
tratamentos apenas o Leite desnatado mostrou diferença estatística significativa
(p<0,05). Após descongelação, o vigor espermático também diminuiu estatisticamente
(p<0,05) nos quatro tratamentos (3,50±0,53 TRIS; 3,38±0,49 Ringer-lactato; 3,3±0,46
Lactose/TRIS e 3,25±0,44 Leite desnatado) versus (4±0,39 sêmen in natura) e ao
comparar entre os tratamento, apenas entre Leite desnatado e TRIS se observou
diferença estatística (p<0,05). Quanto aos defeitos maiores (4,15±1,9% sêmen in
natura; 10,51±4,4% TRIS; 11,94±4,2% Ringer-Lactato; 11,88±4,8% Lactose/TRIS;
12,01±5% Leite desnatado), menores (3,81±1,2% sêmen in natura; 4,67±1,1% TRIS;
4,98±1,7% Ringer-Lactato; 4,93±2,0% Lactose/TRIS; 4,93±2,0% Leite desnatado) e
totais (7,91±2,1% sêmen in natura; 15,18±4,7% TRIS; 16,92±4,8% Ringer-Lactato;
16,82±5,6% Lactose/TRIS; 17,11±5,6% Leite desnatado), após descongelação houve
aumento significativo dos defeitos nos quatro tratamentos (p<0,05), e entre eles não
foram observadas diferenças estatísticas entre si (p>0,05). Na fase pós-TTR, após 3
horas de incubação, a motilidade progressiva (TRIS 21,13±7,5%; Ringer-Lactato
20,78±7,4%; Lactose/TRIS 20,25±5,3%; Leite desnatado 20,12±6,6%) e vigor
espermático (TRIS 2,04±0,5; Ringer-Lactato 2,07±0,5; Lactose/TRIS 2,02±0,4; Leite
desnatado 2,00±0,5) não apresentaram diferença estatística entre os tratamentos
(p<0,05). Quanto a intergridade do acrossoma, após a descongelação (Sêmen in natura
97,85±0,6%; TRIS 91,65±4,3%; Ringer-Lactato 90,46±4,8%; Lactose/TRIS
89,76±5,4%; Leite desnatado 90,56±5,6%), houve diminuição estatística (p<0,05) e
quando se comparou tal parâmetro entre os tratamentos não foi observado diferenças
estatísticas significativas entre os tratamento (p>0,05). Diante dos resultados observados
é possível concluir que a congelação de sêmen de búfalo com os diluidores TRIS (Trishydroxy-
methyl-amino-methan), Ringer-Lactato, Lactose/TRIS, e Leite desnatado
mostraram satisfatória função de crioproteção na viabilidade espermática do sêmen nas
diferentes etapas da criopreservação. / The objective of this experiment was to test the effectiveness of different extenders, the
basis of Ringer Lactate, Skim Milk, TRIS (hydroxymethyl-amino-methil Methan) and
Lactose/TRIS, the cryopreservation of buffalo semen. We used three male Murrah
buffaloes in full sexual activity. The semen was collected by artificial vagina total of 71
ejaculates. After harvest, each sample was subjected to qualitative and quantitative
analyzes of semen. The ejaculates were split and diluted in four extenders. The diluted
semen was stored in straws of 0,25 mL and subjected to an equilibration time of up to
four hours at 5°C, with subsequent freezing in liquid nitrogen. The identified samples
were thawed in a water bath at a temperature of 40°C for 30 seconds and subsequently
evaluated for motility, vigor, acrosome damage, and percentage of sperm pathologies.
The samples were also tested with heat-resistance, while remaining incubated at 40°C
for 30 seconds, 3-5 minutes, 30 minutes, 1 hour, 2 hours and 3 hours, which were
evaluated for motility and spermatic . The physico-chemical, after fresh semen analysis,
were within the prescribed values for buffaloes and satisfactory for the freezing process.
After thawing the semen, observed numerical reduction (p<0,05) in sperm motility, with
fresh semen was found 86,67±6,17% decreasing to 70±6,92% in TRIS, 67,4±8,01% in
Ringer/lactate, 67,09±9,03% in Lactose/TRIS and 59,7±9,05% in skim milk and to
compare between the four treatments only the skimmed milk showed a statistically
significant difference (p<0,05). After thawing, spermatic vigor also decreased
significantly (p<0,05) in four treatments (3,50±0,53 TRIS, 3,38±0,49 Ringer's lactate,
3,3±0,46 Lactose/TRIS and 3,25±0,44 Skim milk) versus (4±0,39 fresh semen) and
when comparing between treatment, only between skimmed milk and TRIS was no
statistical difference (p<0,05). As for the larger defects (4,15±1,9% fresh semen;
10,51±4,4% TRIS, 11,94±4,2% Ringer's lactate, 11,88±4,8% Lactose/TRIS; 12,01±5%
skim milk), smaller (3,81±1,2% fresh semen and 4,67±1,1% TRIS, 4,98±1,7% Ringer's
lactate, 4,93±2,0% Lactose/TRIS, 4,93±2,0% skimmed milk) and total (7,91±2,1%
fresh semen; 15,18±4,7% TRIS, 16,92±4,8% Ringer's lactate, 16,82±5,6%
Lactose/TRIS, 17,11±5,6% skimmed milk), after thawing showed a significant increase
of defects in the four treatments (p<0,05), and among them were not statistically
different between groups (p>0,05). In the post-TTR after 3 hours of incubation,
progressive motility (21,13±7,5% TRIS; Ringer lactate 20,78±7,4%; Lactose/TRIS
20,25±5,3%; Skimmed milk 20,12±6,6%) and spermatic vigor (TRIS 2,04±0,5, Ringer
Lactate 2,07±0,5, Lactose/TRIS 2,02±0,4, 2 skim milk, 2,00±0,5) showed no statistical
difference between treatments (p<0,05). As for intergridade acrosome after thawing
(semen in natura 97,85,±0,6%; TRIS 91,65±4,3%, Ringer-Lactate 90,46±4,8%;
Lactose/TRIS 89,76±5,4%; Skimmed milk 90,56±5,6%), decreased (p<0,05) and when
comparing this parameter between treatments was not observed statistically significant
differences between the treatment (p>0,05). Given the observed results we conclude that
the freezing of buffalo semen extenders with TRIS (Tris-hydroxy-methyl-amino-
Methan), Ringer Lactate, Lactose / TRIS and skimmed milk showed satisfactory
function in cryoprotection of sperm viability semen in different stages of
cryopreservation.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpa.br:2011/5219 |
| Date | 29 February 2012 |
| Creators | MIYASAKI, Michel Yoshio Almeida |
| Contributors | VALE, William Gomes |
| Publisher | Universidade Federal do Pará, Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária, Universidade Federal Rural da Amazônia, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, UFPA, EMBRAPA, UFRA, Brasil, Campus Universitário de Castanhal |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPA, instname:Universidade Federal do Pará, instacron:UFPA |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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