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Previous issue date: 2009-05-11 / Leptospirosis is a zoonotic disease caused by pathogenic bacteria belonging
to the Leptospira genus. Several mammals may carry the agent, and rats are the
most important source of human infection in urban settings. The wide spectrum of
clinical manifestations varies from mild cases, with fever and headaches, to severe
presentations, with liver and kidney failure, which may lead to death. As a result of
the various degrees of severity, leptospirosis is frequently mistaken, in its acute
stage, with other tropical diseases such as influenza and dengue. The microscopic
agglutination test (MAT) is considered the gold standard when diagnosing
leptospirosis; however, the test presents limitations regarding sensitivity in the acute
phase of the disease. Recently, surface proteins LigA and LigB have been identified
to be related with leptospiral virulence. These proteins have been characterized as
adhesins, with a proteic structure similar to Escherichia coli intimin and Yersinia
pseudotuberculosis invasin, which are important virulence factors in these organisms.
The goal of this study was to produce and characterize monoclonal antibodies
(MAbs) against a truncated fragment of approximately 54 kDa, named rLigBrep, that
comprise a identical portion of LigA and LigB (domains 2-7). The 5 MAbs obtained
were of the IgG1 (2) and IgG2b (3) isotypes and their affinity constants for rLigBrep
varied from 7 x 107 M-1 to 4 x 108 M-1. The MAbs were able to react with the native
antigen in L. interrogans serovar Copenhageni strain Fiocruz L1-130 by indirect
immunofluorescence, immunoblotting, whole-cell ELISA and immunoelectron
microscopy. These results allow concluding that these MAbs are important tools for
studies aiming understanding the role of Lig proteins in Leptospira pathogenesis and
in the development of tests for diagnosis of leptospirosis. / A leptospirose é uma zoonose causada por bactérias patogênicas
pertencentes ao gênero Leptospira. Diversos mamíferos podem albergar o agente,
sendo o rato a principal fonte de infecção para humanos no ambiente. As
manifestações clínicas da doença variam desde os sintomas leves, como febre e
dores de cabeça, até os mais graves com insuficiência renal e hepática que podem
levar o indivíduo à morte. Esse amplo espectro de sintomas faz com que a
leptospirose seja freqüentemente confundida em sua fase aguda com outras
doenças febris, como gripe e dengue. O teste de aglutinação microscópica (MAT) é
considerado o padrão ouro para o diagnóstico laboratorial da leptospirose,
entretanto, o teste apresenta limitações relacionadas com a sensibilidade na fase
aguda da doença. Recentemente, as proteínas de superfície LigA e LigB foram
identificadas e relacionadas com a virulência de leptospiras patogênicas. Estas
proteínas foram caracterizadas como adesinas, possuindo estrutura protéica
semelhante a intimina de Escherichia coli e invasina de Yersinia pseudotuberculosis, que
são importantes fatores de virulência nestes microrganismos. O objetivo desse
estudo foi produzir e caracterizar anticorpos monoclonais (MAbs) contra um
fragmento truncado de aproximadamente 54 kDa, que codifica a região idêntica das
proteínas LigA e LigB (domínios 2-7), denominado rLigBrep. Foram obtidos 5 MAbs
dos isotipos IgG1 (2) e IgG2b (3), com afinidades por rLigBrep que variaram entre 7
x 107 M-1 e 4 x 108 M-1. Foi comprovado através de imunofluorescência indireta,
immunoblotting, ELISA whole-cell e microscopia imunoeletrônica que os MAbs foram
capazes de detectar o antígeno nativo presente em L. interrogans sorovar
Copenhageni cepa Fiocruz L1-130. Estes resultados permitem concluir que os MAbs
produzidos são importantes ferramentas para serem utilizados em estudos que
visam entender o papel das proteínas Lig na patogênese das leptospiras e em testes
diagnósticos para leptospirose.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:123456789/1263 |
| Date | 11 May 2009 |
| Creators | Monte, Leonardo Garcia |
| Contributors | CPF:15711986600, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783342J3&dataRevisao=null, Leite, Fabio Pereira Leivas, CPF:20732660025, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763076J5, Aleixo, José Antonio Guimarães |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFPel, BR, Biotecnologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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