Alper e colaboradores demonstraram que a linhagem BY4741 recombinante portadora de cópias adicionais de um alelo SPT15 mutagenizado em três diferentes posições (spt15-300) utiliza mais rapidamente a glicose e aumenta a produção de etanol. Neste trabalho, foi realizada a clonagem deste alelo, aqui chamado spt15*. Inicialmente o DNA genômico da linhagem S. cerevisiae S288C foi utilizado como molde para amplificação por SOEing-PCR. O alelo spt15* foi clonado no plasmídeo pGEMT-Easy e, em seguida, introduzido no plasmídeo epissomal pMA91. Após construções moleculares, foi obtido o fragmento de DNA dpPGKspt15*tPGKd, empregado na transformação genética, da linhagem S. cerevisiae YPH252, por d-integração. Os clones recombinantes YHP252/pMA91spt15* e YHP252/dpPGKspt15*tPGKd consomem mais eficientemente a glicose e aumentam a produção de etanol. O seqüenciamento do alelo SPT15 da levedura industrial PE-2 revelou 100% de identidade com o alelo das linhagens BY4741 e S288C, criando ótimas perspectivas para trabalhos futuros. / Alper and colleagues demonstrated that the yeast S. cerevisiae BY4741 recombinant strain carrying additional copies of a SPT15 allele mutagenized in three different positions (spt15-300) uses glucose more speedily and produces more ethanol. In this work, this allele, here called spt15*, was cloned. The genomic DNA of the S. cerevisiae S288C strain was used for amplification through SOEing-PCR. The spt15* allele was cloned in the plasmid pGEMT-Easy and introduced in the episomal plasmid pMA91. After molecular constructions the DNA dpPGKspt15*tPGKd fragment was obtained to be employed in the genetic transformation of laboratory S. cerevisiae strains using d-integration. Both recombinant clones YHP252/pMA91spt15* and YHP252/dpPGKspt15*tPGKd consume glucose more speedily and produce more ethanol. The sequencing of the SPT15 allele of the industrial yeast PE-2 revealed 100% identity with BY4741 and S288C alleles, creating huge perspectives for future works.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-15092011-142026 |
| Date | 03 May 2011 |
| Creators | Dalmolin, Keina Poliana Pivarro |
| Contributors | Vicente, Elisabete Jose |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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