Made available in DSpace on 2014-06-12T18:04:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5587_1.pdf: 1696084 bytes, checksum: cd6a790cc623fff1e18807d3c5d4b618 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / A Tuberculose (TB) é uma patologia cujo diagnóstico precoce e tratamento adequado são essenciais para a eficácia dos programas públicos de controle da doença, os quais buscam curar os doentes e evitar a transmissão da doença. O diagnóstico laboratorial envolve a baciloscopia realizada com auxílio da coloração de Ziehl- Neelsen, uma metodologia rápida, barata e acessível, com uma sensibilidade de 104 bacilos/ml e a cultura que é mais sensível mas cujo resultado pode demorar entre 9 a 45 dias. Para o diagnóstico de tuberculose espera-se que as técnicas de amplificação genéticas melhorem a velocidade, sensibilidade e especificidade para a detecção de micobactérias. Neste sentido foram objetos deste estudo o desenvolvimento de uma técnica molecular para diagnóstico de tuberculose paucibacilar e a caracterização genotípica de isolados de Mycobacterium tuberculosis (M.tb). Uma reação de heminested PCR voltada para o diagnóstico de tuberculose e utilizando como alvo, o marcador genético IS6110, foi elaborada a partir de criteriosa escolha de primers e condicões ideais de concentração dos primers e cloreto de magnésio e de temperaturas de anelamento. A sensibilidade da técnica foi de 30 fg e pode ser concluída em até 3 dias após a coleta de amostras biológicas para análise. Comparada com a PCR convencional, a heminested PCR aumenta a sensibilidade e especificidade, o que é importante, especialmente nas amostras biológicas paucibacilares. Os resultados da caracterização genotípica de 61 isolamentos de M.tb obtidos durante os anos de 2000 a 2002, possibilitaram através da técnica do Double Repetitive Elements-PCR (DREPCR) identificar cinco grupos de pacientes, designados I, II, III, IV e V com 4, 3, 6, 2 e 2 pacientes respectivamente, portadores de cepas com 100% de similaridade e apresentando respectivamente 5, 5, 1, 2 e 5 bandas na eletroforese em gel de agarose. As cepas com mesmo perfil de resistência a drogas apresentaram perfis genéticos distintos, exceto três do grupo I. A melhor correlação epidemiológica dos grupos foi a apresentada pelo grupo I. Três membros são da mesma familía, todos portadores de cepas resistentes a isoniazida e rifampicina. São três mulheres com diagnóstico de diabetes mellitus . O primeiro caso diagnosticado de TB nessas pacientes foi em 1999 e o segundo em 2000. O terceiro caso foi diagnosticado na filha desta última em 2002. O impacto da genotipagem nestes casos, foi a análise da dinâmica de transmissão e a imediata utilização de esquema terapêutico adequado para a filha, já que era conhecida a Artur Henrique Bach Diagnóstico e Genotipagem de M.tuberculosis resistência aos antimicrobianos de primeira escolha utilizados para o tratamento das outras duas pacientes

Culturas monozoospóricas de Phytophthora, num total de dezesseis, originárias do Estado de São Paulo, foram estudadas quanto as suas características morfológicas, culturais, moleculares e sensibilidade ao fungicida metalaxyl. Todos os isolados foram identificados como P. parasitica pelas suas características morfológicas, culturais e fisiológicas. Houve diferenças estatísticas entre os isolados quanto a suas dimensões no comprimento (c), largura (l) e relação c/l dos esporângios em meio cenoura-dextrose, incubados a 25ºC; assim como na capacidade de produção de clamidósporos no mesmo meio. Todos os isolados foram sensíveis ao metalaxul, todos crescendo na concentração de 1 ppm, a maioria na concentração de 10 ppm e alguns isolados a 100 ppm, apesar que no último caso ao redor do disco que continha micélio do patógeno. O qual vem a demonstrar que há genótipos com alguma tolerância ao produto no Estado de São Paulo. Essa tolerância teve uma distribuição independente do local de isolamento e a análise molecular com a técnica de RAPD não foi suficientemente sensível par detectar grupos com similaridade genética com essa característica. A técnica de RAPD conseguiu distinguir os isolados, mas observou-se uma baixa diversidade genética entre eles, apesar de terem sido isolados em diferentes pontos do Estado. Mesmo assim houve diferenças entre isolados provindos da mesma cultura original / not available

Culturas monozoospóricas de Phytophthora, num total de dezesseis, originárias do Estado de São Paulo, foram estudadas quanto as suas características morfológicas, culturais, moleculares e sensibilidade ao fungicida metalaxyl. Todos os isolados foram identificados como P. parasitica pelas suas características morfológicas, culturais e fisiológicas. Houve diferenças estatísticas entre os isolados quanto a suas dimensões no comprimento (c), largura (l) e relação c/l dos esporângios em meio cenoura-dextrose, incubados a 25ºC; assim como na capacidade de produção de clamidósporos no mesmo meio. Todos os isolados foram sensíveis ao metalaxul, todos crescendo na concentração de 1 ppm, a maioria na concentração de 10 ppm e alguns isolados a 100 ppm, apesar que no último caso ao redor do disco que continha micélio do patógeno. O qual vem a demonstrar que há genótipos com alguma tolerância ao produto no Estado de São Paulo. Essa tolerância teve uma distribuição independente do local de isolamento e a análise molecular com a técnica de RAPD não foi suficientemente sensível par detectar grupos com similaridade genética com essa característica. A técnica de RAPD conseguiu distinguir os isolados, mas observou-se uma baixa diversidade genética entre eles, apesar de terem sido isolados em diferentes pontos do Estado. Mesmo assim houve diferenças entre isolados provindos da mesma cultura original / not available

Marcadores genéticos foram obtidos na linhagem MT, utilizando-se a luz UV como mutagênico. Os mutantes foram isolados pelos métodos de isolamento total e enriquecimento por filtração. Foram obtidos mutantes simples, duplos e triplos. Também foram obtidos segregantes, pelo mecanismo parassexual, envolvendo mutantes da linhagem MT e E6. Os recombinantes foram analisados por auxonografia, alguns deles aquilatados quanto à estabilidade e grau de ploidia com a avaliação do crescimento em meio contendo Benlate (Benomil), determinação da quantidade de DNA e análise citológica dos conídios. Embora um possível diplóide tenha setorizado (onde um setor combinava marcas de ambos parentais) não foi confirmada sua diploidia. Provavelmente estaríamos diante de um diplóide altamente instável em que tenha sido analisado um recombinante prototrófico do mesmo. A eletroforese de esterases das linhagens selvagens, mutantes e recombinantes do heterocário E6.7 + MT12 mostrou uma grande homologia entre as linhagens MT e E6. Os recombinantes não apresentaram diploidia. / Genetic markers were obtained in the MT strain, using U.V. light as mutagenic. The mutants were isolated with the methods of total isolation by the filtration enrichment technique. It was obtained simple, double and triple mutants. It was obtained segregants as well, from the parasexual mecanism, envolving mutants from the MT strain and MT and E6 strains. The recombinants were analysed by auxonography, some of them evaluated for the stability and ploidy levels with evaluation of growth in Benlate (Benomyl) medium, determination of DNA quantity and citological analysis of the conidia. Although a possible diploid was setorized (where a setor combinated markers from both parent), its diploid condition was not confirmed. Probably we might have a highly unstable diploid train, in wich have been analysed a prototrophic recombinant from the same strain. The sterase electrophoreses from wild, mutant and recombinant strains from the heterokaryons E6.7 + MT12 showed a wide homology between the MT and E6 strains. The recombinants did not presented a diploid state.

A instabilidade genética observada no fungo filamentoso Aspergillus nidulans, é semelhante em muitos aspectos aos estudos em milho de McCLINTOCK (1951), com os elementos genéticos móveis. Muitos trabalhos vêm sendo realizados desde 1960 no sentido de caracterizar através da genética clássica, e mais recentemente com as técnicas modernas, o fenômeno de transposição. A instabilidade deste fungo é observada na forma de setores produzidos por uma linhagem que apresenta uma duplicação de um segmento do grupo de ligação I translocado para o grupo de ligação II. Tais setores originados por deleções, novas duplicações, outros rearranjos e por transposição podem ser classificados em melhorados, deteriorados e heterocarióticos. Este trabalho pretendeu ser mais uma contribuição aos estudos básicos dessa instabilidade. Inicialmente através do isolamento de setores deteriorados e sua análise genética via metodologia clássica, já que tais setores podem ser originados por transposição. Foram analisados 7 variantes deteriorados através do ciclo sexual e parassexual, sendo que os determinantes de deterioração foram localizados nos grupos de ligação III • IV. Utilizando-se de técnicas modernas através da obtenção, fusão e regeneração de protoplastos, a análise genética dos variantes foi feita em diplóides obtidos por fusão. Nenhuma alteração foi detectada quanto a loca1ização dos determinantes genéticos de deterioração na análise mitótica dos 7 variantes. E finalmente foi verificado se ocorre transposição pela fusão citoplasmática, através da fusão dos protoplastos. Foi encontrado 1 variante hap1óide com fenótipo deteriorado e marcadores genéticos da linhagem MSE, pela fusão de protoplastos desta linhagem com o variante V94, em menos que 600 colônias analisadas. Para se alcançar esses três objetivos, outros pequenos ensaios complementares foram feitos, como a segregação meiótica dos cruzamentos entre variantes deteriorados e a linhagem MSE, em meio com estabilizador osmótico, para diminuir a desvantagem seletiva dos deteriorados em relação as colônias normais; porcentagem de regeneração e fusão de protoplastos, um estudo comparativo das linhagens A, MSE e variantes deteriorados; verificação da toxicidade do PEG aos variantes deteriorados; efeito do fungicida banlate sobre a instabilidade dos diplóides obtidos pela metodologia clássica e fusão de protoplastos; e padrão eletroforético das enzimas do sistema esterase das linhagens A, MSE e variantes deteriorados. / The genetic instability found in the filamentous fungus Aspergillus nidulans is, in many aspects, similar to the studies of moving genetic elements in maize, done by McCLINTOCK (1951). Since 1960, many studies have been carried out with the aim of understanding the phenomena of transposition, initially by using classical genetic techniques and more recently by using modern techniques. The instabili1y of this fungus is observable by the production of sectors by strains which possess a duplicated segment of linkage group I translocated to linkage group II. Such sectors, originated either by deletions, new duplications, transposition or by other rearrangements, may be classified as improved, deteriorated or heterokaryotic. This work is a contribution to the basic studies of this instability, and is divided into three main parts. Initially, deteriorated sectors were isolated and genetica11y analyzed by classica1 methods, since such sectors may be originated by transposition. Seven deteriorated variants were analyzed by their sexual and parasexual cycles. The determinants of deterioration were found to be localized in linkage group III and IV. Modern techniques, namely the obtainment, fusion and regeneration of protoplasts, were used and genetical analysis of variants were carried out on diploides obtained by fusion. No alteration of the 1ocalization of the genetic determinants of deterioration was detected by mitotic analysis of the seven variants. Finally, protoplast fusion was used to verify if transposition occurs from citoplasmic fusion. A haploid variant, with a deteriorated phenotype and genetic markers of the MSE strain, was found from the protoplastic fusion of this strain with the variant V94, within less than 600 analyzed colonies. To achieve the above objectives, other small complementary assays were done, such as the meiotic segregation of the crosses between deteriorated variants and the MSE strain, in a medium containing osmotic stabilizer, with the aim of decreasing the selective desadvantage of the deteriorates; a comparative study of strains A and MSE and deteriorated variants as to percentage of regeneration and fusion of protoplasts; examination of PEG toxicity to deteriorated variants; effect of benlate fungicide upon the instability of the diploids obtained by classical methodology and by protoplast fusion; and the eletrophoretic pattern of the enzymes of the esterase system of strains A and MSE and deteriorated variants.

Esta pesquisa apresenta estudos genéticos na linhagem de Paecilomyces lilacinus com os seguintes objetivos: avaliar o crescimento e esporulação em diferentes meios de cultura; isolamento de mutantes auxotróficos e morfológicos nesta linhagem; verificação da ocorrência do ciclo parassexual; definição de um protocolo eficiente para o isolamento e regeneração de protoplastos, determinar a sensibilidade da linhagem ao Benomyl, e avaliar algumas características dos mutantes obtidos para uma possível utilização destes como agentes de biocontrole. Todos os objetivos acima enumerados visaram fornecer subsídios para posteriores estudos da genética básica, bem como o estabelecimento de um programa de melhoramento genético nesta linhagem. Foram ensaiados três agentes mutagênicos, a luz ultra-violeta, os raios gama e o dietilsulfato, e dois métodos de isolamento de mutantes, o método de isolamento total e o de enriquecimento por filtração. O tratamento mutagênico que se mostrou mais adequado foi aquele com radiação gama seguido pelo método de isolamento total para a seleção de colônias mutantes. Mutantes com duplas marcas auxotróficas foram utilizados e obtiveram-se películas heterocari6ticas nos cruzamentos realizados, porém, verificou-se a ocorrência de sintrofismo não sendo possível a definição do ciclo paras sexual na linhagem em estudo. O protocolo mais eficiente para o isolamento de protoplastos foi obtido a partir da protoplastização do micélio, usando como estabilizador osmótico MgSO4 0,8M onde foi obtida a melhor porcentagem de regeneração. A dose de Benomyl necessária para inibir a germinação e crescimento do fungo pelo método de semeadura foi de 3,0 ug/ml e pelo método de inoculação de 2,0 ug/ml. Foram isolados mutantes morfológicos a partir dos três agentes mutagênicos utilizados e estes apresentaram uma grande variabilidade genética em relação ao crescimento e produção de conídios, características importantes para utilização destes como possíveis agentes de biocontrole / not available

Esta pesquisa apresenta estudos genéticos na linhagem de Paecilomyces lilacinus com os seguintes objetivos: avaliar o crescimento e esporulação em diferentes meios de cultura; isolamento de mutantes auxotróficos e morfológicos nesta linhagem; verificação da ocorrência do ciclo parassexual; definição de um protocolo eficiente para o isolamento e regeneração de protoplastos, determinar a sensibilidade da linhagem ao Benomyl, e avaliar algumas características dos mutantes obtidos para uma possível utilização destes como agentes de biocontrole. Todos os objetivos acima enumerados visaram fornecer subsídios para posteriores estudos da genética básica, bem como o estabelecimento de um programa de melhoramento genético nesta linhagem. Foram ensaiados três agentes mutagênicos, a luz ultra-violeta, os raios gama e o dietilsulfato, e dois métodos de isolamento de mutantes, o método de isolamento total e o de enriquecimento por filtração. O tratamento mutagênico que se mostrou mais adequado foi aquele com radiação gama seguido pelo método de isolamento total para a seleção de colônias mutantes. Mutantes com duplas marcas auxotróficas foram utilizados e obtiveram-se películas heterocari6ticas nos cruzamentos realizados, porém, verificou-se a ocorrência de sintrofismo não sendo possível a definição do ciclo paras sexual na linhagem em estudo. O protocolo mais eficiente para o isolamento de protoplastos foi obtido a partir da protoplastização do micélio, usando como estabilizador osmótico MgSO4 0,8M onde foi obtida a melhor porcentagem de regeneração. A dose de Benomyl necessária para inibir a germinação e crescimento do fungo pelo método de semeadura foi de 3,0 ug/ml e pelo método de inoculação de 2,0 ug/ml. Foram isolados mutantes morfológicos a partir dos três agentes mutagênicos utilizados e estes apresentaram uma grande variabilidade genética em relação ao crescimento e produção de conídios, características importantes para utilização destes como possíveis agentes de biocontrole / not available

A instabilidade genética observada no fungo filamentoso Aspergillus nidulans, é semelhante em muitos aspectos aos estudos em milho de McCLINTOCK (1951), com os elementos genéticos móveis. Muitos trabalhos vêm sendo realizados desde 1960 no sentido de caracterizar através da genética clássica, e mais recentemente com as técnicas modernas, o fenômeno de transposição. A instabilidade deste fungo é observada na forma de setores produzidos por uma linhagem que apresenta uma duplicação de um segmento do grupo de ligação I translocado para o grupo de ligação II. Tais setores originados por deleções, novas duplicações, outros rearranjos e por transposição podem ser classificados em melhorados, deteriorados e heterocarióticos. Este trabalho pretendeu ser mais uma contribuição aos estudos básicos dessa instabilidade. Inicialmente através do isolamento de setores deteriorados e sua análise genética via metodologia clássica, já que tais setores podem ser originados por transposição. Foram analisados 7 variantes deteriorados através do ciclo sexual e parassexual, sendo que os determinantes de deterioração foram localizados nos grupos de ligação III • IV. Utilizando-se de técnicas modernas através da obtenção, fusão e regeneração de protoplastos, a análise genética dos variantes foi feita em diplóides obtidos por fusão. Nenhuma alteração foi detectada quanto a loca1ização dos determinantes genéticos de deterioração na análise mitótica dos 7 variantes. E finalmente foi verificado se ocorre transposição pela fusão citoplasmática, através da fusão dos protoplastos. Foi encontrado 1 variante hap1óide com fenótipo deteriorado e marcadores genéticos da linhagem MSE, pela fusão de protoplastos desta linhagem com o variante V94, em menos que 600 colônias analisadas. Para se alcançar esses três objetivos, outros pequenos ensaios complementares foram feitos, como a segregação meiótica dos cruzamentos entre variantes deteriorados e a linhagem MSE, em meio com estabilizador osmótico, para diminuir a desvantagem seletiva dos deteriorados em relação as colônias normais; porcentagem de regeneração e fusão de protoplastos, um estudo comparativo das linhagens A, MSE e variantes deteriorados; verificação da toxicidade do PEG aos variantes deteriorados; efeito do fungicida banlate sobre a instabilidade dos diplóides obtidos pela metodologia clássica e fusão de protoplastos; e padrão eletroforético das enzimas do sistema esterase das linhagens A, MSE e variantes deteriorados. / The genetic instability found in the filamentous fungus Aspergillus nidulans is, in many aspects, similar to the studies of moving genetic elements in maize, done by McCLINTOCK (1951). Since 1960, many studies have been carried out with the aim of understanding the phenomena of transposition, initially by using classical genetic techniques and more recently by using modern techniques. The instabili1y of this fungus is observable by the production of sectors by strains which possess a duplicated segment of linkage group I translocated to linkage group II. Such sectors, originated either by deletions, new duplications, transposition or by other rearrangements, may be classified as improved, deteriorated or heterokaryotic. This work is a contribution to the basic studies of this instability, and is divided into three main parts. Initially, deteriorated sectors were isolated and genetica11y analyzed by classica1 methods, since such sectors may be originated by transposition. Seven deteriorated variants were analyzed by their sexual and parasexual cycles. The determinants of deterioration were found to be localized in linkage group III and IV. Modern techniques, namely the obtainment, fusion and regeneration of protoplasts, were used and genetical analysis of variants were carried out on diploides obtained by fusion. No alteration of the 1ocalization of the genetic determinants of deterioration was detected by mitotic analysis of the seven variants. Finally, protoplast fusion was used to verify if transposition occurs from citoplasmic fusion. A haploid variant, with a deteriorated phenotype and genetic markers of the MSE strain, was found from the protoplastic fusion of this strain with the variant V94, within less than 600 analyzed colonies. To achieve the above objectives, other small complementary assays were done, such as the meiotic segregation of the crosses between deteriorated variants and the MSE strain, in a medium containing osmotic stabilizer, with the aim of decreasing the selective desadvantage of the deteriorates; a comparative study of strains A and MSE and deteriorated variants as to percentage of regeneration and fusion of protoplasts; examination of PEG toxicity to deteriorated variants; effect of benlate fungicide upon the instability of the diploids obtained by classical methodology and by protoplast fusion; and the eletrophoretic pattern of the enzymes of the esterase system of strains A and MSE and deteriorated variants.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Determina la diversidad genética y la estructura poblacional de 85 aislamientos de L. (V.) braziliensis provenientes de la amazonia peruana mediante la estandarización de diez marcadores microsatélites previamente reportados. La población total presentó una alta diversidad alélica y genética, siendo la ecorregión de selva baja la de mayor diversidad con respecto a selva alta. Los diversos análisis lograron revelar la existencia de dos grupos genéticos bien establecidos independientes de su distribución geográfica, presentes como población mixta en selva alta y población uniforme en selva baja. Además, se estimó que la población de L. (V.) braziliensis presentó como estrategia reproductiva posibles eventos de clonalidad y recombinación genética junto a un modo endogámico de reproducción atribuido al aparente déficit de heterocigotos presentados. Esto podría explicar la gran plasticidad de L. (V.) braziliensis para adaptarse a los diferentes escenarios ecológicos dentro de la amazonia peruana. Asimismo, es necesario contar con nuevos estudios que contribuyan a entender la dinámica poblacional del parásito a fin de reducir la transmisión de la enfermedad. / Tesis

A Mata Atlântica brasileira é apontada como um dos mais importantes refúgios da biodiversidade em todo o planeta. Este bioma é extremamente importante sob o aspecto da riqueza de espécies vegetais e animais na sua composição e interações, porém ainda pouco conhecido e explorado sob o ponto de vista microbiológico. Um grama de solo pode conter cerca de 10 bilhões de micro-organismos de diferentes espécies. A maioria dos micro-organismos presentes nos solos não é de fácil cultivo em laboratório (somente 0.1-10% são recuperados), sendo necessária à utilização de novas técnicas para superar este problema. Muitos micro-organismos presentes no solo tem grande importância biotecnológica por produzirem compostos bioativos. O filo Actinobacteria é abundante em solos e de grande importância econômica, tendo em vista que a maioria dos antibióticos comercializados é produzido por membros deste grupo. Porém a biodiversidade microbiana da Mata Atlântica, bem como, o seu potencial biotecnológico não tem sido plenamente estudado. Poucos trabalhos mostram produtos do metabolismo microbiano com potencial em uso em indústrias e mostram menos ainda antimicrobianos produzidos por isolados bacterianos desta região. Dentro deste contexto, o presente trabalho buscou em duas alternativas metodológicas como a técnica independente de cultivo, o metagenoma, verificar a presença de genes de uma importante via biossintética os policetídeos sintases e com a técnica dependente de cultivo, selecionar prováveis bactérias produtoras de composto bioativos. O metagenoma propõe fazer uma análise do DNA total de amostras do solo, visando conhecer a informação gênica destes compostos na complexa diversidade microbiana. Desta forma, várias abordagens foram empregadas para conseguir um DNA de alto peso molecular e de qualidade suficiente para construir bibliotecas metagenômicas, e procurar nestas, genes das vias de sínteses dos policetídeos (PKS) tipo I e tipo II, que ficam agrupados em clusters que variam de tamanho entre 20 a 100 kb. Otimizamos um método de extração de DNA do solo e conseguimos obter um DNA de aproximadamente 50kb, que foi amplificado por PCR utilizando primers para regiões conservadas dos genes policetídeos sintases tipo I e II (acetosintase ) de Actinomicetos. Os fragmentos obtidos, PKS I e PKS II, com tamanho entre 600pb a 700pb, foram clonados, construído-se duas bibliotecas metagenômicas (KSI e KS II). Os clones foram sequênciados e analisados em uma árvore filogenética. A análise filogenética de genes policetídeos tipo I demonstrou similaridade com estes genes de diversas divisões de bactérias, revelando a presença de prováveis genes novos não apenas relacionados a via de PKSI, como também aos genes de PKSI híbridos com peptídeos não ribossomais. Em complemento a filogenia de policetídeos tipo II apresentou uma similaridade com genes de Actinobacteria, formando um grupo que também está relacionados a presença de prováveis genes novos de importantes famílias de antibióticos. Através do cultivo utilizando meio seletivo para o crescimento de bactérias não cultivadas, foi possível isolar sete bactérias que possuem atividade antibacteriana e/ou antifúngica. / The Brazilian Atlantic Forest is considered as one of the most important reservoir of biodiversity in the planet. This biome is extremely important for its richness of plant and animal species but although with their composition and interactions poorly known and unexplored from a microbiological perspective. One gram of soil can contain near 10 billion microorganisms of different species. The majority of the soil microorganisms is not cultivable in laboratory (only 0.1-10% are recovered), being necessary to use new techniques to overcome this problem. Many of the soil microorganisms are biotechnologically important for the production of bioactive compounds. The Actinobacteria phylum is abundant in soil and important economically due to the capacity of synthesize many antibiotics. Nevertheless, the Atlantic Forest microbial biodiversity has not been properly study. Few works show microbial metabolic products with potential use in industries and, still less, antimicrobials isolated from this biome. The present work searched two new methodological alternatives: one culture independent, the metagenome, to verify the presence of polyketide synthases biosynthetic genes; and the second, the culture dependent, to select potential bacteria producers of bioactive compounds. The metagenome intend the total DNA analysis of a sample, focusing in to know the genetic information of the complex microbial diversity. Several approaches were used in order to obtain DNA of high molecular weight and quality toconstruct metagenomic libraries and search for polyketide synthases (PKS) genes types I and II, that usually are organized in clusters of 30 to 100 kb. A DNA extraction method was optimized obtaining DNA of approximately 50 kb, and used for the detection of PKS gens by PCR approaches using primers based in polyketide synthases type I and II (ketosynthase ) conserved regions of Actinomycetes. The PKS I and PKSII amplicons (600-700 bp) were cloned and two metagenoic libraries were obtained (KS I and KS II). The clones were sequenced and analyzed in a phylogenetic tree. Phylogenetic analysis of PKS I genes reveled high similarities with genes of several divisions of bacterias pointing the presence of provable new genes related with the synthesis of polyketides produzrd by PKS I and hybrid PKS with non ribosomal peptides (NRPs). Polyketide type I genes showed similarity with Streptomyces and uncultered bacteria. The analysis of polyketide II genes showed high similarity with genes of Actinobacteria gruped in two main groups, one of them with possible new genes related with the production of important antibiotics. Using selective medium for uncultered bacteria, seven isolates were obtained being studied taxonomically and tested for the production of secondary metabolites with antibacterial and antifungal activities.