Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-01-24T15:31:02Z
No. of bitstreams: 2
Tese Parcial - Taciana A. Silva.pdf: 642153 bytes, checksum: 78a995acdf724a4ed84b1797ea4aa9fb (MD5)
license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-01-24T15:31:19Z (GMT) No. of bitstreams: 2
Tese Parcial - Taciana A. Silva.pdf: 642153 bytes, checksum: 78a995acdf724a4ed84b1797ea4aa9fb (MD5)
license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-24T15:31:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2
Tese Parcial - Taciana A. Silva.pdf: 642153 bytes, checksum: 78a995acdf724a4ed84b1797ea4aa9fb (MD5)
license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)
Previous issue date: 2017-08-10 / This study evaluated the potential of Aspergillus strains in the extracellular synthesis
of silver nanoparticles with antimicrobial properties. The 20 Aspergillus lines were
subcultured in 2% (w/v) glycoside broth at 28 °C for seven days. After monosporic
cultivation, the morphological characteristics of Czapek agar, CYA [Czapek Dox agar and
0.5% (w/v) yeast extract] and malt extract agar (MEA) were evaluated for lineage
authentication. Molecular identification was performed using rDNA ITS region sequences.
The biomass production was done by submerged fermentation in 200 mL of MGYP extract, at
28 ºC, 180 rpm. And as inoculum was added in medium 106 spores/mL medium. After 96 h,
in the mycelial extract recovered from the biomass washing AgNO3 solution was added to a
final concentration of 1 mM. The synthesis reaction of the silver nanoparticles was performed
in the absence of light, at 25 ºC, 180 rpm. The AgNPs were confirmed by UV-vis
spectroscopy and the characterization was performed by dynamic light scattering,
transmission electron microscopy, X-ray diffraction, X-ray dispersive energy and advanced
spectroscopy and spectroscopy methods. Escherichia coli, Staphylococcus aureus, S.
epidermidis, Candida albicans and Trichosporon beigelii were the test microorganisms used
in the antimicrobial activity of AgNPs by the agar diffusion technique and in the
determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The membrane was synthesized
by electro-spinning and the thickness was analyzed by scanning electron microscopy (SEM).
Subsequently, the AgNPs were added to the NanoMAC and the antimicrobial effect was
evaluated by the agar diffusion method. The cytotoxicity test was performed against human
fibroblasts (MRC5) by the method of Alarmar Blue® using 100 μg/ml of lyophilized AgNPs.
The alginate microspheres were synthesized by complex coacervation with incorporation of
AgNPs by the in situ and ex situ method and characterized in the SEM. The techniques used
in the authentication of Aspergillus were efficient, and the molecular tests classified the
strains in the niger and flavus groups. 70% of Aspergillus mediated the synthesis of AgNPs,
and the flavus group lineages were more effective. The AgNPs produced were more efficient
for yeasts, with CMI for T. beigelii of 0.11 μg/mL and for C. albicans of 0.22 μg/mL,
showing no toxicity against the MRC5 lineage. NanoMAC coated with AgNPs showed an
increase in antifungal activity of 24.22% when tested against C. albicans. The incorporation
of AgNPs into alginate microspheres potentiated the antimicrobial effect of these molecules,
especially the anti-yeast effect. Aspergillus isolates from Amazonian biome substrates are
promising for use in biological synthesis processes of AgNPs with relevant antimicrobial
properties, demonstrating great potential for use in the medical, pharmaceutical and cosmetic
fields. / Neste estudo foi avaliado o potencial de linhagens de Aspergillus na síntese
extracelular de nanopartículas de prata com propriedades antimicrobianas. As 20 linhagens de
Aspergilllus foram subcultivadas em caldo glicosado 2% (p/v) a 28 ºC por sete dias. Após
cultivo monospórico foram avaliadas as características morfológicas das culturas em ágar
Czapek, CYA [ágar Czapek Dox e extrato de levedura 0,5% (p/v)] e ágar extrato de malte
(MEA) para autenticação das linhagens. A identificação molecular foi realizada utilizando
sequencias da região ITS do rDNA. A produção de biomassa foi realizada por fermentação
submersa em 200 mL de extrato de MGYP, a 28 ºC, 180 rpm. E como inóculo foi adicionado
no meio 106 esp/mL de meio. Após 96 h, no extrato micelial recuperado da lavagem da
biomassa foi adicionado solução de AgNO3 até concentração final de 1 mM. A reação de
síntese das nanopartículas de prata foi realizada na ausência de luz, a 25 ºC, 180 rpm. A
confirmação das AgNPs foi feita por espectroscopia de UV-vis e a caracterização foi realizada
por espalhamento dinâmica de luz, microscopia eletrônica de transmissão, difração de raios-
X, energia dispersiva de raios-X e métodos de espectrometria e espectroscopia avançados.
Escherichia coli, Staphylococcus aureus, S. epidermidis, Candida albicans e Trichosporon
beigelii foram os micro-organismos teste utilizados na atividade antimicrobiana das AgNPs
pela técnica de difusão em ágar e na determinação da Concentração Mínima Inibitória (CMI).
A síntese da membrana foi feita por eletrofiação e a espessura foi analisada no microscópio
eletrônico de varredura (MEV). Posteriormente, as AgNPs foram adicionadas à NanoMAC e
o efeito antimicrobiano foi avaliado pelo método de difusão em ágar. O teste de citotoxicidade
foi realizado frente a fibroblastos humanos (MRC5) pelo método de Alarmar Blue®
utilizando 100 μg/mL de AgNPs liofilizadas. As microesferas de alginato foram sintetizadas
por coacervação complexa com incorporação de AgNPs pelo método in situ e ex situ e
caracterizadas no MEV. As técnicas utilizadas na autenticação dos Aspergillus foram
eficientes, e os testes moleculares classificaram as linhagens nos grupos niger e flavus. 70%
dos Aspergillus mediaram a síntese de AgNPs, sendo as linhagens do grupo flavus mais
eficazes. As AgNPs produzidas foram mais eficientes para leveduras, com CMI para T.
beigelii de 0,11 μg/mL e para C. albicans de 0,22 μg/mL, não apresentando toxicidade frente
a linhagem MRC5. A NanoMAC revestida com AgNPs apresentou incremento na ação
antifúngica de 24,22% quando testadas frente a C. albicans. A incorporação de AgNPs em
microesferas de alginato potencializou o efeito antimicrobiano dessas moléculas,
principalmente o efeito anti-levedura. Os Aspergillus isolados de substratos do bioma
Amazônico são promissores para utilização em processos de síntese biológica de AgNPs com
propriedades antimicrobianas relevantes, demostrando grande potencial para utilização na
área médica, farmacêutica e cosmética.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/6101 |
| Date | 10 August 2017 |
| Creators | Silva, Taciana de Amorim, 92-98119-0123 |
| Contributors | ppgbiotec@ufam.edu.br, Teixeira, Maria Francisca Simas |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Amazônia Legal - BIONORTE, UFAM, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/embargoedAccess |
| Relation | 461231695918095045, 500 |
Page generated in 0.0161 seconds