Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:40:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2016 / O sistema renina-angiotensina é descrito classicamente como um sistema responsável pelo controle do balanço hidroeletrolítico e da pressão arterial, sendo o principal efetor a angiotensina II que ativa os receptores para angiotensina II do tipo 1 (AT1). Recentemente, foi descrita a presença de todos os componentes do RAS no sistema nervoso central (SNC), ampliando a busca por possíveis funções fisiológicas e farmacológicas do sistema no SNC. No presente estudo foi investigado o envolvimento do receptor AT1, através do uso de seu antagonista seletivo losartana, sobre as alterações comportamentais associadas ao envelhecimento e à doença de Parkinson (DP). Além disso, foi investigada uma possível interação proteína-proteína entre os receptores AT1 e os receptores A2A para adenosina no SNC. Inicialmente observamos que o tratamento crônico durante 22 dias com a losartana (50 mg/kg, i.p.) foi capaz de reverter os prejuízos relacionados ao envelhecimento observados em camundongos C57Bl/6 com 13 meses de idade nos testes do escore neurológico de severidade (ENS), labirinto em Y e localização de objetos. Não foram observadas diferenças significativas nos níveis dos receptores AT1 e AT2 no córtex pré-frontal dos camundongos com 3 ou 13 meses de idade. Considerando o envelhecimento como um fator de risco para o desenvolvimento de doenças neurodegenerativas, investigamos os possíveis efeitos neuroprotetores do tratamento com losartana (50 mg/kg, i.p.) durante 22 dias em camundongos C57Bl/6 de 6 meses de idade administrados com MPTP (1 mg por narina) pela via intranasal, um modelo animal da DP. O pré-tratamento com losartana foi capaz de prevenir a morte de neurônios dopaminérgicos na via nigroestriatal bem como as alterações comportamentais induzidas pela administração do MPTP nos testes do ENS, labirinto em Y e localização de objetos. Não foram observadas alterações nos níveis dos receptores AT1 e AT2 no estriado dos animais tratados com MPTP ou losartana. Em adição, através de uma série de experimentos de biologia molecular com a técnica de transferência de energia por ressonância bioluminescente e ensaio de ligação por proximidade, demonstramos pela primeira vez a ocorrência de heterodímeros dos receptores metabotrópicos AT1 e A2A em células HEK-293-T e no estriado de camundongos. Por fim, demonstramos que a administração de doses sub-efetivas de losartana e KW-6002 (antagonista seletivo dos receptores A2A para adenosina) apresentam efeitos sinérgicos, reduzindo a frequência de movimentos involuntários mandibulares induzidos pela reserpina (1 mg/kg, s.c.) em camundongos Swiss adultos. Em conjunto, os resultados do presente estudo fornecem novas evidências do envolvimento dos receptores AT1 sobre os prejuízos comportamentais observados no envelhecimento e na DP. Além disso, o heterodímero dos receptores AT1/A2A caracterizado no presente estudo pode representar um novo alvo farmacológico para o tratamento de diversas doenças do SNC.<br> / Abstract : The classic renin-angiotensin system (RAS) is mainly associated with cardiovascular functions and body water regulation, with angiotensin II as its major effector acting through angiotensin II type AT1 receptor (AT1). It was recently disclosed the presence of all RAS components in the central nervous system (CNS), highlighting the putative physiological and pharmacological functions of RAS in the CNS. In this study, we investigated the involvement of the AT1 receptor using the selective antagonist losartan on the behavioral changes associated with aging and Parkinson's disease (PD) in mice. Moreover, a possible protein-protein interaction between the AT1 receptor and adenosine A2A receptors in the CNS was investigated. Initially we found that chronic treatment during 22 days with losartan (50 mg / kg, i.p.) was able to reverse the age-related behavioral deficits observed in C57BL/6 mice with 13 months-old of age in the neurological severity score (NSS), Ymaze and object location tests. No significant differences were observed in AT1 and AT2 receptors levels in the prefrontal cortex of mice with 3 or 13 months of age. Since aging is a major risk factor to the development of neurodegenerative diseases, we investigated possible neuroprotective effects of losartan (50 mg / kg, i.p.) treatment during 22 days in C57BL/6 mice with 6 months of age. The neurotoxin MPTP was administered by the intranasal route in a dose of 1 mg per nostril, used as an animal model of PD. The pre-treatment with losartan was able to prevent the dopaminergic neuronal death in the nigrostriatal pathway as well as the behavioral impairments induced by MPTP administration evaluated in NSS, Y-maze and object location tests. No changes in the striatal levels of AT1 and AT2 receptors was observed following the treatments with MPTP and losartan. In addition, through a series of molecular biology studies using bioluminescence resonance energy transfer and proximity ligation assays, we demonstrated for the first time the occurrence of heterodimers of metabotropic AT1 and A2A receptors in HEK-293-T cells and in the striatum of mice. Finally, we demonstrated that the coadministration of sub-effective doses of losartan and KW-6002 (a selective A2A receptor antagonist) induced synergistic effects by reducing the vacuous chewing movements induced by reserpine (1 mg / kg, s.c.) in Swiss adult mice. Altogether, these results provide new evidence of the role of AT1 receptors on the behavioral impairments associated with aging and PD. Furthermore, the AT1/A2A receptor heterodimer characterized in this study may represent a novel target for pharmacological treatment of various CNS disorders.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsc.br:123456789/167974 |
| Date | January 2016 |
| Creators | Oliveira, Paulo Alexandre de |
| Contributors | Universidade Federal de Santa Catarina, Prediger, Rui Daniel Schröder, Takahashi, Reinaldo Naoto |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 133 p.| il., grafs., tabs. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSC, instname:Universidade Federal de Santa Catarina, instacron:UFSC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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