Durante algumas das reações que levam à formação de AGEs, espécies reativas de
oxigênio são geradas e concorrem paralelamente com o estresse oxidativo e com os
danos estruturais e funcionais às macromoléculas. A formação de AGEs in vivo pode
envolver os neutrófilos, que após estímulo inflamatório, induzem importantes
enzimas geradoras de ERO, como o sistema NADPH oxidase. Entretanto ainda
permanecem questionamentos sobre a relação entre o Sistema NADPH oxidase de
neutrófilos e os AGEs. O presente trabalho visa contribuir para o entendimento do
papel do sistema NADPH oxidase e da geração de ERO na formação de AGEs e o
impacto da formação destes produtos na função renal destes animais. Foi utilizado
um modelo experimental de diabetes induzido pela injeção i.p. de aloxano em ratos
Wistar que foram divididos em 5 grupos: controle, diabético, diabético tratado com
aminoguanidina (AG), diabético tratado com apocinina (AP) e diabético tratado com
apocinina e aminoguanidina (AP+AG). A AG é um conhecido inibidor da formação de
AGEs, e a AP é inibidor do sistema NADPH oxidase. Os inibidores, ou água foram
administrados aos animais por gavagem por 50 dias após a instalação do DM. A
formação de ERO reflete a atividade de NADPH oxidase e foi mensurada em
neutrófilos peritoneais por quimiluminescência e pelo ensaio de redução do
citocromo C. A expressão das subunidades p47phox e a p67phox do sistema NADPH
oxidase foi avaliada por imunofluorescência. Os AGEs circulantes foram avaliados
por fluorescência e a função renal foi avaliada pela dosagem da uréia e creatinina
séricas e análises histológica dos rins. Pelos parâmetros avaliados neste estudo,
verificamos que o tratamento com AP, diminuiu a geração de ERO tanto no grupo
controle, quanto diabético, mas não afetou a via de formação de AGEs. O que indica
que, provavelmente, não há interrelação entre as vias do sistema da NADPH
oxidase de neutrófilos e a formação de AGEs, no nosso modelo experimental. O
tratamento com a AP atenuou a glomerulonefrite do grupo diabético. A AG, na dose
e no tempo administrado, 100mg/Kg por 50 dias, melhorou o perfil glicêmico dos
animais diabéticos, preveniu a formação de AGEs e o dano glomerular. Além disso,
o tratamento com a AG aumentou a atividade do sistema NADPH oxidase e a
expressão das subunidades citosólicas p47phox e a p67phox do sistema. Não podemos
afirmar que o aumento da atividade e expressão do sistema NADPH oxidase seja
devido à diminuição dos AGEs no nosso sistema ou um efeito isolado da
aminoguanidina, ainda não descrito na literatura. A compreensão do papel desta
enzima em modelo experimental de diabetes pode ajudar na compreensão do
processo inflamatório persistente que ocorre devido ao acúmulo desses produtos
nas complicações da doença, permitindo uma melhor adequação da abordagem
clínica e tratamento desses pacientes. / Chronic hyperglycemia observed in diabetes disease leads to the advanced glycation
end products (AGEs) formation, which are able to damage the patient organs,
especially the kidney. Some AGEs formation reactions may also generate reactive
oxygen species (ROS) and they are able to compete with oxidative stress and
structural and functional macromolecules damages. Neutrophils are immune cells
capable of expressing great amount of important ROS generator enzymes such as
NADPH oxidase just after inflammatory stimuli. There are still questions about the
relationship between the neutrophil NADPH oxidase system and AGEs despite the
information that in vivo AGEs formation may involve neutrophils. The present study
aims to contribute to the understanding of NADPH oxidase role and its ROS
generation in AGEs formation and what is the impact of these products formation in
renal function of rat model. Our experimental diabetes model was reached by alloxan
i.p. injection in rats. These animals were divided in five groups: control, diabetic,
diabetic treated with aminoguanidine (AG), diabetic treated with apocynin (AP) and
diabetic treated with apocynin and aminoguanidine (AG + AP). AG is an AGEs
formation inhibitor, and AP is a NADPH oxidase inhibitor. The inhibitors compounds
or the vehicle (water) were administered by gavage for 50 days after DM
confirmation. ROS formation reflects the NADPH oxidase activity and it was
measured by chemiluminescence assay and by cytochrome C reduction in peritoneal
neutrophils. The expression of NADPH oxidase p47phox and p67phox subunits was
assessed by immunofluorescence. Circulating AGEs were analyzed by fluorescence
and the renal function was evaluated by serum urea and creatinin concentration and
by kidney histological sections. Our results showed that AP treatment decreased
ROS generation in both control and diabetic groups, but did not affect the process of
AGEs formation. This may indicate that in our experimental model there is no
interrelation between the neutrophil NADPH oxidase system and the AGEs
formation. It was also observed that the AP attenuated glomerulonephritis in diabetic
mice. AG, at the administered dose and time, 100mg/Kg for 50 dias, improved
glycemic control, prevented the AGEs formation and prevented glomerular damage.
Furthermore, AG treatment increased the NADPH oxidase activity and its p47phox and
p67phox cytosolic subunits expression. We are not able to confirm if the increased
activity and expression of NADPH oxidase were caused by the AGEs decrease in our
system or by an isolated effect of aminoguanidine not yet described. Understanding
the NADPH oxidase role in experimental diabetes could improve the knowledge
about the persistent inflammatory process that occurs due to these products
accumulation during the disease complication, allowing a better clinical approach and
treatment of these patients. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:10.254.254.39:tede/423 |
| Date | 27 June 2011 |
| Creators | FERREIRA, Cláudia de Souza |
| Contributors | RODRIGUES, Maria Rita, http://lattes.cnpq.br/6136249880386507, CARVALHO, Carla Roberta de Oliveira, SILVA, José Maurício Schneedorf Ferreira da |
| Publisher | Universidade Federal de Alfenas, Instituto de Ciências Biomédicas, Brasil, UNIFAL-MG, Programa Multicêntrico de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UNIFAL, instname:Universidade Federal de Alfenas, instacron:UNIFAL |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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